微小RNA-17在幽门螺杆菌相关胃癌组织中的表达变化及意义

目的观察微小RNA-17(miR-17)在幽门螺杆菌(Hp)相关胃癌组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集75例份胃癌组织及其配对的癌旁组织标本,其中Hp阳性48例份、Hp阴性27例份。采用实时定量PCR法检测细胞毒素相关基因A(Cag A) mRNA、miR-17表达。结果 Hp阳性胃癌组织Cag A mRNA表达为6. 061±0. 712,Hp阴性胃癌组织为1. 024±0. 235,二者比较差异有统计学意义(t=35. 593,P <0. 05); Hp阳性胃癌组织及其癌旁组织miR-17表达均明显高于Hp阴性胃癌组织及其癌旁组织(12. 785±1. 324 vs 5. 654±0. 745,8. 124±1. 105 vs 3. 124±0. 564),二者比较差异均有统计学意义(t分别为23. 739、21. 911,P均<0. 01); Hp阳性、阴性胃癌组织miR-17表达均高于癌旁组织(12. 785±1. 324 vs 8. 124±1. 105,5. 654±0. 745 vs 3. 124±0. 564),二者比较差异均有统计学意义(t分别为18. 725、14. 069,P均<0. 01);胃癌组织miR-17表达与Cag A表达呈正相关关系(r=0. 564,P <0. 01);肿瘤直径> 5 cm,临床分期Ⅲ、Ⅳ期,Borrmann分型Ⅲ、Ⅳ型以及有淋巴结转移的Hp阳性胃癌组织miR-17表达高于肿瘤直径≤5 cm,临床分期Ⅰ、Ⅱ期,Borrmann分型Ⅰ、Ⅱ型以及无淋巴结转移的Hp阳性胃癌组织(15. 226±1. 325 vs 11. 041±1. 214,14. 485±1. 412 vs 11. 571±1. 116,14. 341±1. 325 vs 11. 468±1. 241,15. 124±1. 332 vs 9. 778±1. 123),二者比较差异均有统计学意义(t分别为11. 336、7. 983、7. 748、14. 753,P均<0. 05)。miR-17高表达Hp阳性胃癌患者平均生存时间明显短于miR-17低表达Hp阳性胃癌患者(t=5. 170,P <0. 05)。结论 miR-17在Hp相关胃癌组织中的表达异常升高,且与肿瘤直径、临床分期、Borrmann分型、淋巴结转移及患者预后有关,可作为胃癌早期诊断及预后判断的候选标志物。

幽门螺旋杆菌毒力因子CagA介导的ERK信号通路活化对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨幽门螺旋杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,阐明CagA的致癌机制。方法:构建pcDNA3.1/CagA真核表达载体,将胃癌AGS细胞分为空白对照组(空载体转染)、CagA转染组(GZ7/CagA转染)和CagA + ERKi组(ERK1/2抑制剂预处理+GZ7/CagA转染),采用Western blotting法测定各组细胞中CagA、磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK (T-ERK)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平,采用CCK-8法检测各组胃癌AGS细胞活性,采用流式细胞术检测胃癌AGS细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,CagA转染组胃癌细胞中CagA、p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显升高( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组胃癌细胞中p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显降低( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组各时间点胃癌细胞活性明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi 组胃癌细胞凋亡率明显升高( P <0.05)。结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞增殖,其机制可能与CagA活化ERK信号通路有关。

过表达CagA对胃癌细胞中GLUT1表达的影响

目的探究幽门螺杆菌(H.pylori)的细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)过表达对胃癌细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响。方法用过表达cagA腺病毒感染人胃癌细胞株AGS和人原代胃癌细胞,免疫荧光检测GLUT1的表达;用过表达glut1慢病毒及其空载体慢病毒感染胃癌细胞株AGS和BGC-823、0.002 mg/L嘌呤霉素筛选,用Western blot、免疫荧光验证稳转细胞株;最后用过表达cagA腺病毒感染过表达GLUT1的稳转细胞株,免疫荧光检测GLUT1与CagA的细胞定位。结果成功建立过表达glut1的稳转细胞株AGS/glut1和BGC-823/glut1,免疫荧光结果显示CagA和GLUT1蛋白主要在细胞膜上表达,且过表达CagA能引起细胞膜上GLUT1蛋白达降低并出现碎片化,且CagA与Glut1在细胞膜上共定位。结论CagA与GLUT1共定位于细胞膜上,破坏细胞膜,抑制GLUT1蛋白的表达。

