Screening Psychrophilic Fungi of Cellulose Degradation and Characteristic of Enzyme Production

A fungus（WR-C1） decomposed cellulose was isolated from a hypothermal litter layer using Congo red medium as the preliminary screening culture medium and then using a filter as the secondary screening medium at low temperature. The experiment showed that the weight loss rate of filter paper on the 15 th days could reach 30.69%. A morphologic and ITS gene sequence analysis suggested that CF-C1 was Cladosporium. We mainly studied the effects of culture time, inoculation amount, initial p H and different sources of carbon, nitrogen and inorganic salt on the cellulase production of strain WR-C1. Under optimum cultural condition, the highest value of WR-C1 enzyme production and filter paper enzyme were 3.27 U · m L～（-1） and 0.51 U · m L～（-1）.

无子刺梨内生真菌拮抗活性菌株筛选及分子鉴定

为进一步开发利用无子刺梨枝条和叶片中具有生物防治潜力的内生真菌,以2种木腐菌和4种植物病原真菌为靶标,采用五点对峙法筛选对病原真菌具有拮抗活性的内生真菌菌株,并探讨活性菌株的分类地位。结果显示,菌株RSZF 36、RSZF 39和RSYF 34对2种木腐菌的抑制率均达80%以上,菌株RSZF 34和RSZF 36对4种植物病原真菌的抑制率均大于75%,菌株RSZF 36对6种病原菌的抑制率均高于75%,呈现强抑制能力。84株内生真菌中有12株对6种病原菌抑制率均在70%以上,属于活性菌株,其中9株来自枝条,3株来自叶片。对12株活性菌株进行分子生物学鉴定,将其归属为1门2纲3目3科4属,拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)为优势菌属,占活性菌株的41.67%。综上,无子刺梨内生真菌中广泛分布着抑菌活性菌株,且不同内生菌株对不同病原菌的拮抗能力表现出一定的选择性或专一性。本研究结果可为无子刺梨内生真菌资源的开发利用提供理论参考。

杜仲内生真菌的抑菌活性筛选

以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌为测试菌种,对杜仲 Eucommia ulmoides Oliv. 根、茎、叶中分离出的2 0株内生真菌及其次生代谢物进行抗菌活性筛选.结果表明:有15个菌株至少对1种实验细菌具有抑菌活性,19株的代谢产物至少对1种实验细菌具有抑菌活性,其中有3株内生真菌及其次生代谢产物对测试病原细菌均有较强抑制作用.

大戟科4种植物内生真菌分离与抑菌研究

对大戟科4种药用植物大戟、泽漆、乌桕、重阳木内生真菌进行分离鉴定,并检测其抑菌活性。结果表明:4种植物均含有内生菌,乌桕中获得13株内生菌,鉴定12株,分别属于丝核菌属、小菌核菌属、拟盘多毛孢属、小单头孢属、毛壳菌属、壳小圆孢属、棒盘孢属、交链孢属;京大戟中获得9株内生菌,鉴定8株,分别属于镰刀菌和交链孢属;泽漆中获得6株内生菌,鉴定4株,属于交链孢属;重阳木中获得15株内生菌,鉴定了4株,分别属于小穴壳属、壳小圆孢属、拟茎点霉属。茎中均有内生菌,种子和重阳木叶中均未分离到。总计43株内生菌中有11株有稳定的抑菌活性,占总菌株的25.58%,有12株有不稳定的抑菌活性,占27.91%。用绿豆发芽试验检验表明,仅有1株菌在绿豆幼苗上形成病斑,其余均生长良好,且21株表现出对绿豆芽的促进作用。

银杏内生真菌抗真菌活性菌株的分离和筛选

从银杏(Ginkgo biloba L．)的根、茎、叶和果实中分离获得522株内生真菌,采用菌丝生长抑制法测定 了对7种植物病原真菌的抑制作用。结果表明302株具有抗菌活性,占总数的57．85％,其中12株抗菌效果非 常明显。银杏组织中存在丰富的内生菌,不同组织内生真菌的数量存在一定差异;对病原真菌具有活性的内 生真菌比例较高;对大多数供试病原菌都可以筛选到拮抗效果较好的菌株;银杏内生真菌可以产生丰富的具 有抑菌活性的次生代谢产物,可以作为对多种病原物具有抑菌活性物质筛选的资源。

利用稻瘟霉分生孢子筛选有生物活性的菌株

从广西、贵州等地土壤中分出４１７株真菌．以稻瘟霉分生孢子及菌丝生长异常或抑制为指标，从４１７株真菌中初筛出７４株活性菌株．经多次反复筛选从中得到１３株活性较好且稳定的菌株．其中７株能引起稻种幼根肥大，但不抑制细菌生长．对其中变形活性最好的３８号菌株进行紫外照射诱变处理，使活性由 ６３ μｌ·ｍＬ－１提高到１６ μｌ·ｍＬ－１，其遗传稳定性和热稳定性良好．对其中抑制活性最好的１９０１和 ７４号菌株进行抗真菌实验也显示了较好的活性．

