沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

NF-κB在脂多糖诱导小鼠脓毒症急性肺损伤中对ANXA2表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)诱导脓毒症急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中膜联蛋白A2(ANXA2)的表达水平,探讨ANXA2的表达与核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的关系。方法健康雄性C57BL/6小鼠18只,随机分为空白对照组、脂多糖组(LPS组)及LPS+NF-κB抑制剂组(以下为抑制剂组),每组6只。抑制剂组腹腔注射NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)50 mg/kg,1 h后LPS组及抑制剂组腹腔注射LPS 7.5 mg/kg,观察12 h,全身麻醉后采血并处死小鼠。HE染色观察肺组织病理学特征,测右肺中叶湿干重、计算湿/干重比值,ELISA法检测血清ANXA2及左肺肺泡灌洗液中ANXA2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫组化法检测肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白平均光密度(MOD)值,RT-qPCR检测肺组织中NF-κBp65、TNF-α及IL-6 mRNA相对表达量,WB检测肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65、Claudin1蛋白表达量。结果与空白对照组比较,LPS组肺组织病理损伤严重,可见细支气管上皮细胞坏死脱落、肺泡间隔增厚、肺泡腔内巨噬细胞和淋巴细胞渗出、少许出血。与空白对照组比较,LPS组右肺中叶湿/干重比值,血清ANXA2及肺泡灌洗液ANXA2、TNF-α水平,肺组织NF-κBp65、TNF-α及IL-6 mRNA相对表达量,肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白MOD值以及蛋白表达均显著升高(P<0.05),而Claudin1蛋白表达显著下降(P<0.05);与LPS组比较,抑制剂组以上各项观察指标均明显改善(P<0.05)。结论NF-κB信号通路在LPS诱导小鼠脓毒症相关ALI肺组织中可调控ANXA2的表达。

负载膜联蛋白A2(annexin A2)的间充质干细胞来源外泌体减少M2巨噬细胞极化抑制裸鼠前列腺癌细胞生长

目的探究负载膜联蛋白A2(ANXA2)的骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体(Exo-ANXA2)对前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移以及前列腺癌移植瘤生长的影响,并研究巨噬细胞是否参与该过程。方法分离与培养BALB/c裸鼠BMSC,采用负载ANXA2的慢病毒质粒感染BMSC,并分离外泌体;加入外泌体处理THP-1巨噬细胞,ELISA检测细胞上清培养液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的水平;将外泌体处理的巨噬细胞与前列腺癌细胞共培养后,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell^(TM)小室检测细胞侵袭与迁移。通过注射PC-3人前列腺癌细胞构建前列腺癌裸鼠移植瘤模型,将建模后的裸鼠随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组裸鼠尾静脉注射1 mL Exo-ANXA2,对照组注射等量PBS,于注射后第0、3、6、9、12、15、18、21天,使用游标卡尺测量计算肿瘤体积,21 d处死裸鼠并测量肿瘤组织质量,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中抗原KI-67(ki67)和CD163表达。结果骨髓分离的细胞表面CD90和CD44呈高表达,CD34和CD45呈低表达,且成骨成脂分化能力较强,成功获得BMSC;负载ANXA2的慢病毒质粒感染后,BMSC中有较强的绿色荧光蛋白表达,并成功分离到Exo-ANXA2;经Exo-ANXA2处理后,THP-1细胞中TNF-α和IL-6的水平显著升高而IL-10和IL-13的水平显著下降;Exo-ANXA2处理巨噬细胞后,显著抑制Exo-ANXA2促进PC-3细胞增殖活性、侵袭与迁移的作用;经过给予前列腺癌移植瘤裸鼠注射Exo-ANXA2后,裸鼠在第6、9、12、15、18、21天的肿瘤组织体积显著减小,21 d时裸鼠肿瘤体质量也显著减少,此外,肿瘤组织内ki67和CD163的阳性表达率均显著降低。结论Exo-ANXA2能够抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移,并抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,M2型巨噬细胞减少。

METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

目的:探究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/Wnt/β-连环蛋白(BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin)轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法:选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者,收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织,用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达,用Pearson法分析CRC组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480,分为sh-NC组、sh-RNASEH1-AS1组、NC组、sh-METTL组、si-NC组、si-BUD13组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2组、sh-METTL+pc-NC组、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组,用Lipofectamine?2000转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2、sh-METTL+pc-NC、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1分别转染SW480细胞,用qPCR法检测后SW480细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2的表达,细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480细胞的增殖能力,FCM术检测转染后各组SW480细胞的凋亡情况,细胞划痕实验检测转染后各组SW480细胞的迁移能力,WB法检测转染后各组SW480细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白表达,RNA免疫沉淀(RIP)法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果:数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR法检测结果均显示,与癌旁组织相比CRC组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β均呈明显高表达(均P<0.01),且RNASEH1-AS1表达与METTL3(r=0.698,P<0.01)、BUD13(r=0.784,P<0.01)的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3可抑制SW480的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达,促进其凋亡(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1则可促进SW480增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡(均P<0.05);RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达(均P<0.05);过表达ANXA2可部分逆转敲减RNASEH1-AS1对SW480细胞的影响(均P<0.05)。结论:METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。

NBI电子喉镜及血清ANXA2、CCL2联合诊断早期喉癌的价值

目的探讨窄带成像技术(NBI)电子喉镜及血清膜联蛋白A2(ANXA2)CC型修饰趋化因子配体2(CCL2)联合诊断早期喉癌的价值。方法回顾性选取2020年7月至2022年7月青岛市城阳区人民医院收治的喉部病变患者78例作为研究对象。入院后均行NBI电子喉镜检查及病理检查,依据病理检查结果将78例患者分为恶性组(n=56)和良性组(n=22)。比较NBI电子喉镜检查结果和病理检查结果;通过一致性分析NBI电子喉镜检查诊断早期喉癌的价值;比较两组患者血清ANXA2、CCL2水平;通过受试者工作特征(ROC)分析血清ANXA2、CCL2诊断早期喉癌的价值;通过一致性分析NBI电子喉镜及血清ANXA2、CCL2联合诊断早期喉癌的价值。结果78例患者均为单发病灶,其中病理性质为阳性(恶性)的有56例,阴性(良性)的有22例,NBI电子喉镜检查为阳性的有51例,阴性的有27例。经一致性分析,78例早期喉癌中NBI电子喉镜诊断50例阳性,敏感度为89.29%,特异度为95.45%,准确率为91.03%,Kappa=0.793。恶性组患者血清ANXA2、CCL2水平为(45.13±8.76)、(103.44±22.57)pg/mL,明显高于良性组[(20.86±2.43)、(69.33±15.24)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。经ROC分析血清ANXA2、CCL2检查诊断早期喉癌的曲线下面积分别为0.916、0.880,诊断价值较好(P<0.05)。经一致性分析,78例早期喉癌中联合诊断55例阳性,敏感度为98.21%,特异度为90.91%,准确率为96.15%,Kappa=0.904。结论早期喉癌患者通过NBI电子喉镜检查可获得较高的准确率,同时早期喉癌患者血清ANXA2、CCL2水平呈现出明显增高,另外经一致性分析证实NBI电子喉镜及血清ANXA2、CCL2联合诊断早期喉癌可获得较高的准确率。

5-aza-2dC诱导白血病细胞分化及对Annexin A1/A2表达和甲基化状态的影响

目的:观察甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxyc ityd ine,5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞分化及对膜联蛋白A1/A2(Annexin A1/A2)表达和甲基化状态的影响。方法:瑞氏染色和流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞分化的影响;RT-PCR法检测药物处理HL-60细胞前后Annexin A1和A2基因mRNA的表达水平;甲基化特异性PCR(m ethylation-spec ific PCR,MSP)检测药物处理HL-60细胞前后An-nexin A1和A2基因启动子区域CpG岛的甲基化水平。结果:5-aza-2dC处理后HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,细胞向成熟分化,且在0.5μmol/L时其促分化作用最明显;Annexin A1和A2基因在HL-60细胞中低表达,0.5μmol/L 5-aza-2dC处理HL-60细胞72 h后,Annexin A1和A2基因mRNA表达水平明显上调,而其启动子区域CpG岛甲基化水平明显降低。结论:5-aza-2dC具有促进白血病细胞分化的作用,Annexin A1和A2基因启动子去甲基化可能与5-aza-2dC诱导白血病细胞分化有关。

