微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒最佳收获时间的研究

本试验旨在探讨使用微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,对比不同时间段培养出的抗原效价,从而确定TGEV培养的最佳收获时间,提升抗原效价,为最终生产出高质量、品质稳定的TGEV活疫苗奠定基础。在生物反应器细胞上罐时每次接入细胞量达到1.2×10~9个,按相同的条件进行培养。当微载体上的细胞长至单层致密时,进行细胞接毒,接毒后4 h开始取样,接着每隔2 h留样,18 h后每隔1 h取样1次,直到载体上细胞总脱落面积达80%~85%结束取样,检测抗原效价。结果表明:在接毒后20~21 h病毒效价达到峰值,故确定在接毒后20~21 h为病毒最佳收获时间。

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获_酶联免疫吸附试验 (AC_ELISA)、琼脂扩散试验 (AGP)快速诊断试纸条 (ISK)对感染同株强毒或弱毒囊病病毒 (IBDV)的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较。结果表明 ,上述 3种方法测得法氏囊中强毒IBDV抗原效价分别为 10 -6 .0 (AC_ELISA)、2 -3.0 (AGP)和 10 -3.0 ;测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为 10 -1.0 、0和 0。强毒株接种鸡胚后 ,只有第 1代鸡胚组织可被AC_ELISA测到低效价的IBDV抗原 ,而第 2代以后则未能测到病毒抗原。弱毒疫苗株IBDV感染鸡后 ,法氏囊中可测到低效价抗原 。

Rh抗原缺失Dc-型抗体研究

目的研究Rh抗原缺失患者血清中抗体性质和效价。方法结合其临床表现和家系调查,利用血型血清学方法对RhDc-孕妇体内的抗体性质及效价进行分析。结果患者血型为B、Dc-型,其亲代血清学表型为父AB、Dccee型,母O、DCCee型,患者血清中存在IgM及IgG抗-Hr0,效价分别为128、512;IgM及IgG抗-e,效价分别为16、8。结论国内外有报道在RhD-和Rh-患者中查到IgG性质抗-Hr0,在RHDc-患者体内查出IgM和IgG性质的抗-Hr0和抗-e在国内外尚属首次报道;该患者体内RhEe缺失可能的原因为RHCE基因的遗传和变异;IgM型抗-Hr0会干扰血型检测,导致ABO正反定型不符,在临床工作中应引起注意。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备

对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的两种半抗原合成方法进行对比研究,合成半抗原,并采用活化酯法将半抗原与牛血清白蛋白偶联制备得到免疫原,通过特定程序免疫日本大耳白兔获得了多克隆抗体。抗血清效价为1∶32000,protei-nA-sepharose4B亲和层析纯化的DON抗体与DON、3-AC-DON(3-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、15-AC-DON(15-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、T-2毒素、OTA(赭曲霉A)、ZEN(玉米赤霉烯酮)的交叉反应率分别为:100%、500%、2.50%、0.10%、0.01%、0.01%,表明了所制备DON抗体的高特异性。

禽Ⅱ型副粘病毒各种禽源分离株的免疫原性

分别制备了源于鸡、鹅、鸽、鹌鹑、孔雀、画眉鸟、珍珠鸡的禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）7个强毒分离毒株和商品弱毒疫苗株克隆30（C30）的灭活油乳剂苗，并用这8种灭活油乳剂苗和C30株的活疫苗分别在鸡、鹌鹑、鹅和鸽进行了免疫及交叉攻毒保护试验。免疫后（PI）分别测定试验禽血清的新城疫病毒（NDV）血凝抑制（HI）抗体的滴度，并于PI5周用强毒株进行攻毒。结果表明，鸽的HI抗体几何平均滴度（MAT）为9．00～10．0log2，鸡的为7．13～7．63log2，鹌鹑的为5．OO～5．13log2，鹅对灭活油乳剂苗的为5．63～6．38log2、而对C30株活疫苗的仅为3．38log2；除了C30株活疫苗免疫鹅提供的保护率比较低（20％）外，8种油乳剂苗都能对同源或者异源强毒株的攻毒提供比较高的保护率（66．75％～100％）。研究结果表明，经典疫苗株C30与近年来从各种不同禽类分离的致病性APMV-1野毒株之间、不同禽源分离株之间的抗原性，以及各种不同禽源分离株的之间的免疫原性差异均不大。

纯合子红细胞抗原在鉴定低效价抗体中的应用

目的探讨纯合子红细胞抗原在低效价不规则抗体鉴定中的意义。方法针对有剂量效应的不规则抗体(抗-D、抗-E、抗-c、抗-C),制备相应的纯合子红细胞和杂合子红细胞,以盐水法、凝聚胺法、抗球蛋白试验,分别鉴定待测血清标本中相应抗体效价,观察各自的效价评分。结果与杂合子组相比,纯合子组抗球蛋白试验的效价评分轻度升高,凝聚胺试验的效价评分显著升高。结论纯合子红细胞能有效鉴定低效价不规则抗体,确保临床输血的安全性和有效性。

