雷公藤多甙对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子表达的影响

目的观察雷公藤多甙(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook.f.,GTW)对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子(nephrin、podocin)表达的影响。方法经尾静脉一次性注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型。14只大鼠随机分为GTW干预组(简称GTW组)和安慰剂干预组(简称造模组)。实验1中,在注射抗体前3天,经灌胃给予GTW〔75mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第14天,处死大鼠;实验2中,在注射抗体同时,经灌胃给予GTW〔100mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第7天,处死大鼠。分别观察14天内或7天内模型鼠24h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化。在第14天或第7天,处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球形态学变化、肾小球内巨噬细胞浸润、肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结果实验1中,GTW抑制抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和系膜损伤,在第14天,对肾小球内nephrin、podocin免疫荧光染色强度无影响;实验2中,GTW改善抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿、系膜损伤、肾小球内巨噬细胞浸润,而且,在第7天,显著增强肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结论在抗Thy1.1抗体肾炎中,nephrin、podocin表达的减弱可能会促进系膜损伤和蛋白尿。GTW改善系膜损伤和蛋白尿的作用,很可能是通过增强nephrin、podocin表达来实现的。

大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型发病机制探讨

目的 探讨大鼠抗 Thy1系膜增生性肾炎模型发病机制。方法 制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给模型组 Wistar大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎 (Ms PGN) ;另设正常对照组 ,静脉注射生理盐水。隔天测定 2 4 h尿蛋白定量 ,放免法测定血清细胞因子含量 ,显微镜观察肾脏系膜组织增殖程度 ,BI2 0 0 0图像分析系统对肾小球系膜区进行分析。分别于注射 ATS后 1、3、5及 7d各时间点处死模型组大鼠 6只。结果 模型组与对照组比较 ,尿量、饮水量变化无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;模型组 1、3、5及 7d尿蛋白定量与对照组相应时间点比较均明显升高 (P<0 .0 0 1～ 0 .0 0 5 ) ;各时间点大鼠血清 IL - 1、IL - 6及 TNF含量均高于对照组 (P<0 .0 0 1～ 0 .0 0 5 ) ;模型组肾小球系膜细胞及基质明显增生。结论 细胞因子可能在鼠抗

商陆皂苷甲对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎的治疗作用

目的:探讨商陆皂苷甲(EsA)对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎的治疗作用。方法:制备大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型,随机分为EsA治疗组、地塞米松治疗组、未治疗组(模型组)。另设正常对照组。隔日测定24h尿蛋白定量。所有大鼠第8天处死,取肾脏组织,显微镜观察肾组织系膜增生程度,利用图像分析系统对系膜区占据肾小球面积进行分析。结果:EsA治疗组及地塞米松治疗组3、5、7天24h尿蛋白与模型组相应时间点比较均明显下降(P<0.01～0.001);EsA治疗组及地塞米松治疗组肾小球系膜细胞及基质增生程度较模型组明显减轻(P<0.05)。结论:EsA对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎具有降低尿蛋白、抑制肾小球系膜细胞及系膜基质的增生的作用。

ANAE染色和抗Thy1-SPA菌体花环双标记法的建立及其用于检测小鼠T淋巴细胞的研究

目的建立 ANAE染色联合抗 Thy1SPA菌体花环双标记法 ,并试图利用此法证明抗θ抗体对 ANAE阳性淋巴细胞的特异作用。方法利用双标记法对正常小鼠胸腺及脾细胞进行检测 ,观察抗 Thy1SPA抗体对 ANAE阳性细胞结合的专一性。结果双标记法中 ,抗 Thy1SPA菌体花环阳性同 ANAE阳性一样 ,能很好反映 6 15小鼠胸腺或脾脏 T细胞数 (P>0 .0 5 ) ;胸腺和脾脏细胞 Thy1+ - ANAE+ 率 ,即双标记阳性率略低于总的 ANAE+ 或总抗θ菌体花环 + 数 ,但 3者之间有明显的相关性。结论成功建立了 ANAE-抗 Thy1SPA菌体花环法 ,并首次用此法证明抗θ血清对

单克隆抗体OX7的制备及大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型的建立

目的:制备单克隆抗体OX7(monoclonal antibody OX7,mAb OX7)及建立大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型。方法:弗氏不完全佐剂预免疫Balb/c小鼠,腹腔注射OX7细胞,Protein A亲和层析法纯化腹水,用SDS-PAGE鉴定纯化后抗体的纯度。将所得抗体尾静脉注射Wistar大鼠,PAS染色观察正常对照组注射前及注射后第3天、第7天大鼠肾脏病理组织学改变。结果:SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体有IgG的轻链和重链两条带,无其他杂带,抗体浓度为2.06 mg/ml。PAS染色显示正常对照组肾小球结构正常,毛细血管袢开放良好;模型组第3天开始出现大量系膜细胞破坏,系膜基质溶解,肾小球毛细血管扩张;第7天系膜细胞重度增生。结论:通过将OX7细胞注入小鼠腹腔并用Protein A亲和层析法纯化腹水,可成功制备高效价、高纯度及特异性强的mAb OX7,该抗体可成功建立抗Thy1系膜增生性肾炎动物模型。

