重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制

为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV Ⅰ和HTLV Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性。将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV Ⅰ型血清和19份HTLV Ⅱ型血清均能100%检出,而在5065份各种阴性血清中特异度为99 94%。用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV Ⅰ参比血清、17份HTLV Ⅱ参比血清和1024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV Ⅰ型血清和HTLV Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂。而GeneLabs试剂对HTLV Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检。另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂。这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂。

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数<10%,批间变异系数<20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。

2004年湖北省内使用的HIV抗体ELISA诊断试剂的评估分析

目的通过对艾滋病病毒(HIV)抗体检测诊断试剂的质量评估,筛选检测性能好的试剂,为艾滋病临床检测提供选择依据。方法用湖北省艾滋病性病防治中心确认实验室提供的199份样品,用明胶凝集法和蛋白印迹法来评价四个厂家的HIV抗体ELISA诊断试剂的敏感性、特异性。结果被评价的各种检测诊断试剂敏感性在96.67～100.00%之间,特异性在91.72～95.86%之间,功效率92.46～95.98%之间。结论HIV抗体检测诊断试剂有较好的检测性能,国产试剂敏感性和特异性与进口试剂相差不大,适合在中国市场作为临床诊断中使用。

蓝耳病病毒抗体ELISA检测试剂盒的“两步法”评价

本研究利用"两步法"对蓝耳病试剂盒进行了使用效果评价:第一步,利用18份参考血清对试剂盒进行初筛,淘汰检测准确率低的试剂盒;第二步,利用参考血清和临床样品,分别开展最低检测限、重复性以及诊断敏感性和诊断特异性分析。结果显示,A、B、C、D 4种市售试剂盒的初筛符合率均为100%,诊断敏感性和诊断特异性分别为94.58%和97.14%、94.58%和89.2%、93.1%和90%、96.55%和85%。其中,A和B为通用型试剂盒,能够检测欧洲型和美洲型蓝耳病;C和D均为美洲型检测试剂盒;重复性上,D试剂盒批内与批间变异系数都较小,重复性较好。本研究首次提出了"两步法"试剂盒评价体系并利用这一体系对4种蓝耳病试剂盒进行了评价,不仅为蓝耳病试剂盒的选择提供了依据,也为今后其它动物疫病检测试剂盒的评价提供了参考。

四种国产检测HBsAgELISA试剂盒诊断性能的比较

目的比较四种国产检测乙肝表面抗原ELISA试剂盒诊断性能指标。方法收集武汉大学人民医院检验科门诊和住院患者血清样本348例，无性别和年龄要求，同时使用四种国产ELISA表面抗原试剂盒检测HBsAg，并按确证试验要求，对所有初检阳性样本执行确证试验。结果348例血清样本，四种ELISA试剂盒检测HBsAg符合例数为329例，一致率为94．5％；其中阴性177例，阳性152例，阳性标本经确证试验其结果均为阳性；四种试剂盒检测结果不一致例数为19例，占5．5％；经确证试验仅有1例为阳性，18例阴性，经计算北京万泰，厦门新创、珠海丽珠,上海科华四种试剂盒的诊断准确度分别为98．6％，98．0％，99．7％和97．4％，灵敏度分别为100％，99．4％，99．4％和100％，特异度分别为97．5％，96．9％，100％和95．4％，误诊率分别为2．5％，3．1％，0和4．6％，漏诊率分别为0，0．6％，0．6％和0。所有假阳性样本初检吸光度值均〈1．0。结论四种国产ELISA试剂盒诊断准确度以珠海丽珠较高，上海科华较低，但是四种试剂盒诊断性能均达到了临床对检测HBsAg的要求。所有试剂盒都会有假阳性或假阴性出现，因此无论使用哪种ELISA试剂盒，对初检结果阳性的样本都需要进行确证试验，特别是初检吸光度值小于1．0的阳性样本，以排除假阳性。

抗环瓜氨酸肽抗体定量检测ELISA试剂盒的制备及其诊断类风湿性关节炎的意义

目的制备抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体定量检测ELISA试剂盒，并探讨其诊断类风湿性关节炎（RA）的意义。方法应用作者合成的CCP制备抗CCP抗体定量检测试剂盒，并进行鉴定。应用该试剂盒检测178份RA患者和712份非RA患者及健康人血清，评价其在RA诊断中的价值。结果所制备的定量检测试剂盒cutoff值为25RU／ml；线性良好，启值大于0．99；试验内变异系数为5．15％-8．25％，试验间变异系数为6．82％-11．23％；乎均回收率为99．7％。该试剂盒在4℃保存6个月，稳定性良好。与国外同类试剂盒同时测定80份样本，阳性符合率为95．7％，阴性符合率为97．1％，总体符合率为96．3％。该试剂盒对RA诊断的敏感性为73．0％，特异性为98．2％。结论所制备的试剂盒各项指标均达到相关要求，能够满足临床检测的需要。