Annexin A2基因沉默对肺癌细胞转移能力的影响

目的:研究膜联蛋白A2(Annexin A2)基因沉默对体外培养的肺腺癌细胞系转移能力的影响。方法:体外培养4种转移潜能不同的肺腺癌细胞,采用Transwell迁移模型观察细胞的迁移能力。采用RT-PCR和Western blot分析分别检测细胞中Annexin A2 mRNA及蛋白的表达。应用RNA干扰技术沉默细胞中Annexin A2表达,观察Annexin A2基因沉默前后细胞迁移能力的变化以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的变化。结果:Annexin A2在高转移潜能的肺腺癌细胞系中呈高表达状态(P<0.01)。Annexin A2基因沉默后,高转移潜能的肺腺癌细胞的迁移能力下降(P<0.05)。p-mTOR在高转移潜能的肺癌细胞中呈明显高表达(P<0.01),Annexin A2基因沉默后,细胞中p-mTOR表达明显下降(P<0.01)。结论:Annexin A2基因沉默显著抑制肺癌细胞的转移能力,Annexin A2对肺腺癌细胞转移能力的调控可能与其激活mTOR信号通路有关。

MDR1和Anxa2在乳腺癌组织中的表达与侵袭转移的关系研究

目的:探讨乳腺癌组织中多药耐药基因(MDR1)和膜联蛋白(Anxa2)表达的相关性及其与乳腺癌转移的关系。方法:应用荧光定量PCR的方法检测20例配对的乳腺导管内癌、100例乳腺浸润性导管癌、70例癌旁正常组织中MDR1和Anxa2 mRNA的相对表达情况。结果:MDR1 mRNA在乳腺导管内癌中的表达水平明显高于癌旁正常组织(P=0.005),乳腺浸润性导管癌组织中mRNA的表达明显高于癌旁正常组织(P=0.017)和导管内癌(P=0.019 6)。Anxa2 mRNA在乳腺导管内癌中表达与癌旁正常组织相比无显著性差异(P=0.188 9),但是在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于导管内癌(P=0.000 8)和癌旁正常组织(P<0.000 1);MDR1和Anxa2 mRNA的表达升高均与患者出现淋巴结转移有关(P<0.01);2种基因在乳腺浸润性导管癌中的表达呈正相关(P<0.000 1)。结论:在肿瘤进展过程中,MDR1和Anxa2 mRNA表达上调与乳腺癌的淋巴结转移有关,二者之间表达具有正相关提示肿瘤细胞的多药耐药的获得和肿瘤侵袭转移之间有着密切联系。

慢病毒介导的Annexin A2基因沉默对胃癌AGS细胞基因表达谱的影响

目的:探讨膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)基因沉默对AGS胃癌细胞基因表达谱的改变。方法:通过慢病毒干扰AGS细胞ANXA2的表达,用人基因表达谱芯片筛选ANXA2调控的下游基因。结果:通过基因表达谱芯片筛选出ANXA2沉默后的共同差异表达基因100个,其中58个上调的基因,42个下调的基因。根据KEGG与BIOCARTA中所有Pathway的基因信息,将差异基因进行富集分析。筛选到的ANXA2调控的重要相关基因包括FGA、FGB、SERPINB2、CD55、PLAUR、MET、RAP1A和ETS1。Western blot进一步验证结果显示,沉默ANXA2后,AGS细胞中RAP1A表达水平降低,MAP2K1的蛋白表达亦降低。结论:p GC-LVANXA2 siRNA可以有效地下调胃癌AGS细胞ANXA2基因的表达。RAP1A和MAP2K1可能是AGS胃癌细胞中ANXA2参与MAPK信号通路的潜在下游调控基因。

利用pcDNA3．1／TOPO~TA克隆构建ANNEXIN A2基因的真核表达载体

目的克隆人类ANNEXIN A2基因,构建其正义真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应技术,从人类正常肺组织中扩增出人类ANNEXIN A2基因的完整编码区全长序列,通过DNA重组技术将该基因重组于pcDNA3．1／TOPO(?)TA真核表达载体上,构建出人类ANNEXIN A2基因正义表达质粒。通过DNA 测序方法对重组表达质粒进行鉴定。结果通过测序分析证实,构建的重组表达质粒目的基因片段为人类 ANNEXIN A2基因的完整编码区1 032 bp。结论构建真核表达载体的方法快速简便,适于进一步研究基因的细胞生物学作用。