抗Thy1.1抗体诱导的肾炎模型及其在中药研究中的应用

抗Thy1.1单克隆抗体诱导的抗Thy1.1抗体肾炎模型广泛应用于人类系膜增殖性肾炎的研究领域。该模型的病理特征包括补体依赖性系膜溶解、肾小球内炎症细胞浸润、显著的蛋白尿,以及急性或进展性系膜损伤。文章综述了经静脉注射单克隆抗体1-22-3诱导的可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型和不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型的病理特征;阐述了肾小球内炎症细胞浸润和各种损伤性细胞因子的变化规律;分析了包括系膜细胞增殖和细胞外基质沉积在内的复杂的系膜损伤病变过程。运用该模型,可以说明雷公藤多苷、柴苓汤等中药对系膜损伤和蛋白尿的药理作用,并且,在分子水平阐明这些药物对各种损伤因子的作用机制。

肝素对大鼠Thy-1肾炎u-PA/PAI-1表达的影响

目的 :研究尿激酶型纤溶酶原激活物 /Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子 (u PA/PAI 1)在大鼠Thy 1肾炎病变进展过程中的变化 ,以及肝素对其表达的影响。方法 :以抗Thy 1单抗成功制备大鼠Thy 1肾炎模型 ,并用肝素对其进行治疗 ,分别于 1、3、7、14、2 1、2 8d处死动物并分别取其肾皮质。应用RT PCR及Westernblot方法检测肾皮质u PA/PAI 1mRNA及蛋白表达的变化 ,以观察肝素对其表达的影响。结果 :RT PCR法显示肾炎模型组 (G组 )于 3～ 2 8d的肾皮质u PAmRNA和 3～ 2 1d的肾皮质PAI 1mRNA的表达均高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;肝素治疗组 (H组 )仅 2 1d时肾皮质u PAmRNA的表达高于G组 (P <0 0 5 ) ,而PAI 1mRNA的表达于 3～ 2 8d时均低于G组 (P <0 0 5 )。Westernblot结果显示 3～ 2 8d时 ,G组u PA和PAI 1蛋白表达量高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,这与RT PCR检测结果相似 ;H组肾皮质u PA蛋白表达量与G组相比差异无显著性 ,而 3～ 2 1d时PAI 1蛋白表达量均低于G组 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :大鼠Thy 1肾炎肾皮质u PA与PAI 1的表达均随肾小球病变的进展而增强 ,肝素治疗可能通过干扰或抑制u PA和PAI

慢性抗Thy1抗体肾炎模型的研究进展

慢性抗thy1抗体肾炎模型由于其疾病过程与人类IgA肾病及其他的系膜增生性肾炎的疾病进程相似,可以用作研究慢性肾脏病的发病机制以及新的治疗策略,本文就慢性抗thy1抗体肾炎模型的建立方法、病理演变过程、发病机制及治疗进展做一综述。

肾上腺髓质素对大鼠Thy-1肾炎肾小球系膜细胞增生和Ⅳ型胶原、纤连蛋白沉积的影响

目的研究肾上腺髓质素(adreomedullin,AM)对大鼠Thy-1系膜增生性肾炎肾小球系膜细胞增生和细胞外基质合成的影响,为其用于防治肾小球疾病提供实验依据。方法自制兔抗大鼠Thy-1多克隆抗体,建立大鼠Thy-1系膜增生性肾炎模型,随机分为对照组、模型组和AM治疗组。分别于3、5、7d处死大鼠,每组至少处死6只,取其肾脏,分别作组织切片细胞核苏木精染色以及增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色,应用图像分析技术行肾小球细胞数、PCNA阳性细胞数和α-SMA表达强度检测。经抽提肾组织蛋白,用Western Blot法检测肾组织Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤连蛋白(FN)的表达。结果与对照组相比,模型组和治疗组3、5、7d时,肾小球细胞数、PCNA阳性细胞数及α-SMA表达强度均明显增高(P<0.05或P<0.01);于3d时,治疗组的上述各指标均较模型组显著降低(P<0.01),而5、7d时则差异不显著。与对照组相比,模型组和治疗组3、5、7d时,肾组织ColⅣ、FN表达明显增强(P<0.01);于3d时,治疗组肾组织ColⅣ、FN表达均显著降低(P<0.01),而5、7d时则差异不明显。结论AM对大鼠Thy-1肾炎早期肾小球细胞增生及基质合成有一定抑制作用。

