PI3K/Akt/NF-κB通路调控ABCB1/P-gp介导的人结肠癌细胞多药耐药的研究

背景与目的:肿瘤的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的表达是目前化疗失败的主要原因,磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)信号通路参与肿瘤多药耐药的发生,但PI3K信号通路与多药耐药的机制尚不明确。本研究旨在探讨PI3K/Akt信号通路及其下游靶点对ATP结合蛋白亚家族1抗体(ATP-binding cassette sub-family B member 1,ABCB1)基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP细胞多药耐药性的调控作用。方法:将PI3K特异性抑制剂LY294002(20μmol/L)处理人结肠癌HCT-116/L-OHP细胞2 h后,用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法(Western blot)检测相关耐药蛋白P-gp、肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)、多药耐药相关蛋白-2(multidrug resistance-related-2,MRP-2)以及PI3K/Akt信号通路下游蛋白Akt、p-Akt、IκB、p-IκB的表达变化;CHIP—PCR法检测核转录因子κB(NF-κB)对ABCB1基因启动子的影响。结果:阻断PI3K/Akt信号通路激活后,奥沙利铂对HCT-116/L-OHP细胞的半数抑制浓度(IC50)由(157.48±16.73)μg/mL降至(53.68±3.18)μg/mL,逆转指数为2.93(P<0.01)。HCT-116/L-OHP细胞的p-Akt、p-IκB和P-gp的表达水平明显下降(P<0.01),Akt、IκB、LRP和MRP-2表达变化不明显。NF-κB能够与ABCB1基因启动子区域结合。结论:阻断PI3K/AKT信号通路可增强人结肠癌HCT-116/L-OHP耐药细胞的药物敏感性,抑制p-Akt和p-IκB的磷酸化表达水平,逆转P-gp介导的肠癌多药耐药。

黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究

目的：阐明黄连素即盐酸小檗碱（berberine hydrochloride,BBR）对人肝癌细胞HepG2中细胞色素P450 3A4（CYP3A4）、多药耐药基因（MDR1）在mRNA和蛋白水平表达的影响,初步探讨黄连素对CYP3A4和P-糖蛋白（P-gp）的影响及其作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度的BBR（1～100μg/mL）对HepG2细胞活力的影响;并在BBR对HepG2细胞毒性较小的浓度范围进行实验,实验分为空白对照组、不同浓度BBR组、诱导剂利福平（Rif）组以及不同浓度BBR和Rif共同给药组,与对数期HepG2细胞孵育48h后,提取细胞RNA和总蛋白,分别采用荧光定量PCR法（QRT-PCR）、Western blot法检测HepG2细胞中CYP3A4、MDR1、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）、视黄醛X受体（retinoid X receptor,RXR）在mRNA水平的表达和CYP3A4、P-gp在蛋白水平的表达。结果：BBR在1～40μg/mL浓度范围内对HepG2细胞毒性小,细胞活力大于80%,超过40μg/mL时对细胞毒性大,细胞存活率低。Western blot结果表明,与空白对照组比较,0.1、0.5和2μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有诱导作用（P〈0.05）,但10、40μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有显著性抑制作用（P〈0.01）。QRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,10、20和40μg/mL BBR均对HepG2细胞PXR、CYP3A4、MDR1mRNA的表达有显著抑制作用（P〈0.05）;但10μg/mL BBR对RXR mRNA无显著性影响（P〉0.05）,20、40μg/mL BBR对RXR mRNA有显著的抑制作用（P〈0.05）。结论：黄连素对CYP3A4和P-gp有双向作用,低剂量时诱导,高剂量时抑制,并且其作用很有可能通过PXR信号通路实现。

注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用(英文)

目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用。②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg·kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg·kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1A2和CYP3A的诱导作用。③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂。结果①CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12μmol·L-1vs 840μmol·L-1;CYP2C9:3.362μmol·L-1vs 704μmol·L-1;CYP2C19:3.236μmol·L-1vs 306μmol·L-1;CYP2D6:0.117μmol·L-1vs 2660μmol·L-1;CYP3A4:0.078μmol·L-1vs 1780μmol·L-1)。②与空白对照组(86.4±6.3)nmol·g-1.min-1相比,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP1A2活性分别为83.4±6.6,82.5±4.0和(83.4±6.6)nmol·g-1.min-1。与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1.min-1比较,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9±1.0)nmol·g-1.min-1,无显著性差异。③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g.L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75μmol·g-1.min-1),无显著性差异。结论SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物。

