根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。

草莓花药愈伤组织类型与状态调控研究

在草莓花药愈伤组织诱导及继代培养过程中 ,主要出现了 3种类型愈伤组织 :Ⅰ型愈伤组织表现为生长缓慢、淡绿色、块状或粒状 ;Ⅱ型愈伤组织表现为生长旺盛、鲜白色、松软状 ;Ⅲ型 (胚性 )愈伤组织表现为生长较旺盛、鲜黄色、松脆状。草莓花药在F +NAA 0 2mg L +BA 2 0mg L +水解酪蛋白 30 0mg L培养基上诱导的愈伤组织多为Ⅰ型 ,Ⅰ型愈伤组织在含 2 ,4 -D浓度较高 (3 0mg L)的MS培养基上培养 ,转变成Ⅱ型愈伤组织 ,Ⅱ型愈伤组织在MS +2 ,4 -D 0 5～ 1 0mg L +BA 0 0 5～ 0 1mg L +水解酪蛋白 4 0 0mg L +谷氨酰胺 15 0mg L +KCl 4 0 0mg L培养基上培养 ,提高了其质量 ,而后将质量好的Ⅱ型愈伤组织转到附加KNO3114 0mg L的MS培养基上 ,培养 4 0d后在愈伤组织块边缘出现了黄色、颗粒状愈伤组织 ,将此状态的愈伤组织在MS +2 ,4-D 1 0mg L +NAA 1 0mg L +ZT 0 2mg L +水解酪蛋白 4 0 0mg L +谷氨酰胺 15 0mg L +KCl4 0 0mg L培养基上培养获得了Ⅲ型 (胚性 )愈伤组织。Ⅰ型愈伤组织和Ⅱ型愈伤组织不适合建立细胞悬浮系 ,而Ⅲ型 (胚性 )愈伤组织很容易建立细胞悬浮系 ,并诱导出大量胚状体。Ⅰ型愈伤组织能再生植株 ,Ⅱ型愈伤组织不能再生植株 ,Ⅲ型 (胚性 )愈伤组织经状态调控成Ⅰ型愈伤组织后也能再生?

冬性小黑麦花药培养的基因型和培养基效应的研究

为提高冬性小黑麦的花药培养效率,以5个冬性小黑麦杂交组合的F1为材料,分别接种到四种培养基上,研究了冬性小黑麦花药离体培养中不同基因型和不同培养基以及不同培养条件对花药培养效率的影响。结果表明,基因型差异和培养基差异对愈伤组织的诱导有显著影响,不同基因型对花药的愈伤组织的再分化频率也有显著影响。对冬H329转分化后的愈伤组织进行了4℃的低温处理,不同的处理时间对绿苗分化率也有一定的影响,处理96 h绿苗分化率最高达22.22%。

用花药愈伤组织作为转化受体的水稻转基因植株的分析

以花药愈伤组织作为转化的受体材料 ,利用农杆菌介导法将已克隆的Xa2 1基因导入粳稻栽培品种台北30 9中。共获得 7个转基因株系 ,其中 2个单倍体 ,4个二倍体 ,1个混倍体。PCR、Southern、FISH以及白叶枯病抗性的分析结果都表明Xa2 1基因已整合到T0 代受体基因组。调查了 4个二倍体株系T1代的分离情况 ,经 χ2 测验证明 ,有 2个株系的分离比为 3∶1,为单拷贝插入 ,另外 2个株系不符合孟德尔分离。 4个T0

石刁柏胚状体诱导与影响因素的研究

本试验对石刁柏体细胞胚及花粉胚状体诱导进行了研究。试验表明，不同基因型对胚状体发生频率影响很大，接种材料不同会导致胚性愈伤组织形成上的差异，外源物质及植物激素种类、配比对胚状体诱导、分化起着重要作用。ＭＳ培养基附加６％蔗糖，水解酪蛋白６００ｍｇ／Ｌ，谷氨酰胺７００ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．８ｍｇ／Ｌ，胚性愈伤组织诱导率最高；而ＭＳ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋嘧啶醇０．８ｍｇ／Ｌ培养基，胚状体诱导效果最佳，平均每块愈伤组织形成体细胞胚１．７２个，花粉胚状体１．４６个。

