绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

维得利珠单抗联合美沙拉嗪治疗炎症性肠病的临床疗效及安全性分析

【目的】探讨维得利珠单抗联合美沙拉嗪治疗炎症性肠病的临床疗效及安全性。【方法】选取2021年1月至2022年12月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的84例炎症性肠病患者,采用随机数字表法将其分为常规组和联合组,每组42例。常规组给予美沙拉嗪,联合组在常规组的基础上给予维得利珠单抗,两组均在第8周观察治疗效果。比较两组临床疗效、外周血炎症因子[血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)]、炎症性肠病生活质量问卷(IBDQ)评分情况,记录治疗期间药物不良反应发生情况。【结果】联合组总有效率为95.24%(40/42),高于常规组的78.57%(33/42),差异有统计学意义(χ^(2)=5.126,P<0.05)。治疗后,两组患者血清IL-4、IL-17水平均低于治疗前,且联合组低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。常规组、联合组治疗前IBDQ评分分别为(115.89±12.93)分、(113.27±11.85)分,两组治疗后分别为(182.34±15.48)分、(198.15±7.26)分。治疗后,两组患者IBDQ评分高于治疗前,且联合组高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.156,P=0.693)。【结论】维得利珠单抗联合美沙拉嗪治疗炎症性肠病可提高治疗效果,抑制炎症因子合成,改善患者生活质量,安全性良好。

替雷利珠单抗联合舒尼替尼治疗转移性肾癌的临床疗效及生存分析

【目的】探讨替雷利珠单抗联合舒尼替尼治疗转移性肾癌的临床疗效及生存结局。【方法】将42例转移性肾癌患者随机分为观察组和对照组,每组21例。观察组口服舒尼替尼联合静脉滴注替雷利珠单抗治疗,对照组口服舒尼替尼联合静脉滴注生理盐水治疗。治疗6个周期后,比较两组患者的疗效、不良反应发生情况及生存预后;比较两组患者治疗前后的CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平。【结果】观察组疾病控制率为90.48%,高于对照组的61.90%,且差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)较治疗前均升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组MMP-2、VEGF及TIMP-1较治疗前均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组患者的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和观察组患者的中位无进展生存期(PFS)分别为11个月、15个月,两组中位PFS曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】替雷利珠单抗联合舒尼替尼治疗转移性肾癌的疗效确切且安全性良好。

贝伐珠单抗联合以紫杉醇+顺铂为基础的同步放化疗治疗子宫颈癌的临床疗效

【目的】探讨贝伐珠单抗联合以紫杉醇+顺铂(TP)为基础的同步放化疗治疗子宫颈癌的疗效。【方法】选择2021年12月至2023年1月本院收治的90例子宫颈癌患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组45例。对照组采用TP同步放化疗,观察组在对照组的基础上采用贝伐珠单抗治疗,21 d为1个治疗周期,均治疗3个周期。比较两组临床疗效、血清学指标、免疫功能指标、生活质量评分、不良反应发生率。【结果】观察组临床缓解率(55.56%)高于对照组(33.33%)(P<0.05)。治疗后,两组血清糖类抗原125(CA125)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平均降低(P<0.05),且观察组上述指标低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组CD3^(+)、CD4^(+)高于对照组(P<0.05),CD8^(+)低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组癌症治疗功能评价量表(FACT-G)评分均升高(P<0.05),且观察组FACT-G评分高于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】贝伐珠单抗联合以TP为基础的同步放化疗治疗子宫颈癌患者疗效确切,可改善患者免疫功能及生活质量,降低患者肿瘤标志物和TGF-β1表达水平,且安全性较好,值得临床推广应用。

