McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。

McAb-ELISA检测丝虫特异IgG_4的应用研究

目的 探讨McAb -ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术 ,经细胞融合 ,建立起 7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体 (McAb)。以此为探针 ,采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏微丝蚴血症者血清的敏感性为 96 3% (10 4 / 10 8) ,测得IgG4的最低限量为 0 0 1ul/ml;检测丝虫病非流行区健康者、肠道线虫感染者、华支睾吸虫感染者和囊虫病患者等血清均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。经现场应用研究 ,同样获得良好的实用性 ,有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。

McAb检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制

本文报道了McAb(4F_2)ELISA检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制。实验对227例脑囊虫病患者脑脊液进行检测,循环抗原阳性率为84.58％,其中活动型脑囊虫病患者171例,循环抗原阳性率为93.57％。56例非活动型脑囊虫病患者,循环抗原阳性率为57.14％,前者的循环抗原强度也明显高于后者。83例患有其它中枢神经系统疾病的患者,1例阳性,阴性符合率为98.80％。本试验方法简便,结果客观,对脑囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高、特异性强。

ELISA和ABC免疫组化染色法在肿瘤McAbs筛选中的比较研究

本文比较分析了ELISA和ABC两种方法在肿瘤McAbS筛选应用中的一些利弊关系。结果表明,ELISA测出为阳性并与结肠癌细胞系反应的99.5％(198/199)孔杂交瘤细胞所分泌的抗体,经ABC法染色后是不与其癌组织反应的,其中只有0.5％(1/199)孔细胞的抗体才是这两种方法同时均能测得为阳性和是有意义的。而ABC法不仅可检出ELISA阳性的抗体,而且亦能检出ELISA漏筛为性阴、最终是有意义的理想抗体。

^(211)At标记CEA-McAb的HPLC分离分析研究

利用HPLC进行了放射性核素(^(211)At,^(231)I)标记McAb的分离分析研究,采用1.0mol/l(NH_4)_2-SO_4-0.1mol/l PBS液梯度淋洗。先后经225nm紫外和放射性检测结果证明,^(211)At-CEA-M_(?)Ab偶联物与原始CEA-McAb的紫外峰一致,均在R_t=13.40±0.05min出现.而副产物及其它物质的紫外峰滞留时间与之完全不同。此外,定量地测定了McAb含量和峰面积的关系以及放射性计数。

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用

本研究建立了McAb快速诊断猪旋毛虫病的ELISA试剂盒,应用旋毛虫单克隆抗体系和层析纯化抗原(PAA)与旋毛虫肌幼虫排泄一分泌抗原(ES)作常规ELISA平行检测61头人工感染旋毛虫病猪血样,阳性率均为100％,检测健康猪血样1082头,阴性率也为100％,检测疫区自然感染猪血样1253头,阳性率分别为1.44％和1.12％,随机抽采175头猪血样和肉样作旋毛虫病消化法,常规法和快速法对比试验,诊断符合率分别为100％、97.6％和95.34％。通过对25万多头活猪检测证明,该诊断盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性,深受广大检疫人员的欢迎。

抗HCMV不同多肽McAb的鉴定

目的为了将单克隆抗体 (Mc Ab)用于诊断技术 ,我们首先建立了 13株抗人巨细胞病毒 (HCMV)的 Mc Ab,选取 6株 Mc Ab作进一步鉴定。方法这 6株 Mc Ab的鉴定主要采用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验等方法。结果间接免疫荧光试验表明 :Mc Ab8B8相应的多肽为早期抗原 ;而 Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8D6的相应病毒多肽为晚期抗原。免疫印迹试验的结果表明 :Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8B8、8D6相应的病毒多肽分子量分别为 46、15 0、38、5 1、72、6 5 kd。结论 Mc Ab8B8可不用于 HCMV的快速诊断。

抗LPS-HDL McAb的交叉反应性

目的：制备具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。方法：以内毒素－高密度脂蛋白（ＬＰＳ－ＨＤＬ）复合物作为包被抗原，筛选抗ＬＰＳ的ＭｃＡｂ；采用间接ＥＬＩＳＡ法鉴定其交叉反应性；以竞争抑制试验和被动溶血试验分析交叉反应的特异性。结果：用ＬＰＳ－ＨＤＬ筛选获得３株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为７５％（３／４）；以ＬＰＳ筛选出１株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为１１．１％（１／９）。结论：用ＬＰＳ－ＨＤＬ包被做ＥＬＩＳＡ，有利于筛选出具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。

McAb共刺激PBLs介导肝癌细胞凋亡

用ＭｃＡｂ，抗ＣＤ３，ＣＤ３＋ＣＤ２８和ＣＤ２８＋ＣＤ８０激活健康人ＰＢＬｓ，作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２），透射电镜观察其超微结构，发现除抗ＣＤ３可引起部分淋巴细胞诱导性凋亡外，其他组都可介导肝癌细胞凋亡。结果提示ＭｃＡｂ共刺激能促进肿瘤免疫治疗的研究。

用McAb-AST及骨髓涂片法对四川省汶川县犬感染利什曼原虫的调查研究

作者等用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8％,较之历年来陇南、川北报道的犬感染率为高,不但查明了当地犬感染利什曼原虫的严重性,且为本年在白蛉繁殖季节前消除这些传染源提供了确切依据。为了研究对犬利什曼病的简易、准确的调查方法,我们同时用McAb-AST对该125只犬的血清,检测其循环抗原,结果与骨髓涂片阳性符合率为97.8％,总符合率95.2％,可望取代骨髓涂片法。

