宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达在绝经后HR-HPV并LSIL/ASC-US患者中的分流价值

目的探讨宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达水平在绝经后细胞学检查为低级别鳞状上皮内病变(LSIL)或无明确诊断意义的不典型鳞状细胞(ASC-US)且合并高危型HPV(HR-HPV)感染患者中的诊断分流价值。方法收集宫颈细胞学筛查为LSIL或ASC-US且合并HR-HPV感染绝经后患者的宫颈脱落细胞共120例,用qPCR检测宫颈脱落细胞的mybl2 mRNA表达水平。所有患者均经阴道镜下宫颈活检术行病理检查,根据病理结果分为宫颈癌(SCC)组(n=4),高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(n=18),LSIL组(n=38),宫颈炎症(NC)组(n=60),比较组间的mybl2 mRNA表达水平;根据HPV感染类型分为16/18型感染组(A组,n=35),16/18型合并其他HR-HPV感染组(B组,n=38),其余HR-HPV感染组(C组,n=47),比较组间的mybl2 mRNA水平。结果SCC组、HSIL组、LSIL组mybl2 mRNA表达水平均明显高于NC组(P<0.05);SCC组、HSIL组mybl2 mRNA表达水平均明显高于LSIL组(P<0.05);SCC组mybl2 mRNA表达水平明显高于HSIL组(P<0.05)。不同HPV感染组间宫颈脱落细胞mybl2 mRNA表达水平比较,A组、B组mybl2 mRNA表达水平明显高于C组(P<0.05),而A组和B组mybl2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈脱落细胞的mybl2 mRNA表达水平随宫颈病变程度的加重而升高,且16/18型HPV患者的mybl2 mRNA表达水平明显更高,提示mybl2 mRNA可能作为细胞学为LSIL或ASC-US且合并HR-HPV感染绝经后患者的诊断分流指标,以提高宫颈癌筛查准确率并减少医疗资源浪费。

撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛通过NLRP3/ASC/Caspase-1途径诱导IPEC-J2细胞焦亡

旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J2细胞,观察细胞损伤情况;RT-qPCR测定各组作用0.5、3、6、9、12 h后细胞内焦亡通路中关键因子NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、消皮素D(gasderminD,GSDMD)及炎性因子白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)的mRNA转录水平;激光共聚焦观察NLRP3/Caspase-1炎性复合体组装及表达情况;Western blot测定GSDMD及其活化形式GSDMD-N蛋白表达水平,PI染色检测胞膜完整性。结果表明:LPS+ATP处理显著促进细胞焦亡的发生,阴性对照组细胞正常生长、轮廓清晰,E.coli感染组及LPS+ATP组细胞出现变形、脱落、边界模糊等明显细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),且HE染色显示,E.coliHPI感染相较于E.coliΔHPI感染对细胞的损伤更严重;E.coli HPI组中的焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平在3~9 h均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;NLRP3/Caspase-1炎性复合体在细胞质中发生组装,且E.coli HPI组NLRP3/Caspase-1蛋白荧光强度、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达水平及PI染色阳性率均极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;E.coli HPI组的CPE、HE染色、焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达量、NLRP3/Caspase-1共定位情况均与LPS+ATP组相似。结果提示,撒坝猪源E.coliHPI通过上调NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路中关键因子mRNA水平,诱导NLRP3/Caspase-1炎性复合体的组装,促进焦亡标志蛋白GSDMD及GSDMD-N的表达,并对IPEC-J2细胞膜进行打孔,从而诱导细胞发生焦亡。

Experimental study of the effect of adipose stromal vascular fraction cells on the survival rate of fat transplantation

Objective To investigate the effect of adipose stromal vascular fraction cells(SVFs)on the survival rate of fat ransplantation.Methods 0.5mL autologous fat tissue was mixed with: ① DiI-labeled autologous SVFs (Group A);②

