安神定志灵对注意缺陷多动障碍模型大鼠的作用研究

目的观察安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)模型大鼠的影响并探讨其作用机制。方法选择Wistar京都大鼠(Wistar Kyoto,WKY)纳入正常组。自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)作为ADHD模型动物,随机分为模型组,托莫西汀组,安神定志灵低、中、高剂量组,每组10只。予相应药物灌胃4周后,ELISA法测定大鼠前额叶、纹状体组织中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、干扰素(interferon,IFN)-α1、IFN-β1的含量。Western blot和RT-qPCR检测大鼠前额叶、纹状体组织中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9表达。结果与正常组比较,模型组大鼠前额叶与纹状体IL-1β、IL-6、TNF-α及TGF-β1表达增加(P<0.05),IFN-α1和IFN-β1表达降低(P<0.01);MMP-2、MMP-9的蛋白和mRNA水平升高(P<0.01);NGF、GDNF、BDNF蛋白和mRNA水平降低(P<0.05)。安神定志灵高剂量对模型大鼠上述指标均有明显调节作用(P<0.05)。结论安神定志灵能够通过抑制ADHD模型大鼠前额叶与纹状体炎症反应发挥神经元保护作用。

安神定志灵对自发性高血压大鼠前额叶、纹状体多巴胺和去甲肾上腺素含量的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(SHR)前额叶皮质、纹状体脑组织中多巴胺(dopamine,DA)和去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)递质含量的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:40只SHR随机分为5组(模型组、托莫西汀组、安神定志灵低、中、高剂量组),每组8只,Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只作为正常对照组。安神定志灵低、中、高剂量组分别按生药剂量11.85 g/(kg·d),23.7 g/(kg·d),47.4 g/(kg·d)灌胃,每日1次;托莫西汀组按5 mg/(kg·d)给予托莫西汀灌胃,每日1次;模型组和正常对照组每日按体重给予等量生理盐水。实验4周后处死大鼠,采用高效液相色谱-荧光法检测各组大鼠前额叶皮质、纹状体脑组织多巴胺和去甲肾上腺素含量水平。结果:(1)DA递质含量:模型组SHR大鼠前额叶皮质DA含量明显低于正常WKY大鼠(P=0.006),托莫西汀和安神定志灵高剂量均可显著增加DA含量(P<0.05),且两者之间无明显差异(P>0.05);模型组SHR大鼠纹状体部位DA含量明显高于正常WKY大鼠(P=0.000),托莫西汀和安神定志灵各剂量均能显著降低DA含量(P=0.000),且两者之间无明显统计学差异(P>0.05)。(2)NE递质含量:模型组SHR大鼠前额叶皮质NE含量明显低于正常组WKY大鼠(P=0.006),托莫西汀组、安神定志灵中剂量、高剂量组均能显著增加NE含量(P<0.05),且两两比较无统计学差异(P>0.05);模型组SHR大鼠纹状体NE的含量与正常组WKY大鼠无统计学差异(P>0.05)。结论:SHR大鼠前额叶皮质和纹状体存在NE/DA递质失调,前额叶皮质主要表现为NE/DA递质含量的降低,纹状体主要表现为DA含量的增高,与ADHD发病有关;托莫西汀及安神定志灵均能调节NE/DA含量的失衡,且两者之间无明显差异。

正交试验法优选安神定志灵的水提取工艺

目的:优选安神定志灵的最佳水提取工艺。方法:以复方中主药黄芩苷的含量为指标,UPLC测定指标成分含量,采用L9(34)正交试验设计,考察加水量(A)、煎煮时间(B)、煎煮次数(C)3个因素对其水提取工艺的影响。结果:水提工艺影响因素大小依次是A>B>C>D,确定安神定志灵颗粒的最佳水煎煮工艺条件为A1B2C1,即加8倍量水,每次1.0 h,煎煮2次。结论:该提取工艺稳定,可行。