幽门螺杆菌毒力因子CagA对人正常胃上皮HFE145细胞CDX1表达及上皮间质转化的影响

目的探讨幽门螺杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A(CagA)对人正常胃上皮HFE145细胞尾型同源盒基因1(CDX1)表达及上皮间质转化的影响。方法人正常胃上皮HFE145细胞分为对照组、阴性组、CagA组和联合组,分别采用Lipofectamine2000转染空白试剂、pcDNA3.1、WT-CagA及WT-CagA联合SC-35731-V。Western blot法检测转染后细胞中CDX1、CagA、E-cadherin、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平;Transwell小室法检测转染后细胞侵袭及迁移能力;荧光酶素测定CagA相关因子的潜在结合位点。结果CagA组CDX1表达水平高于对照组和阴性组(P<0.05),联合组CDX1表达水平低于CagA组(P<0.05)。CagA组HFE145细胞侵袭及迁移能力高于对照组和阴性组(P<0.05),联合组HFE145细胞侵袭及迁移能力低于CagA组(P<0.05)。CagA组E-cadherin表达水平低于对照组和阴性组(P<0.05),联合组E-cadherin表达水平高于CagA组(P<0.05)。CagA组Vimenti和N-cadherin水平高于对照组和阴性组(P<0.05),联合组Vimenti和N-cadherin水平低于CagA组(P<0.05)。缺失CDX1外显子上游501~1000碱基对不抑制荧光素酶活性,缺失1~500碱基对抑制荧光素酶活性。结论幽门螺杆菌毒力因子CagA诱导CDX1的异常表达,靶向性抑制CDX1对胃癌发生发展的影响具有进一步研究的价值。

幽门螺杆菌介导自噬的研究进展

幽门螺杆菌是一种广泛定植于人胃黏膜的革兰阴性菌,与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的发生密切相关,其可通过多种毒力因子逃避宿主的免疫反应以造成慢性感染。自噬是真核生物进化过程中的高度保守过程,可清除细胞内的病原微生物,对维持机体内坏境起重要作用,并可通过溶酶体对受损、衰老的细胞器及生物大分子等进行吞噬降解,以维持细胞内环境稳定。幽门螺杆菌能够入侵胃上皮细胞和某些免疫细胞,诱导自噬的发生,并可在自噬体中复制后被清除。

HopQ与人CEACAM1相互作用的研究进展

幽门螺杆菌(Hp)是人胃上皮细胞的特异性定植菌,是胃炎、消化道溃疡、胃癌的主要致病因素,其所携带的细胞毒素相关蛋白A(Cag A)是致病的关键。Hp通过其外膜黏附蛋白Hp外膜蛋白Q(Hop Q)作用于细胞膜受体蛋白癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)上,诱导反式二聚化的CEACAM1解聚,以单体的形式结合并将毒力因子Cag A注射入受体细胞。Hop Q具有不同的亚型、地区分布差异和多种生物学功能,不同亚型对Cag A的转移能力完全不同。这种相互作用促进了Cag A通过CagⅣ型分泌系统的易位。Hop Q-CEACAM1作用点可能成为治疗Hp的新靶点。

血清H.pylori抗体抗Hp细胞毒素相关基因A及13C-尿素呼气实验结果与湖州地区孕妇妊娠剧吐的相关性分析

目的分析血清H.pylori抗体、抗Hp细胞毒素相关基因A(CagA)及13C-尿素呼气实验结果与湖州地区孕妇妊娠剧吐的相关性。方法选取2019年7月—2020年6月于湖州市妇幼保健院就诊的妊娠剧吐(观察组)与无妊娠呕吐(对照组)的孕妇各100例进行研究,并将观察组按病情严重程度分为重度组与轻度组,入组后检测血清H.pylori抗体、抗Hp细胞毒素相关基因A(CagA)及进行13C-尿素呼气实验,比较各组检测结果、孕前及孕早期体质量、孕妇并发症及围生儿不良妊娠结局。结果观察组孕妇Hp、CagA及13C-尿素呼气阳性率均高于对照组,差异均有统计学意义(χ^(2)=26.299,44.907,28.926,均P<0.05)。将观察组孕妇按病情严重程度分组,重度组孕妇Hp及13C-尿素呼气阳性率均高于轻度组(χ^(2)=4.005,5.654,均P<0.05)。CagA阳性率组间比较差异无统计学意义(χ^(2)=3.287,P>0.05)。孕早期观察组体质量较孕前减轻,对照组较孕前增重,差异有统计学意义(t=0.279,P<0.05)。孕早期观察组体质量较对照组轻,差异有统计学意义(t=3.357,P<0.05)。两组孕妇并发症发生率比较差异无统计学意义(P<0.05)。观察组小于胎龄儿、低出生体质量发生率及不良妊娠结局总发生率高于对照组(P<0.05)。结论Hp感染与妊娠剧吐密切相关,妊娠剧吐可导致孕妇体质量减轻、不良妊娠结局发生率增高。