Annexin a2对人乳腺癌MDA-MB-231增殖的影响及分子机制

目的研究Annexin a2的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、细胞周期分布和克隆形成能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法采用小干扰RNA(siRNA)技术下调人乳腺癌细胞中Annexin a2基因的表达,利用MTT比色法、流式细胞术、平板克隆形成实验观察Annexin a2表达水平下降后乳腺癌细胞增殖、周期分布和克隆形成能力的变化;利用免疫共沉淀和免疫荧光分析在MDA-MB-231细胞中与Annexin a2相互作用的蛋白。结果 Western blot证实siRNA干扰后MDA-MB-231细胞中Annexin a2蛋白表达水平明显下降;同时细胞增殖和克隆形成能力显著下降,细胞G0/G1期比例增高,G2/M和S期比例下降;免疫共沉淀发现Annexin a2与信号转导和转录激活因子3(STAT3)存在相互作用。结论 Annexin a2蛋白水平下降可以明显抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和克隆形成能力,Annexin a2与STAT3相互作用有可能参与乳腺癌细胞的增殖调节。

Annexin a2表达对人乳腺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的影响

目的:研究Annexin a2的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用小干扰RNA技术下调人乳腺癌细胞中Annexin a2的表达,并筛选单克隆细胞株,得到实验组克隆,阴性对照组命名为control。采用Westermblot(WB)技术检测Annexin a2蛋白水平的变化,噻唑蓝(MTT)比色法研究其对MDA-MB-231细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验、侵袭实验观察其对细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫沉淀法检测与Annexin a2相互作用的蛋白分子。结果:WB检测发现siRNA干扰后MDA-MB-231细胞中Annexin a2的蛋白表达水平明显下降,MTT增殖实验显示Annexin a2下降组细胞克隆在72、96h的增殖能力明显低于亲本和control组细胞(P均<0.05),同时细胞迁移和侵袭能力也显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫沉淀法证实Annexin a2与热休克蛋白27(HSP27)之间存在相互作用。结论:人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有较强的迁移和侵袭能力,Annexin a2蛋白水平下降可以明显抑制其增殖、迁移和侵袭能力,研究提示Annexin a2与HSP27的相互作用有可能在乳腺癌的发生、浸润和转移中起调节作用。

Anxa2基因在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨Anxa2基因表达在胃癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的相关性。方法应用实时荧光定量PCR方法检测50例胃癌及癌旁组织中Anxa2基因mRNA的表达水平;用Western blot方法检测20例胃癌及癌旁组织中Anxa2蛋白的表达水平;制作组织芯片,通过免疫组化染色分析139例胃癌Anxa2蛋白表达与临床病理特征的关系。结果 Anxa2 mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达水平分别为2.072±1.477和1.271±0.907,两组差异显著(P<0.01);胃癌组织中Anxa2蛋白的表达量(2.144±1.226)高于癌旁组织(1.269±0.736),差异显著(P<0.001)。免疫组化显示Anxa2定位于肿瘤细胞膜,在胃癌组织中的阳性率为49.6%(69/139),高于癌旁组织18.7%(26/139),两者差异显著(P<0.001),且Anxa2过表达与胃癌组织分化、淋巴结转移和临床分期密切相关(P<0.05)。结论 Anxa2过表达与胃癌的发生、发展密切相关,可能是新的治疗靶点或预后评估指标。