安神定志灵对注意缺陷多动障碍模型脑组织儿茶酚-氧位甲基转移酶含量的影响

目的观察安神定志灵对注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(SHR)纹状体多巴胺转运体(DAT)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法 SHR大鼠随机分为模型对照组、安神定志灵高、中、低剂量组,Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量3.41、1.71、0.85g/mL灌胃;模型对照组和正常对照组以2mL/100g生理盐水灌胃,连续给药2周后处死大鼠,取脑用ELISA检测各组大鼠脑组织中儿茶酚-氧位甲基转移酶(COMT)含量。结果模型对照组、安神定志灵低、中、高剂量组与对照组比较具有显著性差异(P<0.01);安神定志灵低、中、高剂量组脑组织中COMT含量较模型对照组均降低,差异有显著性(P<0.01);安神定志灵中剂量组与高剂量组两组间COMT含量没有显著性差异(P>0.05);安神定志灵低剂量组与对照组两组间COMT含量差异没有显著性(P>0.05)。结论:SHR大鼠(ADHD模型鼠)脑组织中COMT含量存在改变,说明COMT在ADHD的发病中具有一定意义;安神定志灵对其有着调节作用。

安神定志灵对ADHD模型鼠前额叶、纹状体各G蛋白亚基表达的影响

目的:探讨中药复方安神定志灵对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶、纹状体中Gαs、Gαi及Golf mRNA和蛋白表达的影响。方法:将SHR大鼠运用随机区组分为模型组、利他林组、安神定志灵低剂量、中剂量、高剂量组,每组10只,另将10只WKY大鼠设为正常组。安神定志灵低、中、高剂量组分别按生药量6.7、13.4、26.7 g·kg^(-1)灌胃,每日2次;利他林组以2 mg·kg^(-1)给予利他林灌胃,每日2次;模型组和正常对照组每日按体质量给予等量双蒸水灌胃,灌胃4周后处死。分别用RT-PCR和Western Blot检测各组大鼠前额叶、纹状体中Gαs、Golf及Gαi mRNA和蛋白的表达水平。结果:模型组大鼠除前额叶皮质Gαi蛋白外,余G蛋白亚基mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常组(P<0.05或P<0.01)。经治疗后,利他林组和安神定志灵各剂量组有提高前额叶皮质、纹状体中三种G蛋白亚基Gαi mRNA和蛋白的表达水平趋势或能显著提高其表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:安神定志灵可以升高SHR大鼠前额叶皮质、纹状体Gαs、Golf及Gαi三者mRNA和蛋白的表达水平,提示安神定志灵可以激活突触后膜多巴胺受体下游不同的G蛋白亚基,进而影响下游的信号通路从而发挥治疗作用。

安神定志灵加减治疗心肝火旺型注意力缺陷多动障碍患儿的临床疗效研究

目的:观察安神定志灵加减治疗心肝火旺型注意力缺陷多动障碍患儿的临床疗效研究。方法:选取2014年6月至2016年6月在邯郸市中医院和深圳市中医院接受治疗注意力缺陷多动障碍(ADHD)患儿60例,随机分为试验组30例,对照组30例;试验组患儿使用安神定志灵进行治疗,对照组患儿使用专注达(盐酸哌甲酯控释片)进行治疗,疗程为8周;在治疗结束后到医院进行复查,使用设计好的观察表和患儿病例,对患儿的临床资料、用药情况、中医证候量表、注意缺陷多动障碍量表及血清炎性因子等进行详细记录、分析。结果:经过治疗后试验组患儿和对照组患儿在注意缺陷和多动的障碍量表积分、中医证候的总积分都有不同程度的下降,试验组患者比对照组下降的更多,两组对比差异显著(P <0. 05);经过治疗后试验组患儿中医证候疗效总的有效率是83. 33%,对照组为70. 00%,两组对比差异有统计学意义(P<0. 05);试验组患儿疾病疗效总的有效率是80. 00%,对照组为66. 67%,两组对比差异有统计学意义(P<0. 05);治疗后两组患儿血清炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α较治疗前均明显降低,差异有统计学意义(P<0. 05),且试验组效果更佳。结论:安神定志灵加减治疗心肝火旺型注意力缺陷多动障碍患儿能取得较好的治疗效果。

