羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立

为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。

丙酸盐对大环内酯类抗生素M-90生物合成的调控

研究了如何通过加入前体来提高抗生素Ｍ－９０的产量，确定了最佳前体——丙酸盐及其加入的最适时间与浓度，考察了铵盐对前体的影响，并进一步探索了丙酸盐前体对Ｍ－９０产生菌生长代谢的作用。

大环内酯类抗生素M-90的早期鉴别

从一株玫瑰绛红小单孢菌M-90的发酵液中分离得到淡黄色粉末,抗生素M-90。在筛选实践中,建立了适用于大环内酯类抗生素的PC、呈色反应、TLC(种间分类和属间鉴别)、UV分类、产生菌培养特征以及MIC六种试验——简便快速的理化和生物学早期鉴别手段,提高了早期鉴别的速度和准确性。结果分析表明:确认抗生素M-90为含有多组分的大环内酯类新抗生素,对G^+、G^-菌及真菌具有抑制作用。

羊种布鲁氏菌M5-90 omp31蛋白原核表达

克隆、测序布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白基因OMP31,原核表达OMP31并对其检测。从羊种布鲁氏菌M5-90中PCR获得OMP31基因,连接到pBS-T克隆质粒并测序;将测序正确的基因片段克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a,进行SDS-PAGE,而后Western-blot检测。结果M5-90疫苗株的OMP31基因序列与羊种布鲁氏菌参考株16M的同源性为99.03%;外膜蛋白基因OMP31在大肠杆菌表达后能够被Western-blot检测到。结论:表达的布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白OMP31可以被布鲁氏菌特异性血清识别,表现出良好的抗原性,为以后实验室诊断和疫苗的研究做好坚实的上游工作。

志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(Dna K)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价。方法 PCR扩增M90T中的基因dna K插入到原核表达载体p ET-24a中,获得p ET24a-dna K重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白Dna K-His。将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清。用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价。结果重组质粒p ET24a-dna K在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达。用纯化的融合蛋白Dna K-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验。结论成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白的小鼠多克隆抗体。

MB90F540/545单片机应用系列介绍——基于MB90F549单片机的频率测量仪

在分析富士通MB90F540/545系列单片机输入捕获功能的基础上,提出了用变M/T法实现高精度宽动态频率测量的方法,并对测量误差进行了分析,与常用方法相比,大大简化了电路,提高了频率检测的精度与动态性能。

新大环内酯类抗生素M－90的研究Ⅲ：抗生素M－90的摇瓶发酵研究

抗生素Ｍ－９０是一种具有厂谱抗菌活性的大环内酯类抗生素。用小单孢菌Ｍ－９０的突变株作为产生菌，研究获得了基本满意的培养基配方，确定了利于菌的生长及抗生素产生的培养条件。可溶性淀粉和黄豆粉分别是最佳碳源和氮源。在优化条件下，抗生素Ｍ－９０的摇瓶发酵单位达到７０－８０μｇ／ｍｌ。

弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成基因缺失突变体的构建

目的:构建弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因的缺失突变株。方法:分别扩增目的基因的上、下游同源臂和卡那霉素抗性基因片段,利用重叠延伸PCR技术将这3个片段融合为打靶片段,电击转化M90T/pKD46感受态细胞,在λRed重组系统的作用下,通过同源重组将目的基因置换为卡那霉素抗性基因,之后在辅助质粒pCP20的作用下切除FRT位点之间的卡那霉素抗性基因,得到基因缺失突变体。结果与结论:分别构建了M90T株毒力相关膜蛋白复合物4个组成蛋白Apy、DnaK、ClpB、YdgA的基因缺失突变体,为进一步研究各基因的功能提供了突变体。

羊种布氏杆菌M5-90菌苗对绵羊附睾种布氏杆菌病预防效果的病理形态学观察

由Br. ovis菌引起的公羊附睾炎可导致公羊生育能力下降、种用年限缩短、商品价值降低。据报道,我国从国外引进的种公羊中,已有由Br. ovis引起的布氏杆菌病的发生。但我国尚无针对Br.

新大环内酯类抗生素M－90的研究Ⅰ．产生菌的菌种鉴定

从我国四川土壤中分离到一株产生大环内酯类抗生素的小单孢菌，经过形态培养及生理生化特征等方面的研究，它在合成培养基上产生紫褐色菌丝体和可溶性玫瑰红色素，分解纤维素能力很强，属于紫色小单孢菌类群。与国内外资料发表的已知种比较，未发现与其完全一致者，故认为它是一个新种，命名为玫瑰红色小单孢菌Ｍ─９０（ＭｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｒｏｓｅｏｒｕｂｒａＭ─９０）。

^(99m)Tc-NGA肝脏动态图像的T_(90)参数显像及肝摄取率计算

参数显像具有定量显示脏器局部功能的特点,在核医学图像处理中有独特的优势,特别在门控心室图像处理上应用较多,方法也较成熟,但在其它方面的应用报道不多。我们自编程序,实现了99mTc-新半乳糖白蛋白（NGA）肝脏动态图像的T90（时间-计数曲线到达其最大计数90%的时间）参数显像,以定量反映局部肝功能。同时用反卷积方法对肝。

