柞蚕抗菌肽cecropin B的结构和抑菌活性及基因表达分析

抗菌肽对昆虫抵御病原微生物的侵染具有重要作用。使用在线软件分析成熟的柞蚕抗菌肽cecropin B高级结构,并与鳞翅目其他昆虫抗菌肽进行聚类分析。利用巴斯德毕赤酵母体外表达柞蚕cecropin B,并测试重组柞蚕cecropin B的抑菌活性。采用qRT-PCR方法检测3个不同品种柞蚕蛹在柞蚕肠球菌、柞蚕核型多角体病毒和柞蚕微孢子虫感染情况下,体内cecropinB基因的转录表达情况。结果显示,柞蚕cecropin B成熟肽的N端和C端分别有1个α螺旋结构,聚类分析将柞蚕cecropin B归为昆虫抗菌肽cecropin B亚型;柞蚕cecropin B在巴斯德毕赤酵母工程菌中得到体外表达,重组柞蚕cecropin B具有体外抑菌活性;柞蚕肠球菌感染的不同品种柞蚕蛹的cecropinB基因转录表达水平均上调,柞蚕核型多角体病毒或柞蚕微孢子虫感染的不同品种柞蚕蛹的cecropinB基因转录表达水平有明显差异,提示柞蚕cecropin B在柞蚕抵抗不同病原微生物的感染过程中可能具有不同的作用。

柞蚕抗菌肽抗裸鼠移植性人鼻咽癌CNE2的实验研究

目的 探讨柞蚕抗菌肽体内抗瘤效果。方法 建立荷人鼻咽癌细胞株CNE2的裸鼠模型 ,通过腹腔注射和局部注射两种途径进行治疗干预实验。用药后第 10天取血计数白细胞 ,称量肿瘤大小 ,取肿瘤组织、心脏、肝脏、肾脏作常规病理观察。结果 治疗组与对照组比较肿瘤明显缩小有显著差异 (P <0 .0 1) ,抗菌肽局部处理组癌瘤大面积出血坏死 ,较多炎细胞浸润 ,裸鼠心脏、肝脏、肾脏未见明显病变 ,外周血白细胞无明显下降。结论 提示柞蚕抗菌肽具有较明显的抗裸鼠移植性人鼻咽癌CNE2的作用 ,并且无明显毒副作用。

转柞蚕抗菌肽D基因辣椒的目的基因及表达产物检测

应用现代生物技术,从核酸和蛋白质水平对转柞蚕抗菌肽D基因辣椒第4代的目的基因进行了检测。发现所分离的柞蚕抗菌肽D基因与原设计的序列一样;辣椒组织中也含有抑菌物质,经与天然抗菌肽D对比,表明抗菌肽D基因得到了表达。

柞蚕抗菌肽A基因的克隆和表达

注射大肠杆菌E .coliK12 D31诱导的柞蚕滞育蛹在 2 5℃温育条件下 ,蛹体血淋巴可产生一系列的抗菌物质以抵御外源病菌的入侵 .本研究以脂肪体为材料 ,诱导后提取组织总RNA ,纯化mRNA并用AMV逆转录酶合成cDNA .设计并合成抗菌肽A基因 (cecA)的引物 ,通过PCR法扩增获得柞蚕抗菌肽基因 ,克隆至pBluescriptM13(+)质粒 ,获得相对分子质量 5 .9× 10 4 的融合蛋白表达产物 ,序列分析表明柞蚕抗菌肽A基因及其编码的氨基酸和天蚕具有一定的同源性 .

柞蚕抗菌肽的防腐机理研究

报道了不同浓度的柞蚕抗菌肽对大肠杆菌K_(12)D_(31)的杀灭作用．当浓度在2%以上时,杀菌速度大于细菌的增殖速度,通过蚕抗菌肽对大肠杆菌作用的电镜照片,及与山梨酸钾进行初步比较,证明抗菌肽的防腐机理为杀灭细菌。

番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因及抗菌肽D基因双抗表达载体的构建

选取分别被克隆到Ｃｏ２４质粒和ＢＳ质粒上的番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ—ＣＰ）基因和柞蚕抗菌肚Ｄ（ＣｅｃｒｏｐｉｎＤ）基因为材料，构建了单抗表达载体ＦＫ３和ＰＣｏ２５，进一步构建了双抗植物表达载体ｐＫＰＴ。这为开展单抗和多抗植物基因工程的研究提供了重要途径。

柞蚕抗菌肽D基因转化桉树培育抗青枯病株系的研究

通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化 ,获得尾叶桉 (Eucalyptusuro phylia)叶盘外植体的再生植株。将携带外源目的基因的根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养 ,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生 ,获得 2 0个小芽 ,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam) 4 0 μg·mL- 1 的E3-B培养基中诱根 ,获得 8株存活且可再生的转化子。取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性 ;分别以γ 32 p dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针 ,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹杂交检测 ,结果均呈阳性。以上结果表明 ,柞蚕抗菌肽D基因已整合到尾叶桉基因组中。将从桉树青枯病重病区分离的强毒青枯菌 (Pseudomonasspp .)株 (9910 16 )以 1× 10 9cfu·mL- 1 浓度接种转化试管苗 ,以未经转基因的尾叶桉U6 无性系试管苗为对照 ,结果表明转化苗接种死亡率 5 6 7% ,对照死亡率为 86 7% 。

天然生物防腐剂——柞蚕抗菌肽的研究

柞蚕抗菌肽是由柞蚕体内诱导产生的一类由35个氨基酸组成的具有广谱杀菌活性的多肽化合物。人畜食用后易被体内蛋白酶水解消化而对人体无毒副作用。实验表明;柞蚕菌肽对与食品腐败有关的多种革兰氏阳性及阴性细菌均有较强的杀灭作用。在酸性条件下,其抗菌活性很强,适于大多数酸性食品的防腐,其溶解性及稳定性较好。尤其是在高温条件下仍能保持很高的活性。其作用机理不同于一般化学防腐剂的抑菌作用,而是杀菌作用,是一种对人畜无毒副作用的极有前途的新型食品防腐剂。