安神定志灵对大鼠脑突触体多巴胺释放相关因子表达的影响

目的研究安神定志灵对突触相关蛋白25(SNAP25)、突触融合蛋白1a(Synataxin 1a)的调控作用,从多巴胺释放途径探讨安神定志灵治疗注意力缺陷多动障碍(ADHD)的作用机制。方法自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)随机分为模型组,盐酸哌甲酯组(10.5μg·kg^(-1)),安神定志灵低、中、高剂量(6.75,13.35,26.70 g·kg^(-1))组,每组10只,另取10只正常血压大鼠(Wistar-Kyoto rats,WKY)作为正常组,连续灌胃给药4周。采用Percoll密度梯度离心法制备脑突触体;采用Western Blot法检测突触体SNAP25、Synataxin 1a蛋白表达;Real-time PCR法检测SNAP25、Synataxin 1a m RNA表达;免疫组化法检测纹状体SNAP25、Synataxin 1a阳性细胞表达。结果与正常组比较,模型组大鼠脑突触体SNAP25及Synataxin 1a的蛋白、m RNA、阳性细胞表达量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组的SNAP25、Synataxin 1a蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05,P<0.01);安神定志灵低、中剂量组的Synataxin1a m RNA相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),安神定志灵中、高剂量组的SNAP25 m RNA相对表达量亦显著上调(P<0.01);安神定志灵低、中剂量组的Synataxin 1a阳性细胞表达量显著升高(P<0.01),安神定志灵中、高剂量组的SNAP25阳性细胞表达量亦显著升高(P<0.01)。结论安神定志灵能够显著改善SHR大鼠脑内SNAP25、Synataxin 1a的表达,其治疗ADHD的药效机制可能与调控多巴胺释放因子相关。

安神定志灵对注意力缺陷多动障碍模型大鼠自发活动、焦虑及空间学习能力的影响

目的 探讨中药复方安神定志灵对注意力缺陷多动障碍（ADHD）模型大鼠自主活动、焦虑及空间学习能力的影响.方法 将SHR大鼠随机分为模型组、阳性对照托莫西汀组、安神定志灵低中高剂量组,每组8只,另将8只WKY大鼠设为正常组,灌胃4周.分别在给药前,给药3周后行旷场实验、高架十字迷宫及水迷宫.结果 旷场试验中安神定志灵低剂量组（P＜0.05）及托莫西汀组（P＜0.01）可减少大鼠总活动路程,Morris水迷宫实验中均可增加穿越平台次数（P＜0.01）,同时安神定志灵组可减少大鼠进入开臂次数及停留时间（P＜0.01）.结论 安神定志灵可减少大鼠自发活动,缓解焦虑行为,改善大鼠空间记忆学习能力.

安神定志灵对大鼠脑内突触体多巴胺合成、转运相关因子表达的影响

目的：研究安神定志灵对TH、VMAT2的影响,从多巴胺合成、转运途径探讨安神定志灵治疗ADHD的作用机制。方法：依据随机数字将SHR大鼠分为模型组,西药组,安神定志灵低、中、高剂量组,每组8只,另设WKY大鼠8只设为正常组,分别灌胃4周。Percoll密度梯度离心法制备脑突触体,运用Western blot法检测TH、VMAT2的表达;运用PCR技术检测TH、VMAT2 mRNA表达水平,运用免疫组织化学技术检测TH、VMAT2阳性细胞表达量。结果：与正常组相比,模型组大鼠突触体内TH、VMAT2表达量显著降低（P〈0.01）;经灌胃给药后,与模型组比较,西药组及安神定志灵中剂量组突触体内TH、VMAT2蛋白表达量、TH、VMAT2 mRNA表达量及阳性细胞数均显著上调（P〈0.01）,安神定志灵低、高剂量组疗效不稳定。结论：安神定志灵能够显著改善SHR大鼠脑内TH、VMAT2的表达,影响脑内多巴胺的合成和转运,达到提高脑内多巴胺含量,控制ADHD临床症状的目的。

