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结肠癌患者血清miR-370-3p、ANO1表达变化及其临床意义
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作者 张乐 李昊泽 +1 位作者 刘凯东 白月奎 《山东医药》 CAS 2023年第31期19-23,共5页
目的探讨血清微小RNA-370-3p(miR-370-3p)、茴香胺1(ANO1)表达与结肠癌病理特征及术后复发的关系。方法选取94例接受腹腔镜手术治疗的结肠癌患者为结肠癌组、50例结肠息肉患者为良性病变组、50名健康体检者为对照组。用实时荧光定量PCR... 目的探讨血清微小RNA-370-3p(miR-370-3p)、茴香胺1(ANO1)表达与结肠癌病理特征及术后复发的关系。方法选取94例接受腹腔镜手术治疗的结肠癌患者为结肠癌组、50例结肠息肉患者为良性病变组、50名健康体检者为对照组。用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-370-3p、ANO1表达。术后随访3年,复发31例(复发组)、未复发63例(未复发组)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1的靶向关系,用Pearson相关法分析结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA表达的相关性;多因素Logistic回归分析结肠癌患者术后复发的影响因素;用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-370-3p、ANO1 mRNA对结肠癌患者术后复发的预测价值。结果结肠癌组血清miR-370-3p表达低于良性病变组、对照组(P均<0.05),ANO1 mRNA表达高于良性病变组、对照组(P均<0.05),良性病变组与对照组血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1在649~655和676~682处有结合位点,结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA中表达呈负相关(r=-0.609,P<0.05)。血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达在不同分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移结肠癌患者中差异有统计学意义(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、淋巴结转移和ANO1 mRNA≥1.64为术后复发的独立危险因素,miR-370-3p≥0.74为独立保护因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-370-3p、ANO1 mRNA联合预测结肠癌患者术后复发的曲线下面积(0.876)大于二者单独预测的曲线下面积(0.786、0.783),比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论结肠癌患者血清miR-370-3p低表达、ANO1 mRNA高表达,与肿瘤分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移和术后复发有关,二者联合预测结肠癌患者术后复发的价值较高。 展开更多
关键词 结肠癌 微小RNA-370-3p 茴香胺1 临床病理特征 复发
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ET-1对血管平滑肌细胞ANO1表达的影响及机制
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作者 吴雪 张文秀 +1 位作者 赵慧 韩晓华 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2023年第3期379-382,共4页
目的探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙激活氯通道anoctamin 1(ANO1)表达的影响及机制。方法以不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0 nmol/L)ET-1处理VSMCs 24 h或用1.0 nmol/L ET-1处理不同时间(1、6、12、24、48 h)... 目的探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙激活氯通道anoctamin 1(ANO1)表达的影响及机制。方法以不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0 nmol/L)ET-1处理VSMCs 24 h或用1.0 nmol/L ET-1处理不同时间(1、6、12、24、48 h),观察ET-1对ANO1蛋白表达的影响。用磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002阻断PI3K/AKT通路,检测磷酸化AKT(p-AKT)和ANO1蛋白表达的变化。采用组织贴块法进行大鼠胸主动脉VSMCs的原代培养,采用Western blot法检测ANO1蛋白水平。结果0.1~1000.0 nmol/L ET-1处理明显促进ANO1蛋白表达(F=4.302,P<0.05),以1.0 nmol/L ET-1作用最为显著(q=8.707,P<0.05)。用1.0 nmol/L ET-1处理细胞不同时间后,ANO1蛋白表达水平增加(F=4.856,P<0.05),其中ET-1作用12~48 h ANO1表达差异具有统计学意义(q=2.903~5.673,P<0.05)。采用LY294002(10μmol/L)预处理后,与ET-1组相比较,LY294002+ET-1组p-AKT和ANO1蛋白的表达水平均显著降低(F=26.340、12.460,q=11.220、8.512,P<0.05)。结论ET-1对VSMCs的ANO1表达具有明显的上调作用,该作用可能和激活PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 内皮缩血管肽1 血管 肌细胞 平滑肌 anoctamin-1蛋白
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钙激活氯通道ANO1在小鼠心肌细胞的表达及其功能鉴定 被引量:6
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作者 侯毅鞠 许会静 +2 位作者 张雲乔 扈昕虹 郝峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期539-542,共4页