基因型及外源因子对小麦花药培养一步成苗的影响

研究了不同基因型及几种外源因子在小麦花药培养一步成苗中的效应。结果表明 ,花药培养一步成苗的愈伤组织诱导率、绿苗分化率、白苗分化率及绿苗产量存在基因型间的差异。高蔗糖浓度有利于获得高频率的花药愈伤组织 ,但同时又提高了花药培养中白化苗频率。动力精 (KT)对花药愈伤组织诱导率影响的差异不大 ,但对绿苗分化率、绿苗产量及绿苗 /白苗 (G/ W)均有显著影响。在试验浓度范围内 ,随 KT浓度的增大 ,绿苗产量提高 ,绿苗分化率明显增加 ,而白苗分化率下降 ,因而 G/ W值明显增大。说明 KT主要是通过提高绿苗分化率和降低白苗分化率 ,增大 G/ W而提高花培一步成苗效率的。在与 KT的配合使用中 ,2 ,4 - D比

基因型对春小麦花药培养力的影响

为促进春小麦花培育种亲本选择,对6组同一母本和6组同一父本的F1组合的4个花药培养力性状进行分析。结果表明:单一亲本相同条件下,各基因型间绿苗产率与愈伤诱导率变化趋势相同,基因型间差异达显著水平;各基因型的绿苗分化率普遍高于白苗分化率,但祁30342/龙15-5814组合和克14-509/龙10-0629//龙10-1017组合的白苗分化率高于绿苗分化率。春小麦花药培养力存在基因依赖性。筛选出以龙35、龙春15-428为母本和龙35、龙13-3550为父本的F1杂交组合,是花培材料的理想组合。

冬小麦花药愈伤组织无性系穗数变异的研究

从Ｈ１代花药单倍体试管苗（９０－２４３１）基部，取未分化绿苗的胚性愈伤组织建立的体细胞无性系，获得４丛Ｒ１代结实株系。从田间Ｒ２代的观察中发现，Ｒ１代的４株后代中繁衍的８６个单株发生了变异，经过这株变异的Ｒ２Ｒ３代的穗数观察发现：（１）Ｒ２和Ｒ３代单株穗数变异范围大，穗数都明显增多，并且有超亲现象；（２）Ｒ２和Ｒ３代的单株穗数呈显著正相关；（３）穗系间的变异大于穗系内的变异；（４）Ｒ３代有２９％的穗系已稳定。

金花茶花丝愈伤组织培养及其对抗生素敏感性研究

利用金花茶幼嫩花蕾进行体外培养,建立了花丝愈伤组织培养体系。试验结果表明:外植体表面消毒70%乙醇浸泡的适宜时间为10 min;花丝愈伤组织诱导和增殖培养的适宜培养基为MS+TDZ 0.5mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+30 g/L蔗糖(pH 5.8),培养条件为25(±1)℃黑暗。卡那霉素和潮霉素对愈伤组织诱导和增殖培养的影响结果表明,卡那霉素100 mg/L或潮霉素30 mg/L导致花丝外植体全部褐化死亡;卡那霉素75 mg/L或潮霉素20 mg/L能抑制愈伤组织从花丝外植体上产生;卡那霉素100 mg/L或潮霉素25mg/L则能完全抑制愈伤组织的增殖并导致最终褐化死亡。

甘草花药培养中愈伤组织诱导和芽再生植株

用甘草单核靠边期花药离体培养,在多种培养基上诱导出傅愈伤组织。高浓度蔗糖有利于雄核发育,愈伤组织染色体数8,证明其为单倍体。经转代培养后分化出芽、再生植株。