除虫菊内生真菌Y2菌株的分离鉴定及其发酵产物抑菌活性初步研究

在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y2菌株进行了初步的鉴定和活性物质的分离。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢属真菌Fusariumsp.,其发酵液粗提物高抑菌活性馏分集中在丙酮、乙酸乙酯等中等极性馏分段。Y2菌株发酵液10倍稀释液对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum等6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率在80.41%-93.26%之间,其5倍稀释液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于80%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于50%,治疗效果不明显。

快速筛选金钱松内生真菌抗真菌活性的研究

目的:筛选金钱松内生真菌抗病源真菌的活性菌株。方法:首次对金钱松内生真菌进行了分离,以稻瘟霉PyricuLaria oryzaP-2b为筛选模型,采用微量稀释法筛选金钱松内生真菌抗真菌活性,研究其抗病源真菌的能力。结果:金钱松内存在着大量且具有抗稻瘟霉P-2b活性的内生真菌,占内生真菌总数的44.8%。其中JJ314,JJ323可诱导稻瘟霉P-2b菌丝念珠状、膨大变形,JJ324可抑制孢子萌发,它们对红色毛癣菌Trichophyton rubrum、新型隐球菌Cryptococcus neoformans、白色念珠菌Candida albicans等病源真菌都具有强烈的活性。结论:金钱松内生真菌是潜在的抗真菌药物资源。

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。

植物内生真菌抗肿瘤活性菌株的筛选

从三尖杉、南方红豆杉及香榧中分离到172株植物内生真菌，利用抗肿瘤体外细胞毒筛选模型(MTT法)对其进行活性检测。结果表明，25株内生真菌(占总分离菌株的14.5%)对KB（人口腔上皮癌）或HL-60（人白血病）细胞具有显著的抑制活性。三尖杉、南方红豆杉及香榧内生真菌的抗肿瘤活性菌株占各供测菌株的3.3%, 19.6%和8.6%。其中7个菌株的细胞毒ID50为1,000以上，占总供测菌株的4.1%。抗肿瘤活性菌株主要分布在拟青霉属及头孢霉属中。

毛壳菌产抗真菌活性物质菌株的筛选与鉴定

对实验室分离保存的40株毛壳菌菌株代谢产物进行抗真菌活性筛选,5个菌株代谢产物对植物病原真菌具有选择性抑制效果。其中,菌株CH08、CH23发酵液对芒果炭疽菌、苹果炭疽菌、小麦根腐菌有较强的抑制作用;菌株CH16、CH17发酵液对芒果炭疽菌、苹果炭疽病具有较强的抑制作用;菌株CH21发酵液对西瓜枯萎菌、辣椒炭疽菌有较强的抑制作用。经形态学鉴定,CH08、CH16、CH17、CH23为球毛壳菌,CH21为角毛壳菌。

喜树内生真菌的分离及其抗肿瘤活性代谢产物的筛选方法

从喜树(CamptothecaacuminataDecne.)的根、枝条、叶和果实中分离纯化了48株内生真菌,通过对各个菌株的少量发酵培养,HPLC分析结合色谱峰紫外扫描检测方法,以紫外扫描图谱的相似性为依据,对喜树内生真菌产生喜树碱结构类似物进行初步筛选,并进一步以抑瘤实验确证其抗肿瘤活性。结果证明,以该方法筛选到的10个内生菌株中有7个菌株发酵液对HL 60细胞增殖具有显著的抑制活性。相对于常规的生物活性筛选,高效液相色谱结合色谱峰紫外光谱的方法,在药用植物内生真菌活性次生代谢产物筛选研究中具有快速、高效的特点。

云芝(Coriolus versicolor)高木质素降解活性菌株筛选的研究

从自然界中分离了32个云芝菌株，比较了它们在含愈创木酚的土豆培养基中的变色反应和对杨木粉的降解能力，表明不同的菌株对木材的降解能力和降解方式有很大的差异，但都有一定的选择性，从中筛选出了木质素降解能力较强（30天内，40％左右klason木素），选择性较高的菌株。和Phanerochaetechrysosporium相比，它们的木质素降解率提高近一倍，而综纤维素降解率则有不同程度的减少。

利用生物模型-稻瘟霉筛选活性菌株

目的从土壤真菌中筛选有抗真菌、抗肿瘤活性的菌株。方法以稻瘟霉分生孢子以及菌丝形态变化为指标 ,并通过稳定性考查 ,进行活性筛选。结果从云南、江西等地土壤中分离出 737株真菌 ,对其中的 14 2株活性菌株进行多次反复筛选 ,从中得到 6株活性、批次稳定性和遗传稳定性良好的菌株。进行温度稳定性考查的过程中发现多色青霉、黑粘座曲霉、产紫青霉三株菌发酵液活性基本不受温度影响。结论稻瘟霉是良好的筛选抗真菌。

