黑枸杞花青素联合人脂肪源性血管外膜细胞支持脐血造血干/祖细胞的增殖

背景:黑枸杞花青素(Anthocyanins in Lycium ruthenicum Murr,ALRM)是黑枸杞中重要的活性成分之一,具有抗氧化、免疫调节等功效。人脂肪源性血管外膜细胞(CD146^(+)hAD-PCs)是骨髓间充质干细胞的前体细胞,在体外具有促进造血干/祖细胞增殖与分化的功能。ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血造血干/组细胞的体外支持作用有待于研究。目的:探讨ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血CD34^(+)造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。方法:CCK-8法检测不同质量浓度ALRM(0,200,400,600,800,1000 mg/L)对CD146^(+)hAD-PCs增殖的影响;流式细胞术检测ALRM对CD146^(+)hAD-PCs细胞周期的影响。共培养实验分为空白组、ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组、ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组,分析ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血CD34^(+)造血干/祖细胞的体外支持作用。共培养1,2,4周,比较扩增后细胞数量、集落形成单位数量,流式细胞仪检测细胞免疫表型,ELISA检测细胞因子水平。结果与结论:(1)ALRM质量浓度为200 mg/L时,CD146^(+)hAD-PCs活力最高,CD146^(+)hAD-PCs的G_(0)/G_(1)期细胞比例下降,S期、G_(2)/M期细胞比例上升(P<0.01)。(2)脐血CD34^(+)造血干/祖细胞数量变化:在共培养1,2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组高于ALRM组(P均<0.05),在共培养2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组高于CD146^(+)hAD-PCs组(P均<0.05),ALRM组与空白组随着共培养时间延长细胞数量逐渐减少。(3)集落形成能力及免疫表型分析:在共培养1,2周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的集落形成单位数量高于CD146^(+)hAD-PCs组和ALRM组(P均<0.05);在共培养1,2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组CD45^(+)、CD34^(+)CD33^(-)细胞比例高于CD146^(+)hAD-PCs组(P均<0.01)。(4)细胞因子变化:在共培养4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的白细胞介素2水平高于ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05);在共培养2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组白细胞介素3水平高于CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05);在共培养1周时ALRM+CD146^(+)h AD-PCs组的粒细胞集落刺激因子水平高于CD146^(+)hAD-PCs组,在共培养2周时高于ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.01);在共培养1,2,4周时ALRM组、ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的干扰素γ水平低于CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05)。(5)由于空白组无基质细胞,脐血CD34^(+)造血干/祖细胞在共培养1周之后就无法计数,未进行免疫表型、集落分析和细胞因子检测。(6)结果表明:ALRM可以通过促进CD146^(+)hAD-PCs增殖和细胞周期转化进而促进脐血CD34^(+)造血干/祖细胞的体外扩增,在造血干细胞移植研究方面具有重要价值。

黑果枸杞不同发育时期果实花色苷合成的转录组分析

【目的】探究黑果枸杞果实发育过程中花色苷合成的分子机制,对深入理解黑果枸杞花色苷合成调控网络具有重要意义。【方法】选取青果期、转色初期、转色后期、成熟期和完全成熟期的黑果枸杞果实进行转录组测序,挖掘与黑果枸杞果实花色苷合成相关的候选基因。【结果】随黑果枸杞果实发育,花色苷含量逐渐升高,成熟期及完全成熟期果实中的花色苷含量显著高于青果期、转色初期及转色后期。5个发育时期共筛选出13540个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),以青果期为对照,随果实发育,各阶段DEGs数量逐渐增多。GO分析发现,DEGs共同富集的子集有苯丙烷代谢过程、多糖分解代谢过程、苯丙烷生物合成过程、类黄酮生物合成过程、细胞壁大分子代谢过程、膜锚定成分和营养库活性通路。KEGG分析表明,DEGs显著富集于类黄酮生物合成、苯丙烷生物合成、植物激素信号转导、二苯乙烯类、二芳基庚烷类和姜辣素生物合成及角质和木栓质和蜡质的生物合成通路。分析DEGs表达量与花色苷含量相关性,筛选出参与黑果枸杞果实发育过程花色苷合成的候选基因36个,主要包括10个花色苷合成通路结构基因,4个转录因子,9个ABA、8个GA及5个JA信号转导通路基因。RT-qPCR验证其中10个基因的表达趋势,与转录组数据一致。【结论】黑果枸杞果实发育过程中,花色苷合成途径的结构基因、转录因子及ABA、GA和JA信号转导通路中基因的表达调控果实着色。