ANXA2与ERp29在正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织中的表达与定位

旨在探讨膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)与内质网蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29,ERp29)基因在正常与临床型乳房炎绵羊(Ovis aries)乳腺组织中的表达与定位。选取正常与临床型乳房炎绵羊各3只,采集乳腺组织,通过qRT-PCR、免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织中ANXA2与ERp29mRNA和蛋白的表达与定位。结果表明,ANXA2在临床型乳房炎绵羊乳腺组织中mRNA的表达极显著高于正常型(P<0.01),而该蛋白的表达却极显著低于正常型(P<0.01);ERp29在临床型乳房炎绵羊乳腺组织中mRNA与蛋白表达均极显著高于正常型(P<0.01)。ANXA2和ERp29分别在正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织中均有阳性反应,且主要定位于乳腺上皮细胞。综上表明,ANXA2与ERp29在正常与临床型乳房炎绵羊乳腺组织中的表达均差异显著,其可能参与了绵羊乳房炎的发生与发展的调控。

宫颈癌组织中Annexin A2和Ki-67蛋白的表达

目的:探讨宫颈癌组织中AnnexinA2和细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白的表达。方法:采用免疫组化SP法检测74例宫颈癌组织、24例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及15例正常宫颈上皮组织中AnnexinA2和Ki-67蛋白的表达,并分析其与宫颈癌患者临床病理特征的关系。结果:①从正常宫颈组织→CIN组织→宫颈癌组织,AnnexinA2蛋白阳性表达率逐渐增高[(13.3%(2/15),37.5%(9/24)和71.6%(54/74)],差异有统计学意义(χ2=23.155,P<0.001);宫颈癌组织中其阳性表达率高于CIN组织和正常宫颈组织(P均<0.001),CIN组织与正常宫颈组织中其阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);AnnexinA2蛋白表达与宫颈癌患者的年龄(χ2=7.320,P=0.007)、组织类型(χ2=7.619,P=0.006)、病理分级(χ2=6.118,P=0.013)和淋巴结转移(P=0.015)有关。②从正常宫颈组织→CIN组织→宫颈癌组织,Ki-67蛋白阳性表达率逐渐增高[26.7%(4/15),37.5%(9/24)和82.4%(61/74)],差异有统计学意义(χ2=23.041,P<0.001);宫颈癌组织中Ki-67蛋白阳性表达表达率高于CIN组织和正常宫颈组织(P均<0.001),CIN组织与正常宫颈组织中其阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);Ki-67蛋白表达与宫颈癌患者的年龄(χ2=6.830,P=0.008)、病理分级(χ2=3.972,P=0.046)和临床分期(P=0.036)有关。结论:AnnexinA2和Ki-67可作为宫颈癌诊断的辅助指标,对评价宫颈组织的恶性程度及预后可能有一定的参考价值。

钙磷脂结合蛋白annexin A2与肿瘤发生发展

annexins是一组钙离子依赖的磷脂结合蛋白。钙磷脂结合蛋白annexin A2是annexins家族的成员之一,在细胞质和细胞核中具有非常广泛的生物学功能。annexin A2是一种纤溶酶受体,与细胞的增殖、凋亡有关,具有RNA结合的特性,与DNA合成、复制有关。已有研究证实,其与多种肿瘤的发生发展、浸润、远处转移均有不同程度相关,且不同肿瘤中表达各异。其在多种组织中为癌基因,部分组织中为抑癌基因。介绍近年有关annexin A2在肿瘤发生发展领域的研究进展,为肿瘤早期诊断、治疗和预后判断提供新线索。