雷珠单抗联合不同剂量维替泊芬光动力疗法治疗CSC合并CNV的临床疗效

【目的】探讨雷珠单抗联合不同剂量维替泊芬光动力疗法治疗慢性中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)合并脉络膜新生血管(CNV)的临床疗效。【方法】选取2014年2月至2019年12月上海健康医学院附属嘉定区中心医院收治的103例慢性CSC合并CNV患者,根据治疗方法的不同分为常规组[58例58眼,采用雷珠单抗+小剂量(1 mg/m^(2))维替泊芬光动力疗法治疗]和观察组[55例55眼,雷珠单抗+采用半剂量(3 mg/m^(2))维替泊芬光动力疗法治疗]。比较两组患者临床疗效、不良反应发生率及治疗前后视网膜下液隆起最高点高度(HPSF)、最佳矫正视力(BCVA)、视网膜中央静脉血流动力学参数[最大血流速度(V_(max))、最低血流速度(V min)]。【结果】观察组总有效率高于常规组(P<0.05)。治疗前,两组患者HPSF、BVCA比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者HPSF均降低,且观察组低于常规组(P<0.05);治疗后,两组患者BCVA均升高,且观察组高于常规组(P<0.05)。治疗前,两组患者V_(max)、V min比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者V_(max)、V min均降低,且观察组低于常规组(P<0.05)。常规组眼压升高1例,恶心、呕吐2例,不良反应发生率为5.17%;观察组眼压升高2例,恶心、呕吐2例,不良反应发生率为7.27%。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】采用雷珠单抗联合半剂量维替泊芬光动力疗法治疗慢性CSC合并CNV的效果显著,可改善患者视力和视网膜中央静脉血流动力学指标,且安全可靠。

达克替尼联合西妥昔单抗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效及生存情况分析

【目的】探讨达克替尼联合西妥昔单抗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及生存情况。【方法】204例晚期NSCLC患者,随机分为对照组和观察组,每组102例。对照组给予西妥昔单抗治疗,观察组在对照组的基础上口服达克替尼。两组患者均持续用药至疾病进展或毒性不能耐受。比较两组持续治疗3个疗程的疗效、肿瘤标志物、肺功能及药物不良反应发生情况和1年生存情况。【结果】观察组因未完成全疗程治疗脱落3例,对照组脱落5例,最终分别纳入99例和97例。观察组的临床控制率高于对照组(P<0.05)。两组治疗后的肿瘤特异性生长因子(TSGF)、细胞增殖抗原(PCNA)、癌胚抗原(CEA)均低于治疗前(均P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组治疗后的用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气容积(FEV 1)/FVC均高于治疗前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。两组药物不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。截至随访结束,对照组有2例失访,观察组1例失访,观察组98例患者存活62例,对照组95例患者存活47例,观察组1年总存活曲线优于对照组(P<0.05)。【结论】达克替尼联合西妥昔单抗治疗晚期NSCLC可增强抗肿瘤疗效,降低肿瘤标志物水平,改善近期生存情况。

贝伐珠单抗联合紫杉醇治疗晚期乳腺癌的疗效及对患者免疫功能的影响

【目的】探讨贝伐珠单抗联合紫杉醇治疗晚期乳腺癌的疗效及对患者免疫功能的影响。【方法】本院收治的80例晚期乳腺癌患者,随机分为两组,每组40例。观察组采用紫杉醇+贝伐珠单抗治疗,对照组仅采用紫杉醇治疗。比较两组临床疗效、血清相关指标[血管表皮生长因子(VEGF)、碱性纤维细胞因子(bF-GF)]、肿瘤标志物[血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))的水平及不良反应发生情况。【结果】观察组患者总缓解率为75.00%(30/40),明显高于对照组的50.00%(20/40),且差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组VEGF、bF-GF水平和CEA、CA125水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组上述指标水平均低于对照组(P<0.05);治疗后,两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均较治疗前升高(P<0.05),且观察组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】在晚期乳腺癌患者中应用贝伐珠单抗联合紫杉醇化疗,能够改善晚期乳腺癌患者的免疫功能,有效降低肿瘤标志物及血清相关因子水平,临床疗效较好,且不增加不良反应,值得临床推广应用。

PD-1单抗联合微波消融治疗原发性肝癌的临床疗效

[目的]探讨程序性死亡蛋白1(PD-1)单抗联合微波消融治疗原发性肝癌的临床疗效.[方法]回顾性分析2019年1月至2020年10月本院收治的78例原发性肝癌患者的临床资料,根据治疗方法的不同将其分为联合组(予以PD-1单抗联合微波消融治疗)和对照组(单一微波消融治疗),每组39例.比较两组患者的临床疗效、免疫功能、不良反应,采用Kaplan-M eier分析患者生存率.[结果]联合组疾病控制率及客观缓解率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者CD39^(+)、CD73^(+)水平均低于治疗前,且联合组均低于对照组(P<0.05).联合组皮疹发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组其他不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05).两组总生存率曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]PD-1单抗联合微波热消融治疗原发性肝癌患者,有助于提高患者疾病控制率,延长患者生存期且具有一定的安全性.