安神定志灵对ADHD模型鼠前额叶皮质和纹状体多巴胺D1,D2受体表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)前额叶皮质、纹状体多巴胺受体D1,D2(DRD1,DRD2)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:30只SHR鼠随机分为5组(模型组、利他林组、安神定志灵高、中、低剂量组),每组6只,Wistar大鼠6只作为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量34.1,17.1,8.5 g.kg-1 ig;利他林组以2.1 mg.kg-1利他林ig;模型组和正常对照组以10 mL.g-1生理盐水ig。实验2周后处死大鼠,取脑分别用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠前额叶皮质、纹状体内DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平。结果:模型组与正常对照组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01);利他林组与模型组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);安神定志灵中剂量组与模型组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);安神定志灵低剂量组和高剂量组RD1,DRD2mRNA和蛋白表达水平高于空白模型组,但没有统计学差异。结论:安神定志灵可以上调SHR大鼠额叶皮质和纹状体中DRD1,DRD2 mRNA及蛋白的表达水平,说明安神定志灵在调控前额叶-纹状体通路的功能中发挥着重要的作用,而DRD1,DRD2参与了这一调节的过程,最终起到对ADHD的治疗作用。

安神定志灵对ADHD模型大鼠纹状体多巴胺转运体表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)纹状体多巴胺转运体(DAT)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:30只SHR鼠随机分为5组(模型组、利他林组、安神定志灵高、中、低剂量组),每组6只,Wistar-Kyoto(WKY)大鼠6只作为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量34.1,17.1,8.5 g.kg-1 ig;利他林组以2.1 mg.kg-1利他林ig;模型组和正常对照组以10 mL.kg-1生理盐水ig。连续给药2周后处死大鼠,取脑分别用RT-PCR和激光共聚焦显微镜检测各组大鼠纹状体多巴胺转运体(DAT)mRNA和蛋白表达水平。结果:大鼠纹状体中DAT的蛋白表达水平,组间存在差异(P<0.05),SHR模型组大鼠纹状体中DAT的蛋白表达与正常对照组比较显著增高(P<0.01);安神定志灵中、高剂量组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.01),利他林组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),安神定志灵低剂量组和模型组DAT蛋白表达相比无统计学意义。蛋白表达量从高到低依次为安神定志灵低剂量组、利他林组、安神定志灵中、高剂量组。结论:安神定志灵可以降低SHR大鼠纹状体中DAT mRNA及蛋白的表达水平,减少突触前神经元对DA的重摄取,增加突触间隙的DA浓度,改善了中枢DA的神经信号传导功能,起到对ADHD的治疗作用。

复方安神定志灵方对ADHD模型大鼠Akt、GSK-3β、β-catenin蛋白及mRNA的影响

目的:探讨安神定志灵方对自发性高血压大鼠(SHR)前额叶、纹状体及海马中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响。方法:将50只SHR大鼠随机分为模型组、利他林组(2mg/kg)、安神定志灵低、中、高剂量组(6.7、13.4、26.7g/kg),每组10只,另将10只Wistar京都大鼠设为正常组。每日灌胃2次,治疗4周后取大鼠脑组织。分别用蛋白质印迹法(Western Blot)、免疫组织化学法及实时定量荧光PCR检测各组大鼠前额叶、纹状体、海马组织中Akt、GSK-3β和β-catenin的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠前额叶、纹状体中β-catenin、Akt的蛋白及mRNA表达降低,GSK-3β相关表达增加;海马区β-catenin、Akt的OD值显著性降低(P<0.05),GSK-3β的OD值显著性升高(P<0.05)。治疗后与模型组比较,利他林及安神定志灵组能够增加大鼠前额叶、纹状体中β-catenin、Akt的蛋白及mRNA表达,降低GSK-3β的相关表达;增加大鼠海马区β-catenin、Akt的OD值,降低GSK-3β的OD值。结论:安神定志灵可以影响Akt、GSK-3β、β-catenin表达水平,其药效可能与抑制细胞凋亡、保护神经元存在关联。