目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯... 目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯度;应用RT-PCR检测小鼠心肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在小鼠心肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。结果:RT-PCR结果表明原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1 mRNA。免疫印迹实验结果显示原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1蛋白。荧光淬灭动力学实验证实表达于小鼠心肌细胞的ANO1具有钙激活氯通道典型的阴离子转运功能特性。结论:ANO1在小鼠心肌细胞中有明确表达,并具有钙激活氯离子通道特性,提示ANO1是钙激活氯通道的分子基础。 展开更多
关键词 anoctamin 1 钙激活氯离子通道 心肌细胞
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稳定高表达ANO1对Hep-2细胞生物学性状的影响
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作者 李雅冬 张劲松 +3 位作者 杨凯 张福军 陈睿 洪苏玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期952-956,F0003,共6页
目的:建立外源性ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,并观察其对Hep-2细胞生物学性状的影响。方法:设计引物,提取头颈鳞癌患者的临床标本DNA,并以其为模板行PCR,得到ANO1基因序列片段,将ANO1片段插入到PSG-5质粒,转染入Hep-2细胞株,将稳定高表... 目的:建立外源性ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,并观察其对Hep-2细胞生物学性状的影响。方法:设计引物,提取头颈鳞癌患者的临床标本DNA,并以其为模板行PCR,得到ANO1基因序列片段,将ANO1片段插入到PSG-5质粒,转染入Hep-2细胞株,将稳定高表达ANO1的Hep-2细胞株设为实验组,空白质粒转染的Hep-2细胞株设为对照组。并利用Western blotting法和免疫荧光实验检测已转染细胞,观察ANO1的表达情况。利用Boyden小室侵袭实验和黏附实验检测Hep-2细胞生物学性状的变化。结果:成功构建含ANO1片段的pSG-5质粒,Western blotting法检测结果显示,各组均出现目的条带,实验组的相对分子质量为100 000处条带明显较浓。间接免疫荧光实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞内显现出亮绿色荧光,而空白质粒转染的Hep-2细胞内仅有较暗、较浅的绿色荧光。Boyden小室侵袭实验和黏附实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞穿膜细胞百分比和黏附细胞百分比均明显高于对照组,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功建立了ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,稳定高表达ANO1提高了Hep-2细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 头颈部肿瘤 ANO1 HEP-2细胞
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钙离子激活的氯离子通道蛋白ANO1在肿瘤发病机制中的作用 被引量:5
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作者 梅丽丽 史志周 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期759-761,768,共4页
恶性肿瘤具有高发病率和高死亡率的特点,严重威胁人类的健康。尽管人们不断探索新的肿瘤治疗方法,但现阶段恶性肿瘤的预后仍然较差。因此深入研究肿瘤的发病机制,鉴定致癌基因,无论对于分子标志物的开发还是治疗靶点的确定都具有重要意... 恶性肿瘤具有高发病率和高死亡率的特点,严重威胁人类的健康。尽管人们不断探索新的肿瘤治疗方法,但现阶段恶性肿瘤的预后仍然较差。因此深入研究肿瘤的发病机制,鉴定致癌基因,无论对于分子标志物的开发还是治疗靶点的确定都具有重要意义。近年的研究表明,恶性肿瘤常发生钙离子激活氯离子通道蛋白1(anoctamin 1,ANO1)的扩增和过表达,并且其功能改变与肿瘤的发生发展密切相关,因此本文将综述ANO1在恶性肿瘤细胞增殖、 展开更多
关键词 anoctamin 1 肿瘤 增殖 转移
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ANO1稳定转染细胞模型的构建及生理特性
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作者 徐连秀 狄文慧 +4 位作者 吴明达 刘雪莹 王国庆 胡江 郝峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期52-57,共6页
为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微... 为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微镜观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在FRT细胞的表达情况;用流式细胞仪检测细胞模型纯度;用荧光淬灭动力学试验检测细胞模型功能;用细胞模型或膜片钳技术研究ANO1生理特性,包括转运阴离子的特性、不同激活剂及抑制剂对ANO1的调控作用、ANO1电流受Ca^(2+)调控作用等。结果显示,倒置荧光显微镜下可观察到清晰的荧光信号;荧光淬灭动力学试验证明,此细胞模型可用于ANO1生理特性的研究;ANO1具有转运阴离子的特性;钙激活氯离子通道激活剂可以使ANO1开放且呈剂量依赖关系;钙激活氯离子通道抑制剂可抑制ANO1开放且具有剂量依赖关系;ANO1电流呈现钙依赖的特性;高浓度Ca^(2+)引起Run-down现象。结果表明,本试验成功构建ANO1细胞模型,ANO1具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性。 展开更多
关键词 阴离子通道1 细胞模型 膜片钳 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞 钙激活氯离子通道
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基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建
