GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建、表达及鉴定

目的:为进一步研究抗癫痫肽(Anti-epilepsy peptide,AEP)的抗痫机制及筛选其相关作用蛋白,进行GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建及融合蛋白的表达。方法:通过PCR基因扩增对AEP基因进行扩增,并将其克隆于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导获得表达,并采用Western Blot进行检测。结果:成功构建了AEP原核表达载体,并在大肠杆菌Bl21中获得表达。结论:成功构建了GST/AEP原核表达载体,并表达了GST/AEP融合蛋白。

GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定

目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。

外耳道间断加压对豚鼠膜迷路积水及ANP表达的影响

目的 研究外耳道 2 0cmH2 O间断加压对豚鼠膜迷路积水及耳蜗外侧壁心钠素 (ANP)表达的影响。方法 建立豚鼠外耳道间断加压模型 ,常规火棉胶切片观察膜迷路积水的发展 ,用免疫组化S P法研究ANP的表达。结果 2 0cmH2 O间断加压对中耳及内耳均无明显损伤。间断加压使膜迷路积水程度减轻 ;加压组与对照组间反应阈无明显差异。加压耳蜗管外侧壁ANP表达减弱。结论 2 0cmH2 O的压力相对安全 ,可以此为参考进行外耳道加压实验。间断加压可减缓膜迷路积水的发展 ,但对提高听功能无明显效果。耳蜗ANP阳性细胞可能有内分泌或旁分泌作用。

外耳道间断加压对豚鼠耳蜗外侧壁心钠素表达的影响

目的 研究外耳道 49和 2 0cmH2 O间断加压对豚鼠听功能及耳蜗外侧壁心钠素 (ANP)表达的影响。方法 建立豚鼠外耳道间断加压模型 ,观察 49和 2 0cmH2 O压力引起的中、内耳病理改变及AEP阈值改变 ,用免疫组化SP法研究心钠素在耳蜗外侧壁的表达。结果 49cmH2 O间断加压引起鼓膜松驰部和中耳粘膜出血 ,各频率反应阈平均提高 12 0 9dB ;2 0cmH2 O间断加压对中耳及内耳均无明显损伤 ,不影响AEP阈值 ;间断加压使ANP在耳蜗外侧壁表达减弱。结论 2 0cmH2 O的压力相对安全 ,可以此为参考进行外耳道加压实验。