TMS1/ASC基因CpG岛甲基化与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的检测抑癌基因TMS1/ASC启动子区5′CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌(BTCC)中mRNA和蛋白表达水平。方法应用MSP技术检测膀胱移行细胞癌中TMS1/ASC基因启动子区甲基化状态,RT-PCR和Western blot法分别检测其mRNA和蛋白表达水平。结果TMS1/ASC基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在癌组织中甲基化频率为46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高(χ2=23.106,P<0.05)。在15例启动子异常甲基化的BTCC标本中,14例同时伴有TMS1/ASC基因表达缺失或下调,两者存在明显的相关性(γ=0.5842,P<0.05)。TMS1/ASC mRNA和蛋白表达在正常膀胱组织和BTCC组织中分别为81.3%(26/32)、18.8%(6/32)(P<0.01),不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMS1/ASC基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少,甚至缺失,这可能是膀胱癌发生、发展的原因之一。

宫颈细胞块Ki-67/P16免疫组化双染技术在ASC-US分流中的应用研究

目的探究宫颈细胞块Ki-67/P16免疫组化双染技术在ASC-US分流中的应用。方法收集2015年10月—2017年1月在福建中医药大学附属第二人民医院(省二医院)接受宫颈细胞学检查TCT检查的患者,采用免疫组化双染技术,检测192例患者宫颈细胞中P16、ki-67的表达。结果在细胞块中检测宫颈细胞Ki-67、P16的表达,免疫组化双染技术检测出慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ阳性表达分别为24.0%、69.2%、85.7%、100.0%。慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ阴性表达分别为76.0%、30.8%、14.3%、0.0%。结论 Ki-67/P16免疫组化双染技术有助于ASC-US患者分流管理,能提高ASC-US判读的准确性,降低高级别宫颈病变的漏诊率。

核纤层蛋白LaminA/C负性调控ASCs增殖促进应力诱导脂肪再生的实验研究

目的探索核纤层蛋白LaminA/C对脂肪来源间充质干细胞(Adipose-derived stromal cells,ASCs)机械敏感性的调控作用,及其在应力诱导脂肪再生中的作用机制。方法构建大鼠预扩张脂肪瓣(Expanded Prefabricated Adipose Tissue,EPAT)负压吸引模型,于术后1、4、8周取材制备标本,行组织免疫印迹及免疫化学检测核纤层蛋白(Lamins)表达量变化,用以分析核纤层蛋白表达与应力诱导脂肪再生的相关性;构建体外LaminA/C过表达慢病毒载体并转染ASCs,行体外静态拉伸ASCs处理并采用细胞免疫印迹及免疫荧光检测ASCs增殖程度,用以明确LaminA/C对ASCs增殖的调控作用。结果体内实验发现,负压作用早期,大鼠EPAT内ASCs增殖增多,与此同时,脂肪瓣内LaminA/C表达量明显下降,LaminB1、LaminB2的表达则无明显差异;体外实验发现,过表达LaminA/C可显著抑制体外静态机械应力对ASCs增殖的促进作用。结论新型力学感受器核纤层蛋白通过负性调ASCs增殖参与应力诱导脂肪组织再生过程。

宫颈细胞学诊断ASC-US的不同处理方法的临床观察

目的:评价宫颈细胞学诊断不能明确意义的不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)的临床意义。方法:分析2006年在本院行宫颈细胞学检查,按照TBS标准,3 166例患者中诊断ASC-US202例,随访146例患者的复查宫颈涂片及阴道镜+活检结果分析。结果:诊断ASC-US并得到随访治疗的146例患者中,诊断慢性宫颈炎101例占69.18%,病理学最终诊断SIL44例占30.14%(其中LSIL39例占26.71%,HSIL5例占3.42%),低分化鳞癌1例占0.68%。结论:宫颈细胞学诊断ASC-US的患者根据实验室形态学指导临床上进行进一步处理是可行的。

