6株水产动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因的克隆与序列分析

根据气单胞菌主要黏附素基因（ahal）、溶血素基因（hly）和细胞兴奋性肠毒素基因（alt）完整开放阅读框（0RF）设计3对特异性引物，对6株气单胞菌安徽分离株进行ahal、hly和alt基因的PCR扩增、克隆和测序。测序结果显示，安徽分离株aim、hly和alt基因的ORF大小分别为1056--1068bp、1482bp和1104N1107bp，各编码351-355、493和367-368个氨基酸。序列分析显示：（1）属于alt^＋aim^＋hly^＋毒力基因型的3个安徽分离株间aha1核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性均很高，分别为98.8％-99．3％和97％-97．6％，且与国内参考株mh／Trionyx sinensis／Guangzhou（Guangdong）／AF276639的同源性高达98．5％-99％和96.8％-97．6％。而alt^＋ahal^＋hly^-HA6安徽分离株与国外参考株Ah／Fish／Barcelona（Spain）／AF183931间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性较高，分别为95.8％和97．2％。（2）不同表型种气单胞菌安徽分离株之间及其与国内外其他分离株之间的hly核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性均较高，分别介于88．4％-100％之间和90.8％-98．7％之间。（3）5个安徽分离株（RA16、CA1、HA6、HA7和GA1）之间及其与惟一参考株之间的alt核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性分别高达93．5％-99．9％和80．2％-98．3％，但与BA17分离株间的核苷酸序列同源性（81．6％-81．7％）和推测的氨基酸序列同源性（77．5％-84．9％）均较低。这些结果表明，气单胞菌ahal和alt基因在不同毒力基因型间存在一定差异性，hly基因在不同表型种间存在较高保守性，该基因可作为研制气单胞菌基因工程亚单位疫苗的候选成分。

应用多重PCR检测水生动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布

粘附素(aha1)、气溶素(aerA)和细胞兴奋性肠毒素(alt)是气单胞菌的主要毒力因子。根据aha1、aerA和alt基因序列设计三对引物建立了可同时检测三种毒力基因的多重PCR方法(MPCR)。该方法扩增出气单胞菌的aha1大小为1087bp,aerA为721bp,alt为480bp,其敏感度为102CFU·mL-1。而对金黄色葡萄球菌、恶臭假单胞菌、拟态弧菌以及非致病性气单胞菌均未扩增出任何条带。用限制性内切酶EcoRⅤ、BamHⅠ和FbaⅠ分别酶切PCR扩增产物,均获得与预期一致的酶切图谱。用建立的MPCR对15株水生动物源气单胞菌安徽分离株进行毒力基因检测,结果显示在13株致病性气单胞菌中10株细菌的毒力基因型为alt+aha1+aerA+,2株为alt+aha1-aerA-,1株为alt+aha1+aerA-;alt、aha1和aerA基因在气单胞菌中的携带率分别为100%、84.62%和76.92%。表明气单胞菌安徽分离株的主要毒力基因型是alt+aha1+aerA+的高毒力表型,alt毒力基因普遍存在于不同表型种气单胞菌中。

猪伪狂犬病病毒安徽分离株对小鼠的致病性研究

为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)安徽分离株的毒力特征,研究以小鼠为动物模型,对13株PRV安徽分离株(代号为AH1601~AH1604、AH1701~AH1704、AH1801~AH1805)进行半数致死量(LD50)测定、病理剖检及病理组织学观察、各组织脏器的病毒载量检测。结果显示,13株PRV对小鼠的LD50在10^2.569~10^5.167 TCID50之间,其中AH1802和AH1803的LD50最低,分别为10^2.569 TCID50和10^2.833 TCID50。病理剖检可见攻毒小鼠的肝、脾、肺、肾、脑等部位均有不同程度的出血、肿大,对照组无异常;病理组织HE检查13株PRV引起小鼠各组织脏器的病变存在差异,以AH1802和AH1803引起的病变最为严重。13株PRV安徽分离株在小鼠各组织脏器中的病毒载量存在差异,其中AH1802和AH1803在脑、肝脏、脾脏中的病毒载量显著高于其他11株(P<0.05),AH1802和AH1703在肺脏中的病毒载量显著高于其他11株(P<0.05),AH1601在肾脏中的病毒载量最高,AH1703、AH1704和AH1804在脑和肺脏中的病毒载量显著高于肝脏、脾脏和肾脏。结果表明,13株PRV安徽分离株对小鼠均具有较强的致病性,但来源于不同地区的各毒株之间对小鼠的致病力呈现不同。此研究丰富了安徽猪伪狂犬病流行病学资料,为深入研究PRV安徽分离株的抗原性奠定基础。