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。

贝伐珠单抗联合FOLFOX方案治疗对晚期结直肠癌VEGF、MMPs及COX-2表达的影响

【目的】探讨贝伐珠单抗联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）＋奥沙利铂（L-OHP）＋亚叶酸钙（LV）（FOLFOX方案）化疗对晚期结直肠癌患者血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMPs）及环氧化酶-2（COX-2）表达的影响。【方法】90例晚期结直肠癌患者，随机分为对照组与观察组，各45例。两组均采用FOLFOX化疗，观察组加用贝伐珠单抗，比较两组治疗效果及治疗前后患者血清VEGF、MMPs、COX-2表达的变化，采用结直肠癌生活质量量表评价患者治疗前后生活质量的变化，统计两组毒副反应发生率。【结果】①观察组治疗总缓解率高于对照组（P〈0．05）；②治疗后，两组VEGF、COX-2、MMP-2、MMP-9表达水平均降低，观察组降低幅度均高于对照组（P〈0．05）；③治疗后，两组各维度生活质量评分均上升（P〈0．05），观察组评分上升幅度高于对照组（P〈0．05）；④两组毒副反应均以Ⅰ～Ⅱ级白细胞降低、胃肠道反应、贫血为主，观察组无一例出现Ⅲ～Ⅳ级毒副反应，其各级毒副反应发生率略低于对照组，但差异无显著性（P〉0．05）。【结论】在晚期结直肠癌患者的临床治疗中，采用贝伐珠单抗联合FOLFOX化疗，患者总缓解率高，VEGF、COX-2、MMP-2、MMP-9表达下调明显，生活质量显著改善，且耐受性好。

贝伐珠单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗晚期直肠癌的临床疗效

【目的】观察贝伐珠单抗联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）＋亚叶酸钙（LV）＋奥沙利铂（L-OHP）（FOLFOX4）化疗方案治疗晚期直肠癌的临床效果。【方法】86例晚期直肠癌患者随机均分为对照组与观察组，各43例，两组均接受FOLFOX4一线化疗方案，观察组在此基础上加用贝伐珠单抗治疗，比较两组治疗效果，毒副反应，生存率。并采用结直肠癌生活质量评价表（EORTC QLC-CR37）评定患者治疗前后生活质量的改善情况。【结果】①观察组治疗总有效率高于对照组（P〈0．05）；②两组毒副反应发生率相比较差异无显著性（P〉0．05）；③随访2年，观察组总生存率高于对照组（P〈0．05）；④治疗后3、6、12、24个月，两组生活质量评分均降低（P〈0．05），观察组评分降低幅度均高于对照组（P〈0．05）。【结论】采用贝伐珠单抗联合FOLFOX4化疗治疗晚期直肠癌患者，总有效率高，同时可提高患者两年生存率，优化其生活质量。

曲妥珠单抗联合不同化疗药物治疗乳腺癌的临床疗效

【目的】探讨曲妥珠单抗联合不同化疗药物治疗乳腺癌的临床疗效。【方法】收集整理2007年1月至2010年1月期间在本院接受曲妥珠单抗治疗的97例乳腺癌患者的临床资料，其中单用曲妥珠单抗（A组）治疗的30例，曲妥珠单抗联合长春瑞滨方案（B组）治疗者33例，曲妥珠单抗联合紫杉醇方案（C）治疗者34例。比较分析不同方案的治疗效果、治疗期间的毒副反应及患者生存情况。【结果】B组治疗乳腺癌患者的总有效为36．36％，疾病控制率为78．78％；C组治疗乳腺癌患者的总有效率为32．35％，疾病控制率为67．65％；两组临床总有效率及疾病控制率均显著高于A组，且差异有显著性（P〈0．05）；治疗期间曲妥珠单抗联合不同化疗方案治疗乳腺癌患者的耐受性良好，未出现治疗相关性死亡；曲妥珠单抗联合化疗药物治疗后1、2、5年生存率均均显著高于单用曲妥珠单抗（P〈0．05），但B组与C组之间相比较差异无显著性（P〉0．05）。【结论】曲妥珠单抗联合不同化疗药物治疗乳腺癌的临床疗效优于单用曲妥珠单抗，且患者毒副作用均可耐受，值得临床推广应用。