弗氏不完全佐剂优于降植烷生产McAb腹水

自Kohler G.Milstein C创立B淋巴细胞杂交瘤技术以来,各实验室均采用降植烷(2、6、10、14甲基十五烷,P,Pristane)作为生产MCAb腹水的诱发剂。近年来发现降植烷有致癌作用,因此,以降植烷为诱发剂生产的McAb腹水,难以用于临床治疗。作者用弗氏完全佐剂(complet Freund＇sadjuvant,CFA)、弗氏不完全佐剂 (Incomplete Freund＇s adjuvant,IFA)以及降植烷作为诱发剂,进行对比研究,实验结果表明,IFA优于降植烷,而且是对动物的毒性很低的诱发剂。

^(131)I-抗VEGF McAb的制备及其体外免疫结合活性鉴定

目的 制备13 1I 抗 VEGFMcAb( 13 1I sc 72 69) ,并探讨其作为肿瘤放射免疫显像剂的可能性。方法 采用Iodogen法碘化标记制备13 1I sc 72 69。SephadexG5 0分离纯化标记产物 ,三氯醋酸法测定标记产物的放射化学纯度 ,体外细胞结合分析法鉴定13 1I sc 72 69的免疫结合活性。结果 ①13 1I标记率为 2 7.46% ,标记产物的放射性比活度为 1.0 2MBq/μg ,平均放射性化学纯度为96.2 0 %。平均放射性浓度为 18.3 0MBq/ml。②体外结合分析显示 ,13 1I sc 72 69与人膀胱癌T2 4细胞结合率达 5 9.12 % ,而与人脐静脉血管内皮细胞结合率仅为 7.16% (P <0 .0 0 1)。13 1I sc 72 694℃保存 7d后与T2 4细胞的结合率仍为 5 6.3 1%。结论 本实验制备的13 1I sc 72 69,其放射性化学纯度 >95 % ,有良好的免疫活性和稳定性 ,具备作为放射性显像剂的条件。

检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。

McAb免疫组化法对淋巴结转移性胃癌检出率的价值

组织病理学判断胃癌标本淋巴结有无转移灶,对临床分期、治疗和预后具有重要价值。HE染色法较易识别淋巴结内成片的转移性癌细胞,但要发现微小转移灶较困难。对于那些播散到淋巴窦内的、形态酷似窦组织样细胞的癌细胞,或以淋巴瘤样形式浸润于淋巴网状组织中的癌细胞,仅以HE染色,则更难判断。为此,本研究应用胃癌单克隆抗体(McAb)免疫酶法,检测胃癌淋巴结转移,以探讨免疫组化法在提高胃癌淋巴结转移的检出率。材料与方法一、标本所有标本均系胃癌手术切除组织,福尔马林固定,石蜡包埋。

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的 探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法 用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果 CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论 CD3McAb能增强rhIL

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻—加热浓缩法，将尿样浓缩20倍。应用MCAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了43份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样，两法的阳性检出率分别为81．39％和69．76％；假阳性率分别为14．85％和0％。应用MCAb-RIHA和MCAb－Dot－ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样，前者出现的交叉反应率分别为16．36％和14．28％；后者出现的交叉反应率均为0％。

抗人AFP－R－LCA McAb在裸鼠人肝癌模型中放免显像及治疗

放射性核素^（１３１）Ｉ标记的抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体（ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡ）ＭｃＡｂ，注入荷瘤裸鼠腹腔后，能在裸鼠人肝癌模型肿瘤区积聚，其放射性核素浓度是裸鼠肝脏的５．２倍；而^（１３１）Ｉ标记的正常小鼠ＩｇＧ（ｍＩｇＧ）及游离^（１３１）Ｉ却无肿瘤区积聚，且在荷瘤裸鼠体内呈均匀分布。^（１３１）Ｉ－ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ组γ照像均显示出裸鼠人肝癌的阳性定位。用^（１３１）Ｉ－ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ治疗裸鼠人肝癌，肿瘤生长受到明显抑制（８５．０％），优于^（１３１）Ｉ－ｍＩｇＧ及游离^（１３１）Ｉ（４６．０％、２０；１％，Ｐ＜０．０５）．结果表明：ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ对人肝癌细胞有较强的亲和力和特异性，有希望成为肝癌导向研究的理想载体。

直接法McAb-Dot-ELISA检测日本血吸虫感染耕牛血清循环抗原的研究

将抗日本血吸虫单克隆抗体标记辣根过氧化物酶,进行直接法单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA),检测日本血吸虫感染耕牛的血清循环抗原。结果,该方法对实验感染耕牛的阳性检出率为100％(32/32);对安徽、江西和湖南3省血吸虫病流行区自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率分别为93.93％(418/445),88.50％(100/113)和81.71％(143/175);对健康耕牛的阴性符合率为98.51％(66/77),对16份感染锥虫和8份实验感染肝片吸虫的耕牛血清均未见交叉反应。提示,该方法具有操作简便、快速等优点,可作为一种新的耕牛血吸虫病免疫诊断方法在疫区基层推广应用。