脂肪干细胞(ASCs)在急性肾损伤(AKI)动物模型治疗中的作用研究进展

近年来干细胞移植已成为损伤组织更新、再生和修复研究的重点。来源于脂肪组织的干细胞群较其他干细胞系有独特的优势。首先,脂肪组织分布广泛,容易获取,对患者创伤小,患者易于接受;其次,干细胞群易于分离,增殖速度快,能够快速应用于治疗。急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)作为内科常见急症,发病率高,治疗手段相对较局限,治疗效果不理想,亟需新的治疗方法,其中细胞疗法被认为是非常有前景的治疗手段。本文就脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)在AKI动物模型治疗中的应用进行综述和展望,以期为今后的研究奠定基础。

宫颈液基细胞学ASC-US患者病理特征及相关危险因素分析

目的:分析宫颈液基细胞学检查结果为未明确意义的不典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined significance,ASC-US)患者的病理特征及相关危险因素,探讨ASC-US患者的分流管理。方法:回顾性分析2019年9月至2021年1月在我院妇科就诊行宫颈液基细胞学检查结果ASC-US的194例患者的临床资料,患者均行HPV分型检测及组织病理学检查,分析患者的病理特征及相关危险因素。结果:194例患者中,慢性宫颈炎132例,低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)11例,高级别鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)42例,宫颈癌9例。将慢性宫颈炎及LSIL患者列为≤LSIL病变组,HSIL及宫颈癌患者列为≥HSIL病变组,2组患者在孕次、流产次数、避孕方式、HPV感染和高危HPV分型比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,孕次>2次、不使用避孕套避孕、有HPV感染和HPV高危型感染均为ASC-US发生HSIL及以上病变的高危因素。结论:高危型HPV检测是ASC-US患者分流的重要指标,孕次>2次、不使用避孕套避孕、HPV高危型感染均为ASC-US患者发生HSIL及以上病变的高危因素。ASC-US患者应基于病变风险个性化评估,有助于建立有效的分流管理策略。

高危型HPV E6/E7 mRNA检测对ASC-US患者的分流价值

目的分析高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学结果为未明确意义的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undertermined significance,ASC-US)的患者的分流价值。方法选取311例疑似宫颈病变患者同时行高危型HPV E6/E7 mRNA检测、HPV-DNA分型检测和宫颈脱落细胞的薄层液基细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)和细胞学结果为ASC-US患者均行阴道镜检查和宫颈活检。以病理报告为金标准,比较两种检测方法对细胞学检查结果为ASC-US的患者的检测效率。结果共85例ASC-US患者,其中慢性宫颈炎患者42例,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级患者23例,CINⅡ级患者7例,CINⅢ级患者13例。诊断TCT结果为ASC-US患者高级别宫颈病变的特异度比较,高危型HPV E6/E7 mRNA检测(80.0%)明显高于HPV-DNA分型检测(58.2%),差异有统计学意义(χ~2=13.458,P<0.001);两组敏感度、阳性预测值、阴性预测值比较,均无统计学差异(P>0.05)。结论与HPV-DNA分型检测相比,高危HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学检测结果为ASC-US患者具有更明确的分流意义,在TCT结果为ASC-US患者的分流管理等方面均有重要的临床应用价值。

脂肪间充质干细胞对谷氨酸诱导的SH⁃SY5Y细胞损伤具有保护作用

脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)来源广泛,增殖能力强,成为近期实验和临床研究的热点。已有研究表明,ASCs可缓解神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)。但其机制仍需进一步研究。本研究旨在探讨ASCs对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型的作用及其可能的机制。CCK-8检测结果显示,谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞增殖活力显著降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。ELISA检测结果显示,谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度显著升高(P<0.05)。Western印迹检测结果显示,谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞PI3K和AKT磷酸化水平、裂解胱天蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)水平显著升高(P<0.05)。与Glu组相比,Glu+ASCs组SH-SY5Y细胞增殖活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6浓度、PI3K和AKT磷酸化水平、cleaved-Caspase-3蛋白质水平显著降低(P<0.05)。总之,研究结果提示,ASCs对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。