P选择素L-EGF单抗对SCID小鼠胃癌转移抑制作用

目的:研究黏附分子P选择素L-EGF单抗在SCID小鼠胃癌转移中的治疗作用及其机制．方法:用SGC-7901人胃癌组织原位移植SCID小鼠建立转移模型．术后第3天开始,动物分别静脉注射生理盐水(生理盐水组,n=11)或P选择素L-EGF单克隆抗体(L-EGF单抗组,n =9),6 wk末取部分胃癌组织、肿大淋巴结和可疑转移脏器作病理检查;同时取部分胃癌组织作荧光定量PCR检测．结果:生理盐水组肿瘤转移率为81．8％(9／11),L-EGF单抗组转移率为11．1％(1／9),两组相比有显著性差异(P<0．05)．荧光定量PCR测定显示,SCID小鼠伴有癌转移者其胃癌中P选择素mRNA表达较不伴癌转移者明显增强;L-EGF单抗组P选择素mRNA表达较生理盐水组低(Ct值:20．54±2．20 vs 17．09± 1．40,P<0．05)．结论:P选择素与癌转移密切相关,其L-EGF单抗具有抗转移作用;其机制可能与阻断癌细胞与血管内皮的黏附以及抑制 P选择素基因表达有关．

FOLFOX4化疗方案联合西妥昔单抗治疗转移性结肠癌

【目的】探讨FOLFOX4化疗方案联合西妥昔单抗治疗转移性结肠癌的临床疗效及其作用机制。【方法】将65例转移性结肠癌患者随机分为观察组（33例）和对照组（32例）；对照组给予FOLFOX4化疗方案治疗，观察组在对照组的化疗方案上联合西妥昔单抗治疗；观察两组患者治疗后的有效性和安全性，并检测治疗前后患者血清中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）的水平变化。【结果】观察组患者的有效率为66．67％，明显高于对照组的46．88％，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组患者治疗后血清IGF-1、VEGF水平均明显降低，与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05），且观察组优于对照组（P〈0．05）；两组不良发应比较无统计学差异（P〉0．05）。【结论】FOLFOX4化疗方案联合西妥昔单抗治疗转移性结肠癌疗效显著，通过调节血清中IGF-1、VEGF水平变化可能是其作用机制之-。

单克隆抗体对活化腹腔巨噬细胞抗胰腺癌作用的影响

观察重组人白细胞介素２（γ－ＩＬ２）体外诱导的腹腔巨噬细胞，在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）介导下，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）机制对胰腺癌细胞的杀伤作用。４ｈ５１Ｃｒ释放实验表明，在ＹＰＣ３ｍＡｂ作用下，活化腹腔巨噬细胞对Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的杀伤活力明显增强，比单用巨噬细胞杀伤活力约提高７０．０％，而对照１－Ｆ／７抗登革热病毒单抗无明显影响。γ－ＩＬ２作用的腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞具有类似的ＡＤＣＣ杀伤效应。结果提示，γ－ＩＬ２和ＹＰＣ３ｍＡｂ联合腹腔注射，可能为胰腺癌的局部治疗提供一个新方法。

激光光凝联合玻璃体腔注射低剂量雷珠单抗治疗急进型后极部ROP的疗效

目的:观察视网膜光凝术联合玻璃体腔注射低剂量雷珠单抗治疗急进型后极部早产儿视网膜病变(ROP)的疗效。方法:选取2016-03/2018-05在我院新生儿中心住院筛查确诊为双眼急进型后极部ROP的患儿18例36眼,随机分为注药组和联合组,各9例18眼。注药组行玻璃体腔注射雷珠单抗0.4mg,联合组行后极部Ⅰ区及其颞侧2个视乳头直径以外无血管区域激光光凝联合玻璃体腔注射雷珠单抗0.25mg。术后随访12mo以上,观察两组患儿视网膜无血管区血管发育情况,血管嵴、附加病变、虹膜红变消退时间及不良反应发生情况。结果:术后平均随访18.7±6.3mo,两组患儿视网膜病变和虹膜红变均不同程度消退,视网膜血管继续向周边发育至锯齿缘或病变瘢痕化;注药组患儿血管嵴、附加病变、虹膜红变消退时间(2.01±0.32、1.92±0.51、1.59±0.07wk)均大于联合组(1.75±0.29、1.75±0.29、1.34±0.18wk)(均P<0.05);注药组新增视网膜前出血3眼,出血均自行吸收,联合组未出现局部出血及纤维增生。两组患儿术中和术后均未出现严重眼部和全身不良反应。结论:激光光凝术联合玻璃体腔注射低剂量雷珠单抗治疗急进型后极部ROP安全、有效。