鲁豫皖大豆产区大豆花叶病毒株系的鉴定及动态变化分析

大豆花叶病毒（soybean mosaic virus，SMV）病是一种世界性大豆病害，严重影响大豆产量和品质。对2010年采集的鲁豫皖等大豆产区14个县市的383份病毒病样进行生物纯化及血清学检测，得到64个SMV分离物及部分其他病毒分离物。利用一套统一的SMV株系鉴别寄主对64个SMV阳性分离物进行接种鉴定。根据其在10个鉴别寄主上的反应，将其归为13个株系。其中11个株系与以往在该地区鉴定的株系SC3-SC9、SC11、SC13-SC15相同，一个株系是以往在该地区没有发现而在其他地区存在的株系SC17，另外一个是以往从没有发现过的株系，它能侵染广谱抗源科丰1号，为中强毒株系，现定名为SC22。株系SC3、SC7、SC8和SC13目前仍然是鲁豫皖等地区的主要流行株系，其比率分别为23．4％、14．1％、15．6％和10．9％，是抗病育种和品种审定需要考虑的株系。本研究明确了鲁豫皖等地区SMV株系的变化趋势，可为确定当地大豆抗病育种的方向提供指导。

日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因及其编码蛋白的生物信息学和B细胞抗原表位分析

目的对从我国临床患者血液中新发现和分离出的日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因及其编码蛋白进行系统的结构与功能预测,为深入了解其在立克次体致病机制中的作用、研发斑点热临床诊断试剂和疫苗提供理论基础。方法基于日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因及其编码的氨基酸序列,应用生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性等性质和可能的B细胞抗原表位。结果日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因在3 297~3 311处存在连续15个碱基的缺失,除此之外,该分离株还有4个碱基突变。该基因编码的氨基酸数目为1 651个,蛋白质分子量为167.69 ku,共由20种氨基酸组成,其中含量较多的氨基酸是Gly;理论等电点pI为5.15,消光系数为58 805或58 680,蛋白不稳定指数为7.15,脂肪指数为88.86,总平均亲水性(GRAVY)为0.06,为疏水性蛋白;Signal peptide (Sec/SPI) Likelihood为0.567 7,有信号肽序列;存在一个Pfam区域和自转运体区,分别与细菌黏附宿主和蛋白质转运有关;蛋白二级结构中以无规卷曲为主,其次为β-折叠和α-螺旋,分别占到53.73%、30.83%和15.45%。同源模建蛋白的三级结构中,第1 308~1 651氨基酸部分在蛋白表面形成桶状结构,可能具有丝氨酸蛋白酶的作用;蛋白分子内抗原表位较丰富,共有159个可能的抗原表位,预测分数最高(0.94)的为1 269~1 284位序列。结论成功分析和预测了日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因及其编码蛋白的组成、蛋白质的二级结构、三级结构和B细胞抗原表位,为研究日本斑点热立克次体的致病机制、临床诊断试剂和亚单位疫苗的研发提供了理论支持。

J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析

从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。

蚌埠钻孔应变受抽水干扰的分析

分析了蚌埠地震台体应变受抽水的干扰情况,并给予了较合理的解释。通过对蚌埠台体应变数据的趋势变化分析,认为抽水干扰不是影响该台体应变观测数据趋势变化的主要因素;又通过区域不同台站体应变数据的对比分析,得到区域应力场是影响应变观测曲线变化的主要因素的论断。为使用该台体应变数据提供了参考,同时也为体应变的选址提供了参考实例。

鸡贫血病毒安徽分离株感染性克隆的构建及其感染特性

鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)是诱导雏鸡发生免疫抑制的重要病原之一。应用PCR方法从安徽某鸡场送检病鸡肝组织中检测并鉴定CAV,扩增病毒全基因组序列插入pc DNA3.1(+)载体,并引入含Kpn I(GGTACCCAG)酶切位点的9bp外源性标签,获得顺次连接的双拷贝CAV基因组的重组质粒,通过脂质体介导转染鸡MDCC-MSB1淋巴细胞并拯救出CAV感染性克隆毒株。经动物试验,感染性克隆毒株在接种1日龄健康雏鸡后15d,对胸腺等免疫器官指数影响较小,胸腺病变不明显,表明其感染能力减弱,为进一步分析CAV致病机制和筛选疫苗候选株奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究

为了解PRRSV安徽分离株的致病性,用从安徽省某发病猪场的病死仔猪组织中分离到的SCH07毒株接种40日龄健康仔猪,对其进行临床症状、病理剖检、病理组织学观察及抗体检测,结果表明:该毒株能引起仔猪高热、呼吸困难等明显临床症状和肺脏、淋巴结肿大、出血等剖检变化,病理组织学观察可见显著的间质性肺炎等病变,攻毒后第7天试验组仔猪血清中首次检测到抗体,并有一头在第15天死亡,证实安徽省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。