Ni-P-α-Al_2O_3纳米复合电镀工艺研究

采用复合电镀技术,在黄铜表面制备高硬度的Ni-P-α-Al2O3纳米复合镀层,研究了阴极电流密度、纳米α-Al2O3添加量、镀液pH值、镀液温度和电镀时间对镀层硬度的影响。结果表明:当镀液温度为45℃,阴极电流密度为4A/dm2,镀液pH值为4.0,电镀时间为40min,镀液中纳米α-Al2O3的质量浓度为10g/L时,所得镀层均匀、细致、平滑,经适当热处理后,显微硬度可达到1 332HV。

cAMP-PKA信号通路对L02细胞药物代谢酶CYP3A的调控作用

目的探讨cAMP-PKA信号通路对细胞色素P4503A(CYP3A)在正常肝细胞L02表达中的作用。方法 L02细胞中分别加入8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)10μmol.L-1及抑制剂H-89 10μmol.L-1,培养48 h,分别采用完整细胞免疫组化法、Western印迹法和红霉素-N-脱甲基法检测细胞中PKA、孕烷X受体(PXR)及CYP3A的表达。结果与正常对照组PKA蛋白表达(211±20)、PXR蛋白表达(0.45±0.14)及CYP3A的活性〔(0.38±0.02)μmol.min-1.g-1蛋白〕相比,8-Br-cAMP 10μmol.L-1处理后,细胞PKA蛋白表达(296±18)升高、PXR蛋白表达(0.69±0.21)升高、CYP3A的活性〔(0.43±0.01)μmol.min-1.g-1蛋白〕增强;H-89 10μmol.L-1处理后细胞中PKA蛋白表达(176±14)降低,PXR蛋白表达(0.47±0.13)及CYP3A的活性〔(0.39±0.05)μmol.min-1.g-1〕减弱,无统计学差异。结论 cAMP-PKA信号通路可能是药物代谢酶CYP3A的调控途径之一。

一种新型3P-6SS并联机构的运动控制

提出了一种新型的3P-6SS并联机构,计算了其运动学反解。制作了这种并联机构的实物样机,并搭建了该并联机构的控制系统。基于数字信号处理器(DSP)编写了控制程序,并使用3P-6SS并联机构的实物样机进行了实验。在无抬笔、落笔控制的情况下,该并联机构写出了有联笔的字母"BUPT";在有抬笔、落笔控制时,该机构写出了无连笔的数字"2008"。实验结果表明了反解算法的正确性和控制系统的有效性。

鹌鹑及与鸡的杂交后代3β-HSD和P-450c17基因的cDNA部分序列克隆

通过RT-PCR后回收测序的方法克隆了鸡、鹌鹑及其杂交后代目的基因部分cDNA序列,结果显示同源性的相似度分别为3β-HSD:鸡与鹌鹑98.06%;鸡与其杂交种96.12%;鹌鹑与其杂交种100%;鸡与NCBI已有报道的参照序列为95.15%;鹌鹑与杂交种和参照序列相比为98.06%。P.450c17:鸡与鹌鹑100%;鸡与其杂交种100%;鹌鹑与其杂交种100%;与参考鸡序列的同源性为99.29%。

苦瓜水提物对小鼠肝微粒体CYP3A及肠道P-糖蛋白的影响

目的研究苦瓜水提物对小鼠肝脏细胞色素氧化酶P450(CYP450)中CYP3A及肠道药物转运体P-糖蛋白(P-gp)的影响,以推测苦瓜水提物对人CYP3A及P-gp的影响。方法小鼠经口投与苦瓜水提物粉末低、高剂量(10,50 mg/kg,2次/d)1周,取肝脏以差速离心法分离肝微粒体,用Bradford法定量蛋白;以红霉素法和氨基比林法定量CYP3A的活性。小鼠经口投与苦瓜水提物粉末低、中、高剂量(10,50,250 mg/kg)1次,以扑热息痛(25 mg/kg)为测定P-gp活性的探针药,通过分光光度法测定血清中扑热息痛浓度来推测苦瓜水提物对肠道P-gp的影响。结果与蒸馏水对照组相比,苦瓜水提物高剂量对小鼠肝CYP3A具有明显的抑制作用(P<0.05)。苦瓜水提物250 mg/kg灌胃后30 min,可使血清中扑热息痛的浓度明显升高(P<0.05),说明其显著抑制了肠道P-gp。结论苦瓜水提物在大剂量服用时可抑制小鼠肝脏CYP3A的活性及肠道P-gp的活性。