Moria M2型90与110刀头在LASIK中应用的随机对照研究

目的:观察MoriaM2型90与110μm角膜刀制作角膜瓣在准分子激光角膜原位磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)的疗效和并发症,探讨MoriaM2型90刀头在LASIK中应用的有效性、安全性和优点。方法:选取通过术前检查并自愿行LASIK手术的患者105例202眼,按随机数字表分成两组,使用MoriaM2型90刀头LASIK患者51例98眼,110刀头LASIK患者54例104眼做对照,术后即使用光学相干断层扫描仪(OCT)检测两组角膜瓣厚度,观察两组术后1d;1wk;1,3mo裸眼视力、矫正视力和角膜瓣形态、对合情况、并发症。结果:90刀头组术后角膜瓣厚度为118.3±15.2μm,110刀头组术后角膜瓣厚度为130.5±17.1μm,有显著性差异。90刀头组均未发现层间点状金属碎屑,110刀头组有层间点状金属碎屑个例(12例),有显著性差异。两组角膜瓣形态、对合情况、术后反应、术后裸眼视力相当。结论:应用90刀头LASIK的疗效及并发症和110刀头LASIK相当,但90刀头保留角膜基质床相对较厚,可矫治的屈光度更大,术后层间点状金属碎屑并发症更少,具有更好的安全性和更宽的适应范围。

布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫绵羊试验

为掌握布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫后的绵羊抗体水平、消长情况和不良反应发生情况,选择育肥羊和怀孕母羊各100只,分别用皮下注射免疫和点眼免疫法,开展了3个月的跟踪观察和定期检测。结果表明:布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)对育肥羊注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100.0%,90 d降至22.7%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达85.4%,90 d日降至0;个别3月龄以下育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度不良反应,甚至死亡。活疫苗(M5-90株)对怀孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100%,90 d降至14%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达95.9%,90 d降至6.4%;注射免疫和点眼免疫均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应。因此,布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)不宜用于3月龄以下羔羊和怀孕母羊的免疫。

志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备

目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清。结果:成功构建了原核表达载体pET24a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功。结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础。

X90M管线钢多丝直缝埋弧焊接模拟与分析

以大型通用有限元软件ABAQUS作为模拟分析工具,基于施加在DFLUX子程序中的双椭球热源模型,采用间接耦合方式和“生死单元”算法,模拟X90M钢板内、外三丝直缝埋弧焊接过程,获得了相应的焊接温度场及残余应力场。结果表明:内、外多丝直缝埋弧焊接在焊接工艺参数一定的条件下,每丝的起始焊接时间(或焊丝间距)决定是否形成共同熔池;多丝共熔池焊接因多热源温度场叠加作用剧烈,熔池峰值温度高于多丝单熔池焊接时的,较高的焊接温度场使得焊接过程中能够较为充分地进行冶金反应,且有效降低焊接接头及其附近的冷却速度,使得多丝共熔池焊接形成的焊接接头的焊后残余应力也相对较小。在兼顾质量和生产效率的前提下,X90M多丝直缝埋弧焊接生产实践推荐采用多丝共熔池焊接工艺。

Moria M2型一次性90刀头在LASIK中的应用观察

目的总结应用MoriaM2型一次性90刀头在准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)中制作角膜瓣的优越性。方法治疗近视患者100例(200眼)中,使用MoriaM2型一次性90刀头组(观察组)和常规130刀头组(对照组)各50例(100眼),对比两组患者角膜瓣厚度,术中角膜瓣的并发症,瓣下的光滑程度,术后角膜瓣的移位、皱褶,术后反应,术后的视力和屈光度。结果两组视力恢复良好。观察组角膜瓣厚度为(102.11±14.62)μm,对照组角膜瓣厚度为(136.37±20.16)μm,差异有统计学意义(P<0.01);观察组基质床平均厚度为(303.41±17.03)μm,对照组为(296.78±13.54)μm,两组均高于280μm理论安全范围,但观察组术后保留的角膜基质床的厚度大于对照组(P<0.01)。结论 MoriaM2型一次性角膜板层刀对保留角膜基质床有益,扩展了手术的矫治范围。

M90／M91微型OPLC

OPLC是在微型PLC系统中独树一帜的新产品，OPLC将控制器、I/O组件、操作显示面板溶为一体，具有结构简单、尺寸小巧、价格低廉、操作方面及基本功能全面等优点。

X90M直缝埋弧焊管线钢JCOE工艺制管前后力学性能变化

对TMCP工艺制X90M管线钢管经直缝埋弧焊JCOE成型工艺制管前后力学性能变化进行分析,由于制管及焊接过程中产生应力,制管后管体强度及屈强比较制管前有所增大。因此在钢板热机轧制过程中要严格控制屈强比。其次制管后管体冲击功数值和母材相差不大,但焊缝和热影响区在同一温度下的冲击功均明显低于母材,这是由于焊后焊缝和热影响区的晶粒较母材来说较为粗大且这种钢种未经热处理导致。

X90M试板直缝埋弧焊焊接接头工艺评定

采用多种焊材组合并配合不同焊接线能量对X90M钢板进行工艺评定,并通过有关测试分析。所选择的焊材、工艺参数等均满足要求。为提高接头强度和低温韧性等性能,在满足外观成型的前提下,应尽量采用较低的焊接线能量。

X90M钢板对接接头性能测试与分析

对管线钢用X90M钢板自动埋弧焊对接接头进行了力学性能测试、微观组织观察、SEM扫描等试验。分析得出焊缝组织主要由针状铁素体和粒状贝氏体组成,热影响区除粒状贝氏体外,还有少量块状铁素体。硬度测试结果表明,热影响区并不存在明显软化现象,焊缝和热影响区的冲击吸收能量均对温度较为敏感,但焊缝中纵横交错分布的针状铁素体和柱状晶状态导致其韧性比热影响区稍差。0℃下的母材和热影响区冲击断口形貌呈韧窝形状,而焊缝断口形貌则为准解理特征。