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响及机制研究

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响并探讨其可能的机制。方法将胃癌AGS细胞分为细胞毒素相关基因A(Cag A)质粒组(转染p CDNA3.1-Cag A质粒)和阴性对照组(转染p CDNA3.1空白质粒)以及Cag A质粒组(转染p CDNA3.1-Cag A质粒和p EGFP-C1空白质粒)、Cag A+程序化细胞死亡因子4(PDCD4)质粒组(转染p CDNA3.1-Cag A质粒和p EGFP-C1-PDCD4质粒)和阴性对照组(转染p CDNA3.1空白质粒和p EGFP-C1空白质粒)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行PDCD4、Twist1、上皮细胞钙粘蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA水平,采用蛋白质印迹(Western blot)法测定各组细胞PDCD4、Twist1、E-cadherin、Vimentin蛋白水平,采用transwell小室测定细胞侵袭能力。结果 Cag A质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量高于阴性对照组(P<0.05),PDCD4 mRNA、E-cadherin mRNA表达量低于阴性对照组(P<0.05);Cag A+PDCD4质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量低于Cag A质粒组(P<0.05),PDCD4 mRNA、E-cadherin mRNA表达量高于Cag A质粒组(P<0.05)。Cag A质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05),PDCD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量低于阴性对照组(P<0.05);Cag A+PDCD4质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量低于Cag A质粒组(P<0.05),PDCD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量高于Cag A质粒组(P<0.05)。Cag A质粒组侵袭细胞数高于阴性对照组(P<0.05),Cag A+PDCD4质粒组侵袭细胞数低于Cag A质粒组(P<0.05)。结论幽门螺杆菌感染可增加胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能为幽门螺杆菌独立因子Cag A通过抑制PDCD4表达促进胃癌细胞的上皮-间质转化。

幽门螺旋杆菌细胞毒素相关基因A、幽门螺旋杆菌分离株空泡形成毒素基因A与胃癌发生及临床病理因素的关系分析

目的:探讨幽门螺旋杆菌(HP)细胞毒素相关基因A(HP-CagA)、HP分离株空泡形成毒素基因A(HP-VacA)与胃癌发生及临床病理因素的关系。方法:选取安徽医科大学附属宿州医院2018年1月至2020年1月胃癌患者88例作为观察组,另选择同期良性胃部病变患者80例作为良性对照组,健康体检者80例作为健康对照组。比较三组临床资料、HP-CagA、HP-VacA阳性表达率,分析胃癌发生的危险因素,评价HP-CagA、HP-VacA与胃癌临床病理因素的关系。结果:有胃癌家族史、高盐饮食、喜好烫食、胃蛋白酶原(PG)Ⅰ/PGⅡ降低、合并脂肪肝及三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平升高、吸烟、情绪抑郁是胃癌发生的危险因素(P<0.05)。观察组HP-CagA、HP-VacA阳性表达率高于良性对照组、健康对照组[82.93%(73/88)比62.50%(50/80)和26.25%(21/80)、30.68%(27/88)比7.50%(6/80)和0](P<0.05)。HP-CagA、HP-VacA与胃癌患者年龄、病理类型、分化程度存在相关性,差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier曲线分析结果显示,HP-CagA、HP-VacA阳性患者1年生存率低于阴性患者(P<0.05)。结论:HP-CagA、HP-VacA阳性HP感染与胃癌关系密切,加强对HP-CagA、HP-VacA阳性的HP感染患者的治疗,对切断胃癌早期发生环节、改善预后具有重要临床价值及社会意义。

幽门螺杆菌毒力因子vacA的多态性与其相关疾病的关系

目的评估江苏地区幽门螺杆菌(Hp)毒力因子空泡毒素相关基因(vacA)不同基因型(s1/s2,m1/m2,i1/i2,l1/l2)与疾病之间的关系。方法运用生物信息学方法对132例vacA基因全序列进行分析,取内镜检查患者的胃黏膜组织进行Hp培养及组织病理学检查。提取培养成功的146例细菌的DNA,用PCR及基因测序方法检测vacA基因型。结果成功检测146例Hp的基因型。定义了2种主要的vacA loop区亚型,K1A2T1(l1)及K1A2S1T1(l2)。Hp vacA l2基因型与胆汁反流的发生相关(P<0.05)。Hp vacA s、m、i、l等位基因型在慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌中的检出率无统计学差异,各种基因型与胃黏膜萎缩或肠化的发生均无明显相关性(P>0.05)。结论江苏地区vacA Loop可变区基因型主要存在2种亚型,K1A2T1和K1A2S1T1;后者与胆汁反流的发生相关。

幽门螺杆菌抗体分型联合肿瘤标志物检测与不同分化程度胃癌的关系

目的探索幽门螺杆菌(Hp)抗体分型联合肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)+糖类抗原72-4(CA72-4)+糖类抗原19-9(CA19-9)]检测对低、中、高度分化胃癌的诊断价值。方法 HP抗体分型采用免疫印迹法,肿瘤标志物采用化学发光法,对经病理确诊的胃癌患者(低分化23例,中分化36例,高分化38例)及胃良性病变对照组(34例)进行血清学水平的HP抗体分型以及肿瘤标志物检测。结果 HP抗体分型联合肿瘤标志物检测对低分化、高分化胃癌的检测灵敏度分别为67%及56%;对中分化胃癌的检测特异性为84%,对低、中、高分化胃癌的检测准确性分别为60%、70%和49%,与单独用肿瘤标志物对胃癌的检测水平相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HP抗体分型联合肿瘤标志物检测对不同分化程度的胃癌有一定的临床指导意义。