安丝菌素P-3生产菌株Actinosynnema pretiosum ssp. auranticum的诱变育种及其发酵培养基优化

为了提高安丝菌素P-3(AP-3)的发酵产量,通过紫外诱变并运用紫外-分光光度法建立96孔板高通量快速筛选体系对原始菌株(Actinosynnema pretiosum ssp. auranticum)进行育种,筛选获得了一株产量较高的突变菌株B24-13。发酵7天后,其发酵液中AP-3的含量为112.5mg/L,是原始菌株的2.03倍。随后通过单因素优化与正交实验设计对突变菌株B24-13进行发酵培养基优化,得到最优发酵培养基组分:蔗糖25g/L,甘油15g/L,玉米浆25g/L,CaCO3 7g/L,异丁醇2g/L,缬氨酸0.5g/L,MgSO_4·7H_2O 0.5g/L,FeSO_4·7H_2O 0.01g/L。对优化结果进行验证实验,发酵7天后AP-3的产量为(127.5±6.3)mg/L。实验结果表明:通过对生产菌株的诱变育种与发酵培养基优化可有效的提高AP-3的发酵产量,也从侧面验证了该研究所建立的96孔板高通量快速筛选体系用于AP-3高产菌株的初筛是可行的。

用P-204萃淋树脂从克量Er_2O_3中分离放射性Tm

（167）Tm是一个短寿命低能γ放射性同位素,在核医学上用作骨骼和肿瘤的扫描剂。它是用加速器加速的带电粒子（p,a,d）照射靶子物（Er2O3,Ho2O3等）经过核反应产生的。通常要使用靶子物几克,而生成的放射性Tm其量不过几十微克。从克量的靶子物中分离微量的核反应产物,并获得适合核医学要求的纯度较高的产品,这就要借助于放射化学分离。从Er2O3中分离放射性铥,一般采用a—HIBA阳离子交换色层或萃取色层法。本工作使用p—204萃淋树脂柱,用2.5NHNO3作淋洗剂,用6.0NHNO3反萃。

电沉积Ni-P-纳米Al_2O_3复合层的最佳工艺及性能

为了进一步提高Ni-P合金电镀层的耐磨性能,以电沉积工艺制备了Ni-P-纳米Al2O3复合镀层。采用HX-1000TM/LCD显微硬度仪测定了复合镀层的硬度;考察了电流密度、纳米Al2O3含量、镀液温度对复合镀层硬度的影响;分别采用SEM分析技术及电化学测试技术对最大硬度镀层的微观形貌及耐蚀性能等进行了研究。结果表明:纳米Al2O3弥散分布在复合镀层中,镀层晶粒细化,与基体结合良好,硬度高,耐蚀性显著提高。

新型长侧链双羧基功能单体N-(p-乙烯基苄基)-N,N-二[2-(3-羧基丙酰氧基)乙基]胺的合成及其对牛血清白蛋白印迹识别的应用

设计合成了一种新型功能单体N-(p-乙烯基苄基)-N,N-二[2-(3-羧基丙酰氧基)乙基]胺.采用质子核磁共振、红外光谱及元素分析对单体分子的结构进行了表征,利用荧光猝灭法和同步荧光法研究了单体与牛血清白蛋白的结合机理,结果表明在pH7.4离子强度为0.5mol·L-1条件下,单体与牛血清白蛋白中的色氨酸残基形成稳定的复合物,其结合比为2∶1,表观结合常数KA=2.239×1011L2·mol-2.以该单体为功能单体,牛血清白蛋白为模板分子,N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂和多孔聚偏二氟乙烯膜为支持膜,在水介质中制备了一个分子印迹聚合物复合膜.渗透实验表明,这个印迹复合膜对模板分子牛血清白蛋白的渗透量要远高于对照的人血清白蛋白和卵蛋白,通过与非分子印迹膜对照也说明了此分子印迹复合膜对模板分子高的渗透选择性.