恶性肿瘤患者化疗前后血型抗原和抗体分析

目的 了解恶性肿瘤患者化疗对红细胞血型抗原和抗体的变化。方法 检测 1 0 4例患者化疗前后ABO血型抗原效价、抗 A、抗 B抗体效价 ,A型和O型患者化疗前后抗原抗体效价与积分做了比较 ;抗原检测法 ,将标准血清做倍比稀释加患者的红细胞 ,离心肉眼观察 ,不凝集的前 1管为抗原效价 ,同时以健康人的红细胞做对照 ;抗体检测方法 ,将A型者的血清做倍比稀释后加对应的红细胞 ,观察结果同抗原方法。结果 O型抗 A、抗 B效价与积分无差异 ,A型血型抗原化疗前后有显著性差异 ,化疗后明显低于化疗前 ,P <0 .0 5。O型、A型、B型男女患者抗原抗体效价与积分进行比较 ,O型与B型男女抗原抗体、效价与积分无差异 ;A型男女抗 B抗体效价与积分有显著性差异 ,女性明显高于男性。结论 提示在给肿瘤患者 ,特别是A型患者配血、鉴定血型时遇有正反不符、前后不符时要考虑是A抗原减弱 ,在给这些患者配血时 ,最好输注O型红细胞 ,已防输错血 ,防止发生意外。

非活动性HBsAg携带者临床特征及自发性HBsAg血清学清除相关因素分析

目的了解非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carriers,IHC)临床特征及自发性HBsAg血清学清除相关因素。方法纳入2009年1月至2015年12月在北京佑安医院就诊且至少随访一次的IHC 289例,所有患者均未接受任何核苷类似物和(或)干扰素抗病毒治疗。将对随访过程中是否出现自发性HBsAg血清学清除患者进行差异比较。结果289例IHC的ALT水平为(21.40±7.64)U/L,血清HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平分别为4592.00(2262.00,6741.00)COI、0.10(0.09,0.12)COI和430.05(213.25,824.25)IU/mL。血清HBsAg与HbeAg呈正相关(r=1.86,P<0.01),与年龄呈负相关(r=-1.82,P<0.01),与HBV DNA(r=0.09,P=0.58)无明显相关性。平均随访3年,其中17例(2.60%)患者发生自发性HBsAg血清学清除,年发生率为0.87%,其血清HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平明显低于无自发性HBsAg血清学清除者(均P<0.01),而两组之间年龄、性别、肝功能等无明显差异。结论在IHC中,血清HBsAg与HBV DNA水平无明显相关性,血清HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平较低者更易发生自发性HBsAg血清学清除。

HBeAg阴性及HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的临床特征比较

目的分析HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者临床特征差异。方法对290例慢性乙型肝炎患者的住院病历进行临床特征采集,分析HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者年龄、性别、家族史、病程、肝功能、HBV DNA定量、HBsAg定量、HBV的表面抗原蛋白前S1抗原(Pre-S1Ag)等指标的差异。结果 HBeAg阴性组年龄高于HBeAg阳性组,HBeAg阴性组病程长于HBeAg阳性组,HBeAg阴性组谷草转氨酶低于HBeAg阳性组,HBeAg阴性组HBsAg定量低于HBeAg阳性组,差异有显著性(P<0.05);45.91%的HBeAg阴性组患者HBV DNA<10~4copies/ml,59.39%的HBeAg阳性组患者HBV DNA病毒载量>10~6copies/ml,差异有显著性(P<0.05);HBeAg阴性组Pre-S1A异阳性率(50.81%)低于HBeAg阳性组(75.98%),差异有显著性(P<0.05)。结论虽然HBeAg阳性组年龄轻、病程短,但是其HBV病毒载量、HBsAg定量、Pre-S1Ag阳性率更高,Pre-S1Ag、乙肝表面抗原定量、HBV DNA能很好地反映病毒在体内复制及疾病进展情况。

用PPA-ELISA等5种方法检测布病抗体敏感性

以布病S_2苗免疫猪,7,21和35天采血,血清457份。以4种常规方法检测,RBPT和SAT两法的检出率高于其他方法。血清置-80℃冰箱冻存2个月后,取84份,用PPA-ELISA及4种常规方法检测,SAT的阳性率为90.5％,高于其他方法,差异显著(P<0.05)。PPA-ELISA和RBPT分别居第2位(87.2％)和第3位(85.7％)。PAT和CFT阳性率最低。检出抗体滴度比较,SAT高于PPA-ELISA,而后者又高于PAT。SAT、PPA-ELISA和RBPT三者之间符合率均较高(88％)。PPA,ELISA检测猪布病免疫抗体的敏感性低于SAT而高于其他方法。本文还探讨了5种方法的优缺点。