微粒包裹型幽门螺杆菌疫苗口服诱导小鼠粘膜免疫应答的研究

幽门螺杆菌 (Helocobacterpylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌 ,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果 ,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)的数量增减。发现微粒包裹型Hp疫苗免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应 ,PP结抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)

PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球黏膜免疫研究

目的 应用复乳挥发法制备PELA泛影葡胺显影微球与幽门螺杆菌超声上清口服疫苗微球 ,并进行靶向与黏膜免疫研究。方法 采用CT技术 ,研究显影微球的靶向 ;PELA幽门螺杆菌超声上清口服疫苗微球口服免疫小鼠后 ,运用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)的数量增减。结果 口服粒径在 10 μm以下的微球 ,首先粘附在胃肠黏膜表面 ,后投递于PP结 ;H .pylori疫苗微球免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应 ,PP结抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)数量与肠道sIgA水平密切相关。

脂肪来源干细胞的基础研究进展

2001年,ZuK等[1]研究发现并证实,抽脂术获得的脂肪组织中存在一群具有多向分化潜能的细胞,被称为脂肪来源干细胞（Adipose-Derived Stromal/Stem Cells,ASCs）。从此以后,ASCs开始逐渐被人们认识。ASCs取材容易、来源丰富,

197例宫颈非典型鳞状细胞与组织学诊断的对照研究及10例误诊分析

目的对照宫颈非典型鳞状细胞与组织学诊断结果,分析误诊病例,探讨宫颈非典型鳞状细胞的诊断方法。方法回顾性分析197例行阴道镜下宫颈活检组织学诊断和宫颈液基薄层细胞检测(TCT)诊断的宫颈非典型鳞状细胞。并对细胞学诊断为非典型鳞状细胞—不能明确意义(ASC-US)、组织学诊断为鳞状细胞癌或CINⅢ的病例行显微镜下复检。结果 197例宫颈活检中ASC-US 140例,经宫颈活检组织学证实为阳性的病例占37.9%;非典型鳞状细胞—不除外上皮内高度病变(ASC-H)57例,经组织学证实为阳性的占61.4%。细胞学诊断为ASCUS,组织学诊断为鳞状细胞癌或CINⅢ的病例,细胞学主要呈现3种形态:少量的异型深染细胞,核浆比升高;深染的细胞巢团,结构不清,炎症背景明显;浅染的细胞团,核有重叠,形态较均一,部分可见核仁。结论 ASC-H与组织学诊断有较好的符合率,ASC-US中包含了少数更高级别的病变,需严格掌握诊断标准。

脂肪干细胞结合碱性成纤维细胞生长因子辅助颗粒脂肪移植的实验研究

目的探讨脂肪间充质干细胞(ASCs)结合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)辅助颗粒脂肪移植是否能提高移植脂肪存活率.方法采集人颗粒脂肪及人脂肪间充质干细胞ASCs分离、培养、标记,对照组以ASCs直接与同一患者颗粒脂肪混合.实验组以ASCs加bFGF后与同一患者颗粒脂肪混合.各组细胞颗粒脂肪混合物注射移植至裸鼠皮下,6周后检测脂肪形成,形态学及分子生物学方法检测比较两组脂肪标本.结果成功获得ASCs用于移植实验.在实验组(ASCs+bFGF+颗粒脂肪组)及对照组(ASCs+颗粒脂肪组)均形成脂肪组织,新生组织湿重实验组明显高于对照组(P<0.01).Western blot检测结果显示实验组VEGF,bFGF表达均高于对照组.结论脂肪间充质干细胞结合碱性成纤维细胞生长因子辅助颗粒脂肪移植,通过改善脂肪间充质干细胞存活、增殖及移植组织血运,提高了移植脂肪存活率.