美国推进P-3学段教育有效衔接的策略与保障条件

近年来,为了缩小儿童的学业差距,加强幼儿园、学前班和小学低年级教育的衔接,提高整体教育效益,美国实施了推进P-3学段教育的政策。为此,美国采取提高幼儿园教育质量、促进幼儿园和学前班的有效衔接、提供全日制学前班和实行入学测试等策略,以及加强领导和问责,实现P-3学段在学习标准、课程规划和评估方式的衔接,整合财政投入,增强统筹管理等保障条件,确保这一政策的推进。

血清CCL3、P-selectin联合检测对急性肺栓塞的诊断价值

目的探讨血清趋化因子配体3(CCL3)、P选择素(P-selectin)联合检测对急性肺栓塞(APE)的诊断价值。方法选取2020年6月~2022年6月期间本院接诊的90例APE患者作为研究组。另取90例同期在本院体检,且一般资料与APE患者相匹配的健康者作为对照组。采用Pearson法分析APE患者血清CCL3、P-selectin表达水平的相关性;采用Logistic回归分析影响APE发生的相关因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCL3、P-selectin水平对APE的诊断价值。结果研究组血清CCL3、P-selectin水平均显著高于对照组(P<0.05);APE患者血清CCL3、P-selectin表达水平呈正相关(r=0.808,P<0.05);收集所有指标数据的中位数对影响APE发生的相关因素进行单因素分析,结果显示,研究组心率≥90次/min、SBP<120 mmHg和DBP<80 mmHg的患者所占比例显著高于对照组(P<0.05);心率、CCL3及P-selectin均为发生APE的危险因素(P<0.05),SBP、DBP为保护因素(P<0.05);血清CCL3、P-selectin及二者联合诊断APE的曲线下面积(AUC)分别为0.888、0.854和0.951,二者联合优于血清CCL3、P-selectin各自单独诊断(Z_(二者联合-CCL3)=2.146,Z_(二者联合-P-selectin)=2.315,P=0.022、0.039)。结论血清CCL3、P-selectin水平与APE的发生密切相关,二者联合检测对APE具有较好的诊断价值。

气相色谱法测定4,4-二甲基-1-(p-氯苯基)-1-烯-3-戊酮

建立了4,4 二甲基 (对 氯苯基) 1 烯 3 戊酮的气相色谱分析方法,变异系数0 42%,回收率在98 9%～101 1%之间。

3-[P-(P-(P-甲氧基苯乙炔基)苯乙炔基)苯氧基]丙烯酸丙酯合成与表征

以对甲氧基苯乙炔、对溴苯酚、3-氯-1-丙醇和甲基丁炔醇等为原料,通过williamson反应﹑Sonogashina和酯化等反应合成3-[P-(P-(P-甲氧基苯乙炔基)苯乙炔基)苯氧基]丙烯酸丙酯。用元素分析,IR和1HNMR等手段对产物的组成和结构进行了表征,并讨论反应物量、催化剂等因素对产率的影响。

3-(P-氨基-P-乙氧基酰基)丙酸甲酯类化合物的合成

本文合成了两个未知氯代膦酰基丙酸甲酯和十四个新化合物,初步测定了这些化合物部分样品的生物活性。

珍贵橙色束丝放线菌固体发酵合成安丝菌素P-3的工艺探索

为了探索珍贵橙色束丝放线菌(Actinosynnemapretiosum)合成安丝菌素P-3(AP-3)的固体发酵培养条件的最佳工艺,利用农副产品(玉米淀粉、玉米粉、棉籽饼粉、豆粕、豆饼粉、菜籽饼粉、麦麸、米糠)作为固料,采用单因素实验和正交实验对固体发酵培养基组成及培养条件进行摸索。得到合成AP-3固体发酵的最佳培养基组分为:玉米淀粉、豆粕及棉籽饼粉的质量配比为1∶1∶1,红糖4%,玉米浆干粉2%,CaCl2 1%。最佳固体发酵工艺条件为:初始pH为7.5,培养温度28℃,固液比(质量比)为1∶0.8,装量25g(250mL锥形瓶),接种量150mL/kg,培养时间为7天,最优条件下AP-3的产量为(26.86±1.87)mg/kg(每千克培养基)。本研究为发酵合成安丝菌素提供了新的方法与思路。