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作者 丁旭 肖云萍 +4 位作者 郭佳琦 解宇浩 张嘉琪 聂文营 郝峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期519-526,共8页
目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋... 目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。 展开更多
关键词 Piezo 1 FRT细胞 钙激活氯离子通道蛋白1 YFP-H148Q/I152L 荧光淬灭动力学实验 Z′因子
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ANO1对非小细胞肺癌病理分期和复发的影响 被引量:2
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作者 叶书高 王永功 +3 位作者 陈静瑜 郑明峰 吴小波 纪勇 《江苏医药》 CAS 2015年第22期2713-2715,F0003,共4页
目的探讨anoctamin 1(ANO1)表达对非小细胞肺癌(NSCLC)病理分期和复发的影响。方法Ⅰ-Ⅲ期NSCLC患者64例。采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测肺癌组织和癌旁组织ANO1和表皮生长因子受体(EGFR)的表达;行肿瘤病理分级评定,随访术... 目的探讨anoctamin 1(ANO1)表达对非小细胞肺癌(NSCLC)病理分期和复发的影响。方法Ⅰ-Ⅲ期NSCLC患者64例。采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测肺癌组织和癌旁组织ANO1和表皮生长因子受体(EGFR)的表达;行肿瘤病理分级评定,随访术后的复发。结果 NSCLC存在ANO1的过表达。ANO1阳性组28例中,26例(93%)的EGFR表达阳性;ANO1阳性组的病理Ⅲ期病例的比例高于ANO1阴性组(50%vs.17%)(P<0.01)。随访1年,ANO1阳性组的复发率高于ANO1阴性组(39%vs.17%)(P<0.01)。结论 ANO1在NSCLC组织存在过表达。ANO1的过表达促进EGFR的过表达,提高NSCLC的病理分级评分和复发率。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 ANO1 表皮生长因子受体
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Discovery of 4-arylthiophene-3-carboxylic acid as inhibitor of ANO1 and its effect as analgesic agent 被引量:1
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作者 Yuxi Wang Jian Gao +9 位作者 Song Zhao Yan Song Han Huang Guiwang Zhu Peili Jiao Xiangqing Xu Guisen Zhang Kewei Wang Liangren Zhang Zhenming Liu 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2021年第7期1947-1964,共18页
Anoctamin 1(ANO1)is a kind of calcium-activated chloride channel involved in nerve depolarization.ANO1 inhibitors display significant analgesic activity by the local peripheral and intrathecal administration.In this s... Anoctamin 1(ANO1)is a kind of calcium-activated chloride channel involved in nerve depolarization.ANO1 inhibitors display significant analgesic activity by the local peripheral and intrathecal administration.In this study,several thiophenecarboxylic acid and benzoic acid derivatives were identified as novel ANO1 inhibitors through the shape-based virtual screening,among which the 4-arylthiophene-3-carboxylic acid analogues with the best ANO1 inhibitory activity were designed,synthesized and compound 42(IC;=0.79μmol/L)was finally obtained.Compound 42 selectively inhibited ANO1 without affecting ANO2 and intracellular Ca;concentration.Subsequently,the analgesic effect was investigated by intragastric administration in pain models.Compound 42 significantly attenuated allodynia which was induced by formalin and chronic constriction injury.Through homology modeling and molecular dynamics,the binding site was predicted to be located near the calcium-binding region betweenα6 andα8.Our study validates ANO1 inhibitors having a significant analgesic effect by intragastric administration and also provides selective molecular tools for ANO1-related research. 展开更多
关键词 ANO1(anoctamin 1 TMEM16A) INHIBITOR Synthesis Structure-activity relationship ANALGESIA
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以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节剂研究进展