脂肪干细胞对糖尿病兔种植体周围植骨及骨结合影响的实验研究

目的:观察脂肪干细胞(adipose-derived sem cells,ASCs)对糖尿病兔种植体周围新骨生成及种植体骨结合的影响,为解决糖尿病缺牙患者的种植修复难题提供新思路。方法:分离培养兔ASCs,并通过多向诱导分化进行鉴定;14只新西兰大白兔成功建立Ⅰ型糖尿病动物模型后,于每只动物的双侧胫骨植入纯钛种植体,并随机在一侧种植体周围植入ASCs与Bio-Oss骨粉的复合物作为实验组,另一侧植入生理盐水与Bio-Oss复合物作为对照。分别于术后第4、8、12周取材,进行Micro-CT扫描、硬组织切片并行丽春红染色,观察植骨区骨质生成情况及种植体骨结合情况。结果:分离培养的新西兰兔ASCs增殖活性高,诱导后可向成脂细胞及成骨细胞分化,将其与Bio-Oss复合并植于种植体周围8周和12周后,成骨效果及种植体骨结合情况均好于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ASCs能促进糖尿病新西兰兔种植体周围植骨区新生骨生成,并提高种植体的骨结合率。

兔干细胞的体外培养和碱性成纤维细胞生长因子对其代谢的影响

目的探索体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和脂肪干细胞(ASCs)变化,以及碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)对其代谢的影响。方法分别用DMEM、DMEM/F12(2∶1)、α-MEM培养兔BMSCs和ASCs。将体外培养的第3代兔BMSCs和ASCs各分为2组后培养到第3代。A组:软骨诱导培养基(CM)+ASCs,B组:CM+ASCs+bFGF5ng/ml,C组:BMSCs+CM,D组:BMSCs+CM+bFGF5ng/ml。倒置显微镜观察细胞形态学变化,测定35SO42-摄入量及羟脯氨酸浓度。结果α-MEM培养基比DMEM、DMEM/F12(2∶1)制备的BMSCs和ASCs所需时间缩短。单层培养的BMSCs和ASCs增殖较快,贴壁较牢且生成细胞集落,但经CM诱导后,细胞增殖较慢,贴壁不牢,且细胞没有集落生成。诱导后的BMSCs和ASCs的形状趋向于类圆形,B组和D的细胞数量比A组和C组的细胞多,B组、D组分别比A组、C组表达羟脯氨酸增加、35SO42-摄入量增加,而D组羟脯氨酸表达和35SO42-摄入量与B组无显著性差异。结论添加了bFGF的CM诱导液诱导的兔干细胞生长较好,代谢增加。

幽门螺杆菌全菌抗原口服免疫BLAB/c小鼠的免疫应答机理研究

目的分析幽门螺杆菌全菌抗原的口服免疫应答反应。方法 EL ISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平 ,EL ISPOT分析胃粘膜、派伊尔小结 ( PP)抗原特异性抗体分泌细胞 ( ASC) ,RT- PCR分析 PP T细胞因子 m RNA表达水平。结果 1口服免疫可诱导强烈的血清 Ig G反应和唾液、粪便提取物特异 s Ig A反应 ;2胃粘膜、PP结产生大量抗原特异性抗体分泌细胞 ( ASC) ,尤以 s Ig A- ASC型居多 ,PP结抗原特异性形成细胞 ( ASC)数量与特异抗体水平密切相关 ;3加佐剂免疫组小鼠 PP T细胞 ,体外抗原刺激下 ,早期高表达 IFN -γ,晚期高表达 IL - 4。结论全菌抗原和粘膜佐剂免疫可诱导H .pylori特异的系统、粘膜免疫应答 ,局部 s Ig A可能在抗 H .pylori感染中具有重要作用 ,肠粘膜免疫主要诱导部位 PP早期表现为 TH1 型优势应答 ,晚期则转为 TH2 型优势应答。