玻璃体内注射康柏西普治疗视网膜分支静脉阻塞继发黄斑水肿的临床研究

【目的】初步评价玻璃体腔内注射康柏西普治疗视网膜分支静脉阻塞（BRV0）继发黄斑水肿（ME）的疗效及安全性。【方法】对2014年8月至2015年2月就诊于本院眼科已确诊为BRVO继发ME的患者21例（21眼）的临床资料进行回顾性分析，对患眼均给予玻璃体腔内注射康柏西普，观察术前和术后1d、1周、1个月、3个月时患者的最佳矫正视力，光学相干断层扫描测定黄斑中心区视网膜厚度的变化。【结果】在21眼中有19眼视力提高，2眼视力不变。治疗前的LogMRA视力为0．55±0．74，治疗后1周、1个月、3个月时分别为：0．57±0．70、0．61±0．63、0．62±0．58，其与治疗前相比差异均具有显著性（P〈0．05）。黄斑中心凹平均厚度治疗前为（404．25±62．76）μm，治疗后1周、1个月、3个月时分别为（354．25±64．12）μm、（221．75±37．30）μm、（195．30±24．70）μm，治疗后明显改善，与治疗前相比差异具有显著性（P〈0．05）。未发现与药物相关的眼部并发症及全身的不良反应。【结论】玻璃体内注射康柏西普治疗BRVO继发ME患者中短期内可提高视力、减轻ME，但长期疗效仍需进一步观察。

检测体外血小板活化程度时4种血小板表面活化标志蛋白的比较

利用间接免疫放射法测定血小板表面四种活化标志蛋白的分子数,它们为α-颗粒膜蛋白(GMP—140)、溶酶体膜蛋白(GP—53)、凝血酶敏感蛋白(TSP)及血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa复合物。1.以500U/L凝血酶活化的每个血小板表面,4种蛋白的分子数分别为12099±1089,14878±1919,11976±3066及45000±2900;2.在5μmol/L ADP活化时,表达的分子数为相应凝血酶活化时的27.5%、14.9%、4.7%及61%;3.正常固定全血中其分子数仅为9.8%,15.3%,10.4%和45%。结果提示。在检测血小板活化程度时,GMP—140分子数的测定较TSP特异性高,较GP—53分子表达敏感性好,在正常血小板表面只有极少的分子数,为一较理想的血小板活化检测指标。

肿瘤型丙酮酸激酶的原核表达及单克隆抗体的制备

目的利用原核表达系统表达重组肿瘤型丙酮酸激酶(TU M2-PK),并制备TU M2-PK的单克隆抗体(mAb)。方法提取卵巢癌细胞株SKOV3的RNA,通过逆转录、PCR扩增TU M2-PK基因,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签PGEX-4T-1载体连接,转化DH5α菌进行基因克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达TU M2-PK融合蛋白(分别含有His、GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。获得的蛋白经纯化后作为免疫原及检测原,进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测小鼠血清及细胞上清TU M2-PK抗体效价,Western blot分析mAb特异性。结果成功构建pET-32a-TU M2-PK、pGEX-4t-1-TU M2-PK工程质粒,获得两种标签的融合蛋白。将重组蛋白纯化后作为免疫原免疫小鼠,筛选获得两株稳定分泌TUM2-PK抗体的杂交瘤细胞株。分别命名为6A11、7C11,Western blot实验显示,两株均可以与重组蛋白特异性结合,并且能识别子宫颈癌细胞株(Hela)、胃腺癌细胞(SGC-7901)、肝癌细胞(HepG2)中的天然蛋白。结论成功制备了TU M2-PK蛋白及其单克隆抗体,为进一步开发TU M2-PK诊断试剂打下基础。

西妥昔单抗联合不同化疗方案治疗晚期直肠癌的疗效观察

目的观察西妥昔单抗分别联合FOLFOX与FOLFIRI两种化疗方案治疗晚期直肠癌患者的临床疗效和毒副反应。方法将80例晚期直肠癌患者随机分为A、B两组，每组各40例；A组：使用西妥昔单抗联合FOLFOX化疗方案治疗，B组：使用西妥昔单抗联合FOLFIRI化疗方案治疗。治疗6周后观察比较两组患者的近期疗效、生活质量和不良反应。结果 A、B两组患者的有效率和生活质量改善率比较差异无显著性（P ＞0．05）；两组患者的肿瘤直径和厚度均较治疗前明显减小（P ＜0．05），但两组之间比较差异无显著性（P ＞0．05）；两组不良发应在腹泻、神经毒性的发生上差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论西妥昔单抗分别联合FOLFOX与FOLFIRI两种方案治疗晚期直肠癌疗效相当，但在不良反应方面前者以神经毒性反应多见，后者以腹泻多见，总发生率两者相当。