安神定志灵方对自发性高血压大鼠前额叶皮质DβH、NET的影响

目的探讨安神定志灵方对注意力缺陷多动障碍(ADHD)的作用机制。方法将自发性高血压大鼠(SHR)40只随机分为模型组、择思达组和安神定志灵低、中、高剂量组,每组8只,另设Wistar京都大鼠(WKY)8只为正常1组,SD大鼠8只为正常2组。择思达组给予盐酸托莫西汀胶囊0.045mg/(kg·d)灌胃,安神定志灵低、中、高剂量组分别给予安神定志灵方6.7、13.4、26.7g/(kg·d)灌胃,正常1组、正常2组、模型组均灌胃生理盐水1.5ml/100g,均每日早晚2次灌胃,持续4周。运用蛋白免疫印迹法检测大鼠前额叶皮质多巴胺-β-羟化酶(DβH)、去甲肾上腺素转运体(NET)蛋白表达,运用PCR技术检测DβH、NET mRNA表达,运用免疫荧光技术检测DβH、NET阳性细胞表达。结果与正常1组、正常2组比较,模型组大鼠前额叶皮质DβH蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量降低,NET蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量升高(P<0.05);与模型组比较,择思达组及安神定志灵低剂量组DβH蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量升高,择思达组和安神定志灵低、中剂量组NET蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量降低(P<0.05);与择思达组比较,安神定志灵低剂量组DβH蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量升高,安神定志灵高剂量组NET蛋白、mRNA表达及阳性细胞表达量降低(P<0.05)。结论安神定志灵方可能通过调控SHR大鼠前额叶皮质DβH、NET的表达,达到控制注意力缺陷多动障碍临床症状的目的。

基于微透析技术探讨安神定志灵对SHR大鼠前额叶NE、DA及其代谢产物含量的影响

目的:研究安神定志灵对SHR大鼠多动冲动行为及前额叶皮质单胺类神经递质及其代谢产物的影响。方法:依据随机数字表将SHR大鼠分为模型组,择思达组(0.045mg/kg),安神定志灵低、中、高剂量组(6.7,13.4,26.7g/kg),每组8只,另设WKY大鼠、SD大鼠各8只为正常组,灌胃给药28d。旷场实验观察大鼠运动距离及运动速度,微透析联合HPLC-ECD检测前额叶去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和代谢产物3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量。结果:(1)给药前,模型组、择思达组及安神定志灵各剂量组运动距离及运动速度较正常组1(WKY)显著升高(P﹤0.05);给药第14、21、28天,择思达组和安神定志灵中剂量组上述指标较模型组显著降低(P﹤0.05)。(2)给药前,模型组、择思达组及安神定志灵各剂量组NE、DA、DOPAC、HVA含量较WKY组显著降低(P﹤0.05);模型组NE、HVA含量较正常组2(SD)显著降低(P﹤0.05);给药第14天,择思达组NE、DA含量较模型组显著升高(P﹤0.05);给药第28天,择思达组、安神定志灵中剂量组NE、DA含量较模型组显著升高(P﹤0.05),安神定志灵中剂量组DOPAC含量较模型组显著升高(P﹤0.05)。结论:安神定志灵能调控SHR多动、冲动行为,改善NE、DA缺乏状态。