Anti-CD19Fab-(CP)_(3)新型二聚化抗体的构建及靶向性观察

目的构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体,鉴定其蛋白分子量及相对含量并观察其靶向性。方法通过基因克隆技术构建原核表达载体PAYZ-Anti-CD19Fab-(CP)_(3)及阳性对照质粒PAYZ-Anti-CD19Fab-(CPP)_(3),将质粒转化至大肠杆菌16C9中进行表达。表达产物经过透析及Protein G亲和层析柱纯化,采用SDS-PAGE电泳法及液相串联质谱法(LC-MS)鉴定Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体分子量及相对含量;采用流式细胞术检测二聚化抗体与CD19^(+)B系淋巴瘤Raji细胞的结合能力以及二聚化抗体对CD19鼠源亲本全抗的竞争能力。结果成功构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3),所得产物纯化后经SDS-PAGE及LC-MS法鉴定其主要成分为二聚化抗体,含量为76.2%;Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化比例高于对照Anti-CD19Fab-(CPP)3,差异有统计学意义(P<0.05)。同浓度下,与Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)及Anti-CD19Fab相比,Anti-CD19Fab-(CP)_(3)对Raji细胞的结合能力更强,亲和力更好,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论通过在Fab的CH1尾端引入(CP)_(3)的改构方式可有效形成高比例二聚化抗体,显著提高抗体对靶细胞的靶向性,未来可应用于多价抗体及相关药物研发。