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作者 王昱曦 刘振明 +1 位作者 张桂森 张亮仁 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1505-1514,共10页
钙激活氯通道是广泛存在于人体内的一种阴离子通道,参与分泌、心肌细胞去极化、神经信号传导等多种生理活动。ANO1蛋白是钙激活氯通道的分子基础之一,对ANO1蛋白进行调节能够产生多种药效作用,例如镇痛、治疗痢疾、哮喘、抑制肿瘤等。... 钙激活氯通道是广泛存在于人体内的一种阴离子通道,参与分泌、心肌细胞去极化、神经信号传导等多种生理活动。ANO1蛋白是钙激活氯通道的分子基础之一,对ANO1蛋白进行调节能够产生多种药效作用,例如镇痛、治疗痢疾、哮喘、抑制肿瘤等。近10年来发展出许多ANO1蛋白调节剂筛选测试方法,虽然筛选出一系列以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节分子,但是这些分子的药理学作用却并不一致。本文从筛选方法、构效关系、潜在应用前景等多方面对ANO1蛋白调节分子的研究进展进行论述。 展开更多
关键词 钙激活氯通道 ANO1 调节剂 构效关系 测活方法 潜在应用
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ANO1钙激活氯通道生理功能及调节机制概述 被引量:2
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作者 赵玉洁 马可 肖庆桓 《解剖科学进展》 2018年第2期201-204,共4页
Anoctamin 1(ANO1)钙激活氯通道广泛存在于身体各个组织,促进细胞增殖,参与感觉传递,调节血压,促进上皮细胞分泌,促进肿瘤细胞迁移等。ANO1功能异常可导致许多疾病,例如癌症、高血压、胃肠道运动紊乱、囊性纤维化。本文讨论ANO1在心血... Anoctamin 1(ANO1)钙激活氯通道广泛存在于身体各个组织,促进细胞增殖,参与感觉传递,调节血压,促进上皮细胞分泌,促进肿瘤细胞迁移等。ANO1功能异常可导致许多疾病,例如癌症、高血压、胃肠道运动紊乱、囊性纤维化。本文讨论ANO1在心血管、神经系统、消化系统、呼吸系统、泌尿系统发挥的作用,以及钙离子、钙调蛋白、胆固醇、细胞因子等调控ANO1的机制。 展开更多
关键词 钙激活氯通道 调节血压 生理功能 上皮细胞分泌 肿瘤细胞迁移 囊性纤维化 细胞增殖 感觉传递
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Highlights for the 6th International Ion Channel Conference:ion channel structure,function,disease and therapeutics 被引量:3
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作者 Limei Wang Kewei Wang 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期665-669,共5页
To foster communication and interactions amongst international scholars and scientists in the field of ion channel research, the 6 th International Ion Channel Conference(IICC-2017) was held between June 23–27, 2017 ... To foster communication and interactions amongst international scholars and scientists in the field of ion channel research, the 6 th International Ion Channel Conference(IICC-2017) was held between June 23–27, 2017 in the eastern coastal city of Qingdao, China. The meeting consisted of 450 attendees and 130 speakers and poster presenters. The program consisted of research progress, new findings and ongoing studies that were focused on(1) Ion channel structure and function;(2) Ion channel physiology and human diseases;(3) Ion channels as targets for drug discovery;(4) Technological advances in ion channel research. An insightful overview was presented on the structure and function of the mechanotransduction channel Drosophila NOMPC(No mechanoreceptor potential C), a member of the transient receptor potential(TRP) channel family. Recent studies on Transmembrane protein 16 or Anoctamin-1(TMEM16A, a member of the calcium-activated chloride channel [CaCC] family) were summarized as well. In addition, topics for ion channel regulation, homeostatic feedback and brain disorders were thoroughly discussed. The presentations at the IICC-2017 offer new insights into our understanding of ion channel structures and functions, and ion channels as targets for drug discovery. 展开更多
关键词 Ion channel STRUCTURE FUNCTION CHANNELOPATHY Drug target MECHANOTRANSDUCTION Voltage-gated Ca2+ channel anoctamin-1 Calcium activated chloride channel M-type potassium channel GIRK channel Voltage-gated sodium channel
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