抗白色念珠菌海洋真菌的筛选及抑菌活性初探

实验以白色念珠菌为对象,对从渤海湾不同站位分离获得的55株海洋丝状真菌进行了抗真菌活性菌株的筛选。从中筛选得到了BH431、BH515、BH531和BH09721 4株抑菌活性较高的菌株,并进一步对不同浓度发酵液的抑菌活性及代谢物性质进行了检测。结果显示,4株海洋真菌对野生型白色念珠菌SC5314均具有较强抑菌活性,其最小抑菌浓度分别为65 g/mL、19 g/mL、54 g/mL、23 g/m L;其中BH431和BH515菌株还显示出对基因敲除型菌株RM1000的抑菌活性,最小抑菌浓度分别为32 g/m L、39 g/mL。4株海洋真菌所产生的活性代谢物具有较好的酸碱适应性,活性物质分子质量<6 000 u;其中BH431菌株的活性代谢物还具有良好的热稳定性。

无花果内生真菌的抑菌活性筛选

以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)为测试菌种,对无花果根、茎、叶中分离出的87株内生真菌进行活菌筛选,结果表明:无花果87株内生真菌中有36株对1种或多种指示菌有拮抗作用,其中对金黄色葡萄球菌有抑菌作用的有18株,对枯草芽孢杆菌有抑菌作用的有11株,对大肠杆菌有抑菌作用的有7株;活性菌株抗菌活性多以中等活性为主,高活性和低活性的菌株较少。从36株有活性的菌株中选出具有代表性的20株内生真菌的代谢产物进行抗菌活性筛选,结果表明20株菌株的代谢产物至少对1种供试菌株具有抑菌活性。

食线虫真菌的筛选及菌株DF09002的鉴定与产酶特性分析

从海南五指山原始森林、定安雷鸣发病胡椒园采集土壤样品及死亡线虫尸体,分离得到126株菌落形态有差异的真菌。以离体培养的南方根结线虫为靶标线虫对126株真菌进行筛选,获得7株对根结线虫校正死亡率在70%以上的菌株。菌株DF09002抗线虫活性最强,校正死亡率达100%;经5次继代培养,仍具有稳定产生杀线虫活性物质的能力。通过形态学和rDNA ITS序列分析,将该菌株归类为曲霉属黑色组曲霉黑曲霉集合体。酶系分析试验表明,菌株能产生在线虫侵染过程中起重要作用的几丁质酶和胞外蛋白酶,酶活力分别达到0.674、1.63 U/mL。

产纤维素酶真菌的筛选及其酶学性质的研究

采用DNS法从土壤中分离出1株高产纤维素酶的真菌,将其命名为S5,经形态学初步鉴定为绿色木霉菌。研究结果表明,当碳源为羧甲基纤维素钠、氮源为硝酸铵时,产酶效果最佳,测得其滤纸酶活为200U/mL。该酶最适反应温度为45℃,在温度为40℃～55℃热稳定性较高,其最适反应pH值为5.5,在pH值为5.0～6.5时较稳定。

云南三个盐矿盐卤沉淀池耐盐真菌的活性研究

采用滤纸片法和胞外酶定性筛选培养基对云南三个盐矿(乔后盐矿、一平浪盐矿和昆明盐矿)盐卤沉淀池耐盐真菌进行抗菌活性和产胞外酶筛选。结果从107株耐盐真菌中筛选到有抗菌活性的菌株14株,主要表现在对白假丝酵母(Candida albicans)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和木霉(Trichoderma)的抗菌活性。产胞外酶活性菌株有15株,产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶的菌株各有13株、6株和4株。活性菌株主要分布在乔后盐矿盐卤沉淀池,优势属均为青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus)。

高寒草地土壤产漆酶真菌的筛选及分子鉴定

以高寒草地土壤分离出的9株真菌菌株为研究对象,采用rDNA-ITS方法对筛选出的产漆酶菌株进行分子鉴定,根据菌株在愈创木酚、蒽酮、邻苯二酚、邻联甲苯胺、邻甲苯胺、α-萘酚、联苯胺、没食子酸为底物的选择性培养基上的生长情况、菌落大小、漆酶催化氧化还原反应产生的变色圈直径大小及其颜色深浅程度,进行产漆酶真菌初筛,采用液体产酶发酵法选用ABTS为底物测定漆酶活力进行复筛。鉴定结果为菌株1.9为Uncultured fungus clone.,2.1a为Scytalidium,310b为Marasmius tricolor,2.1c为Saccharicola,2.3a为fungal sp,2.4d为Saccharicola.,10a为Marasmiusrotalis,3.7c为Alternaria.WB为Verticilliumlongisporum。筛选结果表明:除菌株3.7c以外,其余8株菌株在以愈创木酚、蒽酮、邻联甲苯胺、联苯胺为底物的培养基上基本都产生氧化带,在没食子酸底物培养基上均不产生氧化带;菌株1.9,2.1a,310b,2.4d,10a,2.1c,2.3a均具有产漆酶活力,其中菌株310b具有较强产漆酶活力。