食品加工条件对黑枸杞花青素稳定性的影响

黑枸杞富含花青素,花青素具有多种生理活性,然而其稳定性较差。文章研究了不同食品加工条件对黑枸杞花青素稳定性的影响,包括温度、pH值、光照、食品添加剂和基质等。结果表明,在20℃、pH3、避光条件下的黑枸杞花青素相对稳定,保存率分别为(89.74±5.54)%、(69.56±1.44)%、(57.85±0.50)%。H_(2)O_(2)、Na_(2)SO_(3)、苯甲酸钠和3种糖(葡萄糖、蔗糖、乳糖)均会大幅降低花青素的热稳定性(65℃,30 min)。除抗坏血酸外,草酸、酒石酸和柠檬酸增强花青素热稳定性的效果依次增大。在40℃加速贮存7 d后,草酸对花青素的稳定性仍然具有较好的效果。总之,黑枸杞花青素在食品加工过程中最好在低温、酸性和避光条件下贮存,而在选用食品基质和添加剂时也应该注意其对花青素稳定性的影响。该研究结果为黑枸杞花青素类食品的加工提供了理论依据。

黑果枸杞‐酿酒葡萄混合果酒酿造过程中花色苷稳定性研究

针对黑果枸杞加工过程中存在的花色苷不稳定的关键瓶颈问题,以黑果枸杞鲜果为原料,辅以酿酒葡萄共发酵酿制果酒。分析不同酿造因子对果酒多酚、花色苷及色泽的影响;明确影响酒体中花色苷含量及稳定性的主要因子,通过正交优化试验得到最佳酒精发酵工艺。结果表明:黑果枸杞与酿酒葡萄质量比以及pH值对果酒花色苷含量和色泽影响程度较大,但对多酚含量影响作用较小,而酵母菌类型对黑果枸杞果酒多酚、花色苷和色泽影响均较小;复配酿酒葡萄可减少花色苷损失,提高黑果枸杞果酒中花色苷的稳定性。最佳酒精发酵工艺条件为黑果枸杞与酿酒葡萄质量比1∶4、果胶酶添加量0.70g/L、酿酒酵母添加量0.25g/L,发酵后酰化花色苷[矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-p-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷]含量可达(459.51±3.66)mg/L。

响应面试验优化黑果枸杞花色苷微胶囊制备工艺及其稳定性分析

建立喷雾干燥法制备黑果枸杞花色苷微胶囊的方法,考察微囊化前后花色苷的稳定性。通过单因素试验,考察壁材中阿拉伯树胶质量分数、β-环糊精质量分数、芯壁比、进料流速、进风口温度、总固形物含量对黑果枸杞花色苷包埋效率的影响,采用Box-Behnken试验设计和响应面分析优化黑果枸杞花色苷微胶囊的包埋工艺。结果表明,黑果枸杞花色苷微胶囊的最佳制备工艺为:进料转速2 000 r/min、乳化时间10 min、出风口温度80℃、阿拉伯树胶质量分数1%、β-环糊精质量分数50%、进料流速330 mL/h的恒定条件下,选择芯壁比1:2.5(g/g)、进风口温度160℃、总固形物含量22%。黑果枸杞微胶囊包埋效率平均值可达91.01%。黑果枸杞花色苷微胶囊为类似圆球状的、平均粒径(9.16±1.02)μm的玫红色粉末,受光照、空气及温度的影响,明显比微胶囊化前稳定。