安徽江淮地区北部韧性剪切带与金矿关系

区内发育有东西向、南北向两类韧性剪切带,前者为韧性平移剪切带,后者为韧性逆冲剪切带,它们分别形成于早、中元古代末。南北向韧性剪切带是区内金矿的主要控矿构造,控制了区域的矿化分带及矿田、矿床、矿体的分布。金矿主要形成在地洼期,与叠加在早期韧性剪切带上的脆-韧性变形作用有关。

豫鄂皖交界区断裂运动特征

提取豫鄂皖交界区震源机制、钻孔应变YRY、洞体应变SSY和跨断层水准等数据中蕴含的断裂运动信息,经三维应力分析,发现:①NW向青山—晓天断裂和金寨—龙河口断裂以左行走滑运动为主,而NE向落儿岭—土地岭断裂和商城—麻城断裂呈明显的右行走滑运动,断裂的三维应力状态描述为σ_(1)和σ_(3)是水平的,σ_(2)是直立的,基本延续了中、晚更新世时期断裂的运动状态;②NW向金寨—龙河口断裂和青山—晓天断裂具有逆倾向挤压应变背景,而NE向落儿岭—土地岭断裂和商城—麻城断裂呈明显的正倾向拉张的应变特征。掌握这些断裂的二维运动特征,可为进一步推断断裂三维特征提供研究基础。

安徽白山羊新品系种质特性与遗传多样性分析

探讨了安徽白山羊新品系的种质特性和遗传多样性,为开展遗传资源保护和品种选育提供依据。本研究测定了安徽白山羊新品系、安徽白山羊、波尔山羊、萨能奶山羊4个种群的生长发育性状、血常规和血液生化指标并做差异分析,运用4个微卫星标记分析群体遗传结构、遗传分化和近交程度。结果表明:(1)新品系的体重、体长、体高、胸围显著高于安徽白山羊(P<0.05),体高和胸围与波尔山羊已无显著差异(P>0.05);(2)新品系的红细胞压积(HCT)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、白细胞总数(WBC)、血小板总数(PLT)、淀粉酶(AMS)、谷丙转氨酶(GPT)、血清钾(K)等血液指标均与其他3个种群存在不同程度的差异;(3)4个微卫星位点均呈高度多态(PIC值在0.833 6～0.917 8之间),新品系种群内近交程度较大(Fis值为0.247),新品系和萨能奶山羊遗传距离最近(0.347 8),其次是波尔山羊(0.576 5),最后是安徽白山羊(0.809 4)。结论提示,新品系肉用性能优良,适应性良好,种群内遗传分化程度较高,在进行品种选育时要防止群体内过度近交。

安徽省猪圆环病毒2型毒株的分离与鉴定

目的从病原学角度了解安徽省猪群中PCV2的感染情况。方法PCR检测临床疑似PCV2感染的病料,阳性病料接种于PK15细胞中进行PCV2的分离和增殖,再经PCR检测、间接免疫荧光试验、电镜观察,以及ORF2基因序列分析等鉴定。结果9份临床病料中均扩增出630bp的PCV2特异性DNA片段,分离鉴定获得5株PCV2,分离毒株之间及其与27株国内外参考毒株之间的ORF2基因序列同源性在87.3%～99.8%。结论首次从病原学角度证实安徽省猪群中PCV2感染的普遍存在,分离毒株与国内外参考毒株的同源性均较高。

安徽地区猪繁殖与呼吸综合征病毒临床感染与流行毒株的监测与分析

为了解和掌握安徽地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的感染状况及流行毒株的特征,利用实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒对2017—2018年安徽地区临床表现为呼吸道症状和繁殖障碍的疑似感染PRRSV的病(死)猪以及血清、唾液、精液等样品进行检测,确定PRRSV的阳性检出率以及PRRSV的毒株类型;对于未能确定的毒株,通过对PRRSV ORF5基因和Nsp2部分基因的扩增测序和比对分析进行鉴定。结果显示:安徽16个地市共计416例样品,检出PRRSV的阳性样品为223例,阳性检出率为53.6%;临床上PRRSV感染未呈现区域性和季节性,各年龄段的猪均有,呼吸道症状多见,病料组织和唾液中阳性检出率高;在223份PRRSV阳性样品中,美洲型经典毒株的阳性检出率为19.7%,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)为44.8%,PRRSV NADC30-like为13.0%,仅鉴定美洲型毒株未分离出毒株类型(美洲型毒株)为22.4%。结果表明:安徽地区猪群中PRRSV阳性检出率高,感染情况较为严重,目前临床上PRRSV的优势毒株为HP-PRRSV。