沉默放射抗拒鼻咽癌细胞Annexin A2基因表达对裸鼠鼻咽癌移植瘤放射敏感性的影响

目的探讨沉默Annexin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法选择36只SPF级BALB/c裸鼠,雄性,6周龄,体质量18~22 g。按随机数字表法分为对照组[CNE-2(R743)组]、单纯照射组[CNE-2(R743)/R组]、转染对照组(sh R-C组)、转染对照联合照射组(sh R-C/R组)、转染组(sh R-ANXA2组)及转染联合照射组(sh R-ANXA2/R组),每组6只。用p Gene Clip空载体及p Gene Clip-ANXA2-sh RNA载体转染CNE-2(R743)细胞构建移植瘤动物模型,用6 MV X射线在室温下行单次照射动物,总吸收剂量为10 Gy,剂量率为每分钟400 c Gy,照射野面积为20 cm×20 cm。观察各组裸鼠移植瘤照射后的生长情况、移植瘤体积变化情况,免疫组织化学检测移植瘤组织中Annexin A2的表达,Western blot检测移植瘤组织中Ku70和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 10 Gy X射线照射后3周,sh R-ANXA2/R组(168.46%±129.00%)裸鼠肿瘤生长速度最慢,与CNE-2(R743)/R组(462.26%±195.60%)和sh R-C/R组(407.99%±116.60%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默Annexin A2的sh R-ANXA2/R组(2.68%±1.29%)的相对生长速率较CNE-2(R743)/R组(5.62%±1.96%)和sh R-C/R组(5.08%±1.17%)降低(P<0.05),生长抑制率增加。sh R-ANXA2/R组的q值为1.06,提示有放射增敏作用。免疫组织化学结果显示,sh R-ANXA2组移植瘤中Annexin A2的表达较CNE-2(R743)组和sh R-C组低。各组裸鼠移植瘤组织中Ku70蛋白的表达未见明显变化(P>0.05)。sh R-ANXA2/R组(2.97±0.44)的PCNA蛋白表达水平较CNE-2(R743)/R组(2.04±0.63)和sh R-C/R组(1.26±0.38)明显升高(P<0.05)。结论沉默Annxin A2基因可以提高裸鼠体内鼻咽癌移植瘤的放射敏感性。

真核表达质粒pIRES_2-eGFP-Annexin A2的构建及其在293T细胞中的表达

目的:构建含有人Annexin A2基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP-Annexin A2,并在真核细胞293T中表达。方法:将质粒pCMV5-Annexin A2上Annexin A2基因酶切后与真核表达质粒pIRES2-eGFP连接,酶切鉴定及测序正确后,脂质体介导法转染293T细胞,荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测其基因和蛋白的表达。结果:构建的质粒pIRES2-eGFP-Annexin A2转染293T细胞后,目的基因mRNA和蛋白表达均明显增高。结论:成功构建pIRES2-eGFP-Annexin A2质粒并表达蛋白,为研究Annexin A2的生物学功能奠定了基础。

禽流感病毒NS1蛋白与ANXA2蛋白相互作用的研究

为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可能存在相互作用关系。免疫共沉淀(Co-IP)试验结果显示ANXA2与NS1蛋白之间具有稳定的相互作用关系;而且,Pull-down试验证明ANXA2与NS1蛋白之间为直接的相互作用。此外,激光共聚焦试验表明NS1和ANXA2共定位于胞浆中。本研究首次鉴定AIV NS1蛋白与宿主蛋白ANXA2间存在相互作用,为进一步研究AIV NS1蛋白的功能奠定了基础。

ANXA2、VEGF对HepG2肝癌细胞系转移的促进作用

目的:探讨膜联蛋白2(ANXA2)、血管内皮生长因子(VEGF)促进HepG2肝癌细胞系转移的作用.方法:应用Transwell、RT-PCR、Western blot,检测在不同5-氟尿嘧啶(5-FU)剂量(50、100、200、400mg/L)干扰下,ANXA2、VEGF的表达及其促进HepG2肝癌细胞系转移的作用.结果:Transwell方法检测HepG2肝癌细胞随着5-FU剂量的增加侵袭力较对照组明显降低,各剂量组间差异具有明显统计学意义(22±5,25±4,13±2,12±2vs39±7,均P<0.05);RT-PCR、Westernblot方法检测HepG2肝癌细胞中ANXA2、VEGFmRNA、蛋白的表达量随着5-FU剂量的增加逐渐下降,与对照组间的差异具有显著统计学意义(ANXA2mRNA:0.527±0.008,0.419±0.046,0.213±0.007,0.176±0.007vs0.718±0.008;ANXA2蛋白:0.669±0.055,0.484±0.072,0.180±0.034,0.099±0.009vs1.236±0.102;VEGFmRNA:0.818±0.016,0.558±0.101,0.386±0.009,0.352±0.017vs1.176±0.035;VEGF蛋白:0.960±0.085,0.962±0.056,0.376±0.069,0.219±0.008vs1.124±0.170,均P=0.000),且两者具有相关性(rp=0.900,rw=0.856).结论:随着5-FU剂量的逐渐增加,HepG2肝癌细胞侵袭率及ANXA2、VEGF表达量逐渐下降,两者呈显著正相关,提示两者在肝癌细胞的侵袭转移机制中可能起重要作用.