黑果枸杞与5种果蔬中花色苷组成及体外抗氧化活性比较

目的：评价黑果枸杞等6种不同花色苷来源的植物材料的花色苷组成含量及体外抗氧化活性，为花色苷的利用和具有较强抗氧化活性植物资源的筛选提供参考。方法：取黑果枸杞等6种不同花色苷来源的植物材料，采用分光光度法、HPLC—MS法分析测定黑果枸杞花色苷含量及主要组成，用DPPH、ABTS和FRAP法分析其体外抗氧化活性。结果：黑果枸杞等6种不同花色苷来源的植物材料总花色苷含量的变化幅度为0-21～2．26mg／g鲜果。其中黑果总花色苷含量最高。花色苷含量分别是葡萄、树莓、紫甘蓝、蓝莓和紫薯的10．72、4．91、1．91、1．75、4．45倍。黑果枸杞花色苷的主要组分为矮牵牛素衍生物，有别于其他所测果蔬材料，其抗氧化活性也最高。结论：较之5种花色苷含量较高的天然果蔬材料，黑果枸杞中花色苷主要组分与之差异很大，总花色苷含量和抗氧化活性总体都较高，是较好的开发功能性食品的资源。

黑枸杞泡腾片的制备

采用正交试验对影响黑枸杞提取的因素进行了研究,并以发泡量和p H值等为考察指标,对填充剂种类、泡腾剂中的酸碱比例和泡腾剂总量等进行单因素试验,考察黑枸杞泡腾片的制备工艺。黑枸杞的最佳提取工艺为,9倍体积的体积分数为80%的乙醇,45℃水浴回流提取60 min。

不同产地黑果枸杞中原花青素和花青素含量研究

在溶剂提取法基础上,采用香草醛-盐酸显色法测定不同产地黑果枸杞果实原花青素的含量,采用消光系数法测定花青素含量,为人工种植高品质黑果枸杞提供理论依据。结果表明：原花青素含量范围为14.26~90.24 mg/g（烘干粉）,花青素含量范围为0.69~8.40 mg/g,黑果枸杞果实中原花青素含量明显高于花青素含量。不同地区野生黑果枸杞中原花青素和花青素依次为青海格尔木〉新疆阿克苏〉青海诺木洪〉新疆库尔勒〉内蒙古额济纳旗。此外,格尔木人工露地种植黑果枸杞原花青素含量显著高于（p〈0.05）格尔木野生的黑果枸杞,说明人工栽培黑果枸杞可能是一种更好的方式。在水、肥、阳光充足的条件下,选择性状表现好的品种,可实现北京人工栽培的黑果枸杞果实原花青素和花青素含量达到原产地人工栽培的水平。

黑枸杞花色苷提取工艺的优化

以总花色苷含量和DPPH·清除率为评价指标,在考察总花色苷含量测定方法的基础上,对黑枸杞花色苷的提取工艺进行优化。经单因素实验和L9(34)正交实验,选择提取方式为静置法,提取溶剂为1%甲酸,提取温度为75℃,料液比为1∶30 g/m L,每次提取时间为1 h和提取次数为3次。优化工艺的总花色苷含量和DPPH·清除率分别达到(450.55±5.91)mg/100 g DW和72.53%±0.60%,相比基础工艺分别提高了17.22%和21.96%。

高效液相色谱法测定黑果枸杞果实中花色苷的含量

目的:建立利用高效液相色谱测定黑果枸杞果实中花色苷含量的方法。方法:采用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,0.2%甲酸溶液-乙腈(98:2)混合溶液为流动相梯度洗脱,用紫外检测器于520nm波长处检测,控制流量为1mL/min。结果:在43～935μg/mL范围内,相关系数为0.9994,RSD为2.73%,方法加标回收率为101.01%,相对标准偏差(n=6)为2.12%。结论:本方法简便,结果可靠,适用于黑果枸杞花色苷含量的测定。

我国黑果枸杞研究进展

黑果枸杞集药用价值、经济价值、生态价值于一体,开发应用潜力巨大。现从资源分布、栽培育种、化学成分、遗传学及产品加工等方面,对近年来我国黑果枸杞研究进行了综述,以期为黑果枸杞的进一步开发和利用提供参考依据。

黑果枸杞花色苷色素微波辅助提取的优化

【目的】优化黑果枸杞花色苷色素的提取方法。【方法】以色素含量为指标,通过提取溶剂、辐射功率、提取时间、料液比和浸泡时间5个因素,对黑果枸杞花色苷色素提取效果的影响进行了单因素实验和正交实验。【结果】各因素对黑果枸杞花色苷色素含量的影响依次为:料液比>乙醇浓度>辐射功率>提取时间>浸泡时间;黑果枸杞花色苷色素的优化提取条件为:提取溶剂75%乙醇,辐射功率70W,提取时间20min,料液比1:50,浸泡时间20h,在此条件下花色苷色素提取率为15.32%,总花色苷含量936.27mg/100g。【结论】该方法具有操作简单、提取时间短、提取率高等优点。