6种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对

为评价不同品牌狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的有效性,以确保实验室检测结果更加客观可靠,采集85份北京市犬临床血清样本,分别用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和6种品牌试剂盒(包括国产、进口,阻断法、间接法)进行抗体检测。以FAVN检测结果为标准,通过Kappa一致性检验、χ^2检验及诊断效能评价,比对分析6种品牌试剂盒的检测效果。结果显示:6种试剂盒的一致性有差异,且整体一致性不高;3种试剂盒的检测结果与FAVN无统计学差异(P>0.05),另3种存在差异(P<0.05);2种试剂盒的灵敏度及符合率较好,均在90%左右,2种试剂盒较差,在70%左右,剩余2种在80%左右。结果表明:不同品牌的商品化试剂盒检测效果存在差异,且这种差异与品牌来源及试剂盒类型无明显相关性。因此,建议在实际监测工作中,以标准方法为参考,对商品化试剂盒进行一致性、差异性检验和诊断效能评价,将检测效果作为筛选试剂盒的首要考量因素,以确保实验室检测结果客观准确。

一种新型的华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒

一种新型的华支睾吸虫病快速ＥＮＩＳＡ诊断试剂盒．检查华支睾吸虫病人血清４５３份．非流行区健康对照者血清３５６份．敏感性为９２．１％（４７／４５３）．特异性９８．３％（３５０／３５６）。试剂盒配备齐全．微量检测（血清用量２０～１０微升）．开盒即用、操作简便、整个检测过程约需１５ｍｉｎ．肉眼判断结果．重复性和稳定性良好，特别适合基层医疗卫生单位和现场使用。

免疫鸡群感染新城疫强毒后的排毒规律

将经过２次新城疫（ＮＤ）基础免疫的ＳＰＦ鸡，随机分成５组，每组８只，在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３ＮＤ强毒和Ｌａｓｏｔａ弱毒经口腔接种０．２５ｍＬ／只，１２ｈ后采取泄殖腔棉拭，利用ＮＤ强毒快速诊断试剂盒进行排毒的动态监测，并在攻毒前期、中期、后期测定各试验组ＳＰＦ鸡的ＨＩ效价。试验第３天开始排毒，２０ｄ结束，其间在６～７ｄ和１１～１３ｄ出现２次排毒高峰。ＨＩ抗体在初期先是降低１个滴度，后期开始升高而且离散度不断增大。

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)诊断试剂盒的制备及应用

本研究通过筛选致病力强的烟草野火病菌株作为抗原 ,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清 ,研制出SPA ELISA、间接 ELISA 2种诊断试剂盒 ,使检测真正作到了简便、快速、灵敏、准确。同时 ,应用这 2种诊断试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子进行检测 ,明确了云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根围。

华支睾吸虫病新诊断试剂盒的建立与应用

本所首次试制成功稳定、灵敏、特异、简便和无毒的华支睾吸虫病诊断药盒.本试剂盒具有以下的优越性:(1)采用部分提纯的抗原A作为包被抗原,抗原的蛋白质浓度为0.5μg/ml,其阳性率为97.1％,交叉反应率为4.6％,灵敏性和特异性均优于粗抗原。(2)采用预先包袱抗原,经G液或M液封闭并干燥后于4～10℃条件下至少可保存8周,室温条件下至少可保存两周而仍不失活的平板。(3)采用特殊方法配制能在冰箱中可至少放置半年而不失活的四甲基联苯胺为显色剂。此显色剂不但无致癌作用,而且其显色反应和重复性都优于OPD。 1988年2月药盒开始用于本病的早期诊断,1990年7月此盒用于流行病学调查也得到理想的结果。在343例居民中粪检虫卵阳性者141例,其中ELISA阳性者127例,ELISA阳性率为90.7％。应用本试剂盒于临床诊断和大规模流行病学调查,可早期诊断和治疗患者,因此本盒有很好的经济效益及社会效益。

HpaA蛋白在幽门螺杆菌感染诊断中的应用

目的建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+-NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性。结果经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。

鸡新城疫酶联免疫诊断试剂盒的研制

将ＥＬＩＳＡ检测鸡新城疫病毒特异性ＩｇＭ抗体的方法试剂盒化，确定其外包装材料、规格、盒内组成，并对酶标板的包被、质量控制、保存期，酶标抗鸡ＩｇＭ（μ链）单克隆抗体的冻干、保存，组盒后的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的特异性、敏感性、符合率、可重复性、保存期等作了详细的研究。先后制备试剂盒１８个批次，用于全国９个省的２９个大型鸡场或兽医诊断站，检测血样３６２８份，其中阳性２９５９份。

仔猪O型口蹄疫母源抗体消长试验

[目的]为制定科学合理的仔猪口蹄疫免疫程序提供依据。[方法]以规模化养猪场和散养户中经猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫后母猪所生产的仔猪为研究对象,利用液相阻断ELISA诊断试剂盒对仔猪母源抗体消长情况进行检测。[结果]仔猪通过母乳获得被动保护,在21日龄母源抗体达到高峰,规模化猪场和散养户母猪的平均效价分别达1∶142和1∶89。规模化猪场场仔猪21-30日龄保护率在80%以上,45日龄下降到65%,60日龄时基本无保护;而农户仔猪21日龄保护率为60%左右,30日龄仅为40%左右。农户饲养母猪免疫抗体水平远低于规模化猪场。[结论]对规模化猪场的仔猪进行口蹄疫疫苗的最佳首免时间为45-50日龄,而对散养户仔猪的最佳首免时间应为30日龄左右。

丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂及国家质控参考品的关系

目的对丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫诊断试剂和抗HCV国家质控参考品的过去﹑现在和未来进行回顾和展望。方法根据HCV抗体酶联免疫诊断试剂和抗HCV国家质控参考品的研制过程,对国产和进口抗-HCV酶联试剂的检测灵敏度、特异性进行论述,阐明国家质控参考品所起到的作用。结果与结论目前我国的丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂已接近或达到国际发达国家同类产品的质量水平。与之相伴的HCV抗体国家质控参考品也随之不断完善,对抗HCV酶联免疫诊断试剂的质量控制起到了重要的作用。

华支睾吸虫病快速诊断试剂盒质量控制10年分析

目的 建立华支睾吸虫病快速诊断试剂盒的质量控制体系,并以此对试剂盒进行质量监控。方法 建立了由200份确诊病人血清混合而成的阳性质控品和由200份非流行区健康人血清混合而成的阴性质控品,确定了包括对阳性质控品和阴性质控品的检测标准。结果 对10年104批次共101万人份的诊断试剂盒进行了监测,阳性质控品和阴性质控品的平均吸光度值分别为0.444和0.066,总阳性质控品和总阴性质控品变异系数分别为7.60％和10.72％。结论 华支睾吸虫病快速诊断试剂盒具有高度的敏感性、特异性和稳定性,质量监测体系也是一种性能可靠、行之有效的质量控制方案。

弓形虫病诊断试剂盒阴性血清保存方法的研究

目的:研究SPA-ELISA弓形虫病诊断试剂盒不同稀释液及灭活处理对阴性血清的保存效果。方法:正常人阴性血清(n=5)分别用0.01MPBS缓冲液、1%胎牛血清、15%甘油1∶100进行稀释后保存于4℃,分别于稀释后1d、1周、2周、4周、2个月、3个月用SPA-ELISA检测阴性血清OD410,比较其变化情况;同时观察灭活对阴性血清的影响。结果:用15%甘油稀释的阴性血清可以保存至3个月,用0.01MPBS缓冲液和1%胎牛血清稀释的阴性对照一个月之后保存效果较差。结论:15%甘油稀释的阴性血清可以比较长期稳定的保存,保证了SPA-ELISA弓形虫病诊断试剂盒的稳定性。

两种血吸虫病诊断试剂盒在云南大山区应用效果的比较

目的对NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法试剂盒在云南大山区应用的效果进行比较。方法用NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法分别检测取自云南大山区血吸虫病流行社区的506份血清,并对两者结果进行比较。结果NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法的阳性符合率分别为87.88%(144/164)、84.71%(139/164),两者无显著性差异;在粪孵阴性血清样本中,两者的检出率分别为44.15%(151/342)、70.47%(241/342),存在显著性差异。结论NP30诊断试剂盒在云南大山区血吸虫病流行社区应用效果要好于SEA/ELISA法。

肺癌诊断试剂盒的研制

目的利用特异性与灵敏性较高的神经元特异烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)肺癌相关标志物,研制肺癌双显色的体外联合诊断酶联免疫反应(ELISA)试剂盒。方法将NSE、CYFRA21-1两种抗体按一定比例组合包被到酶标板的板底制成试剂盒。分别以NSE、CYFRA21-1抗原为研究对象,对包被液、包被时间、包被温度因素进行考察,以试剂盒的稳定性、灵敏度、准确性为指标进行结果分析。结果 NSE、CYFRA21-1肺癌双显色ELISA诊断试剂盒4℃放置时有效期为6个月。试剂盒灵敏度为83.8%(129/154),特异度为53.8%(57/106),准确性为71.5%(186/260),受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积Az为0.90,各项指标均较单独的NSE、CYFRA21-1明显提高。结论成功制备双显色ELISA肺癌诊断试剂盒,该试剂盒可提高肺癌检查的准确性、灵敏度,降低假阳性率,具有开发为新型肺癌诊断试剂盒的条件。

快速酶免疫法与粪检法检测华支睾吸虫病的比较分析

目前，华支睾吸虫病的诊断主要依靠快速酶免疫诊断试剂盒和粪检，为对这二种方法进行比较，选３５６名学 生，同时进行血清学抗体和粪便虫卵的检测，抗体阳性率８．７１％（３１／３５６），虫卵阳性率８．１５％（２９／３５６），二者无显 著性差异。其中二法均阳性２６例，阳性符合率８９．６６％，二法均阴性３２２例，阴性符合率９８．４７％，总符合率９７．７５％。 表明快速酶免疫法与粪检法作为诊断华支睾吸虫病的二种不同的检测方法无显著性差异。