雷公藤多甙对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响

目的观察雷公藤多甙(multiglycosideoftripterygiumwilfordiiHook.f.,GTW)在体内对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响。方法运用单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)1223建立大鼠可逆性抗Thy1.1抗体肾炎(简称“抗Thy1.1肾炎”)模型,以GTW干预,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量(urinaryproteinexcretion,Upro)、肾功能(serumcreatinine,SCr;bloodureanitrogen,BUN)、血浆总蛋白(totalplasmaprotein,TP)以及肾小球形态学变化,并检测肾组织中增殖因子(plateletderivedgrowthfactorBB,PDGFBB;transforminggrowthfactorβ,TGFβ)mRNA表达水平。结果GTW抑制抗Thy1.1肾炎模型Upro和系膜损伤;抗Thy1.1肾炎模型肾组织中增殖因子(PDGFBB、TGFβ)mRNA表达水平与正常组比较,分别为其2.84倍与1.64倍,GTW使PDGFBBmRNA过高表达水平下调33.1%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论GTW可减少系膜增殖性肾炎模型蛋白尿,抑制系膜细胞增殖和细胞外基质沉积;这些作用可能与下调肾组织增殖因子(PDGFBB)mRNA的表达有关。

大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型的病理形态学观察

目的 :观察大鼠系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN)模型的病理形态学变化。方法 :采用一次性鼠尾静脉注射小鼠抗大鼠Thy1 1单克隆抗体法复制大鼠MsPGN模型 ,应用光镜、荧光显微镜、偏振光显微镜及透射电镜观察模型大鼠肾小球系膜细胞及系膜基质的变化 ;结果 :系膜细胞明显增生 ,细胞外基质 ,包括Ⅰ、Ⅲ胶原、纤维粘连蛋白 (FN)及层粘连蛋白 (LN)增多 ,个别大鼠肾小球出现硬化及纤维化。结论 :复制出具有典型病变的大鼠MsPGN模型。

骨髓间充质干细胞对系膜增生性肾炎的修复作用及机制探讨

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植后在大鼠肾脏的分化并研究其对于抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎的损伤修复作用。方法测定60Coγ照射比较组24 h尿蛋白定量、血清尿素氮及血肌酐水平,观察肾脏病理;注射Thy1.1单克隆抗体建立Thy1.1肾炎模型;分离培养鉴定MSCs,以PKH67标记;观察MSCs移植后Thy1.1肾炎模型组及对照组第24 h尿蛋白量及血Cr水平,肾脏改变及MSCs在肾脏的分布情况;红色荧光标记RECA-1、OX-7、ED-1;测定MSCs培养上清液和对照组VEGF和TGF-β1的浓度;结果60Coγ照射比较组实验指标及肾脏病理无明显差异。Thy1.1肾炎模型组与正常对照组相比,24 h尿蛋白明显升高,80%的大鼠出现镜下血尿,肾病理小球系膜细胞弥漫性增多伴基质增加,肾功能与对照组无差异。MSCs模型移植组24 h尿蛋白量明显减少,病理改变减轻,死亡率降低。肾小球中极少见双重染色细胞。MSCs培养上清液VEGF和TGF-β1的浓度明显升高。结论剂量为8Gy的60Co照射可增加MSCs在肾脏沉积。MSCs移植可参与肾小球的损伤修复,改善系膜增生性肾小球肾炎,其机制可能与旁分泌VEGF和TGF-β1促进修复有关。

缬沙坦联合氨氯地平对抗Thy1肾小球肾炎大鼠系膜增生的拮抗作用研究

目的探究缬沙联合坦氨氯地平对抗Thy1肾小球肾炎大鼠系膜增生拮抗作用。方法大鼠经尾静脉一次性注射兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清建立抗Thy1肾小球肾炎模型,并将建模成功的大鼠随机分为模型组、对照组、实验组和联合组,每组12只;另取12只大鼠注射等量0.9%NaCl作为正常组。对照组给予16 mg·kg^(-1)缬沙坦,实验组给予10 mg·kg^(-1)氨氯地平,联合组给予16 mg·kg^(-1)缬沙坦+10 mg·kg^(-1)氨氯地平,正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。5组大鼠每天灌胃给药1次,连续给药14 d。用全自动生化分析仪检测尿液中的24 h尿蛋白(24 h UP)、血尿素氮(BUN)和血清肌酸酐(SCr)含量,用蛋白质印迹法检测肾组织中p38丝裂原激活蛋白激酶/核转录因子κB(p38MAPK/NF-κB)通路蛋白的表达水平。结果联合组、实验组、对照组、模型组和正常组的24 h UP分别为(2.03±0.31)、(3.75±0.94)、(3.68±0.92)、(4.95±1.23)和(0.27±0.07)mg·d^(-1),BUN分别为(13.16±3.29)、(17.65±4.41)、(17.94±4.49)、(22.75±5.69)和(8.96±2.24)μmol·L^(-1),SCr分别为(50.15±12.53)、(62.05±15.51)、(63.13±15.78)、(83.27±20.82)和(40.15±10.03)μmol·L^(-1),p-p38MAPK/p38MAPK分别为0.51±0.13、0.70±0.17、0.72±0.18、0.99±0.25和0.21±0.05,NF-κB p65蛋白相对表达水平分别为0.55±0.14、0.79±0.20、0.81±0.21、1.12±0.28和0.18±0.05。实验组、对照组、联合组的上述指标均较模型组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);联合组的上述指标均较实验组和对照组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缬沙坦联合氨氯地平对抗Thy1肾小球肾炎大鼠系膜增生有拮抗作用,其可能是通过抑制p38MAPK/NF-κB通路活化,抑制肾组织炎症反应而实现的。