黑果枸杞花青素微胶囊的稳定性及靶向释放特性

以黑果枸杞花青素微胶囊在水相体系中花青素的保留率为指标,采用控制变量法研究了环境因素温度、循环冻融、自然光照、紫外光照对花青素稳定性的影响,进一步研究了花青素的氧化降解规律;采用体外模拟胃肠液的方法对花青素微胶囊的稳定性和靶向释放特性进行了研究。结果表明:花青素微胶囊的热降解符合一级降解动力学模型;微胶囊化花青素在低温和低p H条件下较稳定,光照能够降低花青素的稳定性。在体外模拟胃肠液稳定性实验中,花青素微胶囊在胃液中比肠液中稳定,与未包埋花青素溶液相比,花青素微胶囊溶液在模拟胃液中其花青素的保留率提高了14.8%,在模拟肠液中提高了17.3%;在体外模拟胃肠液靶向释放实验中,在胃液中,90 min后,花青素微胶囊溶液和花青素未包埋溶液中花青素的释放率分别为7.5%、20.7%;在肠液中花青素缓慢释放,240 min后,二者花青素的释放率分别为21.9%、27.2%;并且花青素微胶囊后能够显著提高其在水相体系中的稳定性,起到在胃肠液中缓释的效果。

酶法辅助提取黑果枸杞花色苷工艺优化

为提高黑果枸杞花色苷提取率,以果胶酶辅助溶剂提取,对其工艺条件进行优化研究。以黑果枸杞花色苷含量为响应值,分别研究提取时间、乙醇浓度、液料比、提取温度、加酶量对其提取率影响。再依据响应面试验优化,得出加酶量0.10%时,各因素影响为:提取温度>乙醇浓度>提取时间>液料比,且提取温度49℃,乙醇浓度80%,提取时间1.05 h,液料比21∶1(mL/g)时提取条件最佳,此时黑果枸杞花色苷含量达(24.675±0.027)mg/g。

UV法测定黑河流域不同产地黑果枸杞中花青素的含量

目的 UV法测定黑河流域不同产地黑果枸杞果实中花青素的含量,为今后其研究提供科学依据。方法本文采用超声波辅助溶剂提取法及正交设计,研究各因素对提取工艺的影响,优选最佳提取条件,即料液比1:40,提取时间25 min,乙醇浓度70%,并用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化。结果采用UV法测得黑河流域21个不同产地黑果枸杞中花青素含量,其中青海最高2.74 g/100g,甘肃金塔次之2.30 g/100g,新疆、内蒙的较低,分别为1.615、1.40 g/100g。结论 UV法方便快捷,稳定性好,结果可靠。

黑杞一号鲜果和干果的酚类物质研究

研究黑杞一号制干前后酚类物质的变化.对黑杞一号鲜果和干果的总酚、总单宁、总花色苷、单体花色苷和非花色苷单体酚类物质进行测定分析.与黑杞一号鲜果相较,干果的总酚含量高2.10 mg/g、总花色苷含量低5.30 mg/g、总单宁含量高0.66 mg/g.黑杞一号鲜果中检测出8种单体花色苷,干果中检测出4种单体花色苷.两者均以甲基花翠素葡萄糖苷及其酰化衍生物含量最高.黑杞一号鲜果的单体花色苷总量比干果高6119.33μg/g.黑杞一号鲜果和干果中均检测出29种非花色苷单体酚.与干果相较,黑杞一号鲜果中非花色苷单体酚总量低0.54μg/g.干燥有利于黑杞一号总酚和总单宁的积累,同时降低了果实中总花色苷的含量,以期为黑杞一号的深加工提供参考依据.

黑果枸杞花青素提取分离纯化和组分分析

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是一种营养食物,在民间广泛用于治疗心脏、经期和更年期异常疾病。试验通过单因素和正交试验对黑果枸杞花青素的最佳提取工艺进行了探讨并对HP-2MGL大孔吸附树脂分离纯化进行了研究;利用高效液相色谱(HPLC)以及高效液相-电喷雾离子化-质谱技术(HPLC-ESI-MS/MS)对黑果枸杞花青素的组分和含量进行了研究。结果表明:黑果枸杞花青素的最佳提取工艺为:50%乙醇溶液、酶用量为1mg/g纤维素酶和1mg/g果胶酶、提取液pH=3。纯化得到的黑果枸杞花青素外观呈紫黑色,含量比纯化前提高3.07倍,相对纯度为74.42%。初步鉴定出4种化合物结构,分别为:牵牛花青素-3,5-二葡萄糖苷、天竺葵色素类衍生物、牵牛花青素-3-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊色素类衍生物。它们的相对含量分别为:8.15%、0.88%、74.42%、13.87%,其中,牵牛花青素类衍生物含量最多。

白刺果汁和黑果枸杞果汁中花色苷与总多酚的测定

实验采用紫外-可见光分光光度法测定白刺果汁和黑果枸杞果汁中的花色苷和总分酚的含量，白刺果汁中含有花色苷和总多酚分别是0．08mg／mL、5．644mg／mL，黑果枸杞果汁含有花色苷和总多酚分别是0．43mg／mL、3．186mg／mL。该方法操作简单、灵敏度高，适宜检测花色苷和总多酚的含量。该实验为以后的白刺果汁和黑果枸杞果汁的开发与利用提供理论依据。

栽培黑果枸杞活性成分生物合成关键基因克隆及表达分析

[目的]本文旨在对不同生长期花色苷和原花青素含量及关键酶基因表达分析,为从分子生物学水平确定黑果枸杞最佳采收期提供理论依据,同时对生物合成途径中关键酶基因进行克隆,为揭示黑果枸杞花色苷和原花青素的生物合成机制以及利用基因工程技术进行黑果枸杞靶向育种奠定基础。[方法]分别利用pH示差法和香草醛-盐酸法测定不同时期黑果枸杞花色苷和原花青素含量;通过RT-PCR技术扩增4种关键酶基因LrDFR、LrANS、LrLAR和LrANR的cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR分析关键酶基因在黑果枸杞果实不同发育时期的表达情况。[结果]黑果枸杞果实花色苷在黑果成熟期含量最高(6.08 mg·g^-1 DW),原花青素在半紫半黑果期含量最高(22.3 mg·g^-1 DW);克隆得到4种关键酶基因的序列全长分别为1140 bp、1251 bp、1002 bp和1017 bp,分别编码379、416、333和338 aa的蛋白质,序列分析表明4种基因所编码氨基酸均具有所属蛋白家族的典型特征。[结论]花色苷在黑果成熟期含量最高,原花青素在半紫半黑果期含量最高,且随着果实发育和花色苷含量的增加,LrDFR和LrANS表达水平也逐渐上升,而LrLAR和LrANR则呈先上升后下降的表达模式;当黑果枸杞用于原花青素提取时,可适当提前采收期;研究结果为从分子生物学水平确定黑果枸杞最佳采收期提供理论依据,也为黑果枸杞花色苷与原花青素生物合成机制的揭示奠定基础。

葡聚糖凝胶柱层析富集黑果枸杞总花色苷工艺及其抗氧化性研究

以黑果枸杞花色苷提取物为原料,研究Sephadex LH-20葡聚糖凝胶富集纯化花色苷工艺条件,分别考察不同上样液浓度、p H值和上样流速对花色苷的吸附率影响,同时考察不同洗脱液浓度、p H值和洗脱流速对花色苷的解吸效果,并比较不同产物的总花色苷含量和抗氧化性。通过单因素与正交试验确定最佳富集纯化工艺条件为:质量浓度25 mg/L、p H值为3.5的样品溶液,以1.0 mL/min流速上样至Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱后,采用85%、p H值为3.5的乙醇溶液,以1.0 mL/min流速洗脱,对总花色苷的吸附率和解吸率分别为90.9%、85.3%。通过定量分析可知,凝胶柱层析富集后产物的总花色苷含量高于树脂纯化物,同时抗氧化性试验结果表明,对两种自由基的清除能力顺序依次为凝胶纯化>树脂纯化>提取物。