优化ApoB抗原免疫剂量提高抗体产生的效果

以湖羊为研究对象,设计了3种不同的ApoB抗原免疫剂量,从抗体产生规律、抗体效价和ApoB产品性能三个方面进行了统计和分析。结果表明:组2(抗原剂量每次0.4 mg)的抗体效价显著高于组1(抗原剂量每次0.2 mg)和组3(抗原剂量每次1 mg),组2五免后的抗体效价能够达到1:2~9,而且ApoB的产品性能检测各个指标均合格。表明ApoB抗原每次免疫注射剂量为0.4 mg时,所生产的ApoB抗体效果最佳,为ApoB抗体广泛应用于医疗领域奠定基础。

口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系

为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5μg时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。

30例异基因造血干细胞移植受者移植后ABO血型抗原和抗体效价的变化

目的:对异基因HSCT对受者ABO抗原和抗体效价的变化进行临床监测,为HSCT移植的输血支持治疗提供参考依据。方法:对30例HLA配型相合、ABO血型抗原不合的HSCT受者的移植前后进行ABO血型鉴定;选取其中2名患者,在移植后第1、2、4、5、7、8、10周检测其ABO血型抗原强度和抗体效价的变化。结果:所有30例ABO血型抗原不合的配对,移植后受者的血型抗原转变为供者的血型抗原,其中,主次侧均不合的配对在移植后第4周血型抗原发生转变,仅次侧不合的配对在移植后第7周血型抗原发生转变;仅主侧不合的配对,移植后的正反定型结果相符;仅次侧不合的配对,第8周血清中可检出凝集素(抗B或抗A)、抗体效价为1∶4;主次侧均不合的配对,移植后血清中未检出凝集素,且出现了正反定型结果不相符的结果。结论:异基因HSCT移植,应尽量选择HLA配型相合的受者-供者配对,输血时应选择不被受者血清中抗体所凝集的红细胞并不含相应抗原,以及供者血清中不含相应抗体的血小板或血浆进行输注。

鸡大肠杆菌改良微量凝集试验抗原的制备及试验条件优化

本研究对微量凝集试验进行了改良,改进了抗原的制备方法,优选了检测鸡血清中大肠杆菌抗体的微量凝集试验的条件,经方阵试验,抗原最适浓度为70亿/ml,反应最适温度为37℃,最适反应时间为4～5h。结果表明改良后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,阳性结果和凝集图案清晰,易于观察。本试验具有敏感、特异、快速、简便、定性又定量的特点,便于推广应用。

输血相容性检测室内质控品制备技术优化与性能评价

目的优化自制输血相容性检测室内全血质控品制备技术,检测其保存过程中综合性能指标的变化,确定合理的处理流程、保存期限并评价其应用价值。方法选择多人份采集时间≤10 d的B型RhD阴性健康献血者标本,将其混合后离心留取上清血浆,再将混合浓缩红细胞分成2组,MAP组:使用MAP红细胞保养液洗涤2次;Saline组:使用生理盐水洗涤2次。将2组洗涤后的红细胞分别与MAP红细胞保存液、对应混合血浆按照1∶2∶3的体积比混合。选择商品化IgG抗-D试剂做抗-D效价测定,确定出现最后1个2+凝集强度的稀释倍数,并按照此稀释倍数分别在2组质控品中填加相应体积的IgG抗-D。将2组混合悬液分装在硬质塑料试管中盖帽4℃保存,每天在室温放置1 h,分别在保存的0、35、42、49 d检测质控品标本红细胞与标准抗-B的凝集强度、IgM抗-A与反定A细胞的凝集强度、IgG抗-D与RhD阳性O型红细胞的凝集强度、上清液中Na+、K+、LDH、乳酸、FHb浓度、红细胞形态变化以及质控品中细菌繁殖情况。结果保存过程中2组质控品红细胞B抗原、IgG抗D抗体反应活性均无明显变化(P>0.05),IgM抗A抗体反应活性虽出现波动(P<0.01),但凝集强度变化均在1+范围内;2组质控品K+、乳酸浓度均随保存时间延长明显增高(P<0.01),但保存35、42d时2组各指标之间无明显差异(P>0.05);2组质控品FHb浓度均随保存时间延长而增高,但相同保存时间2组之间比较无明显差异(P<0.01)。保存49 d时MAP组和Saline组FHb浓度分别为(857.1±301.5)mg/L和(595.3±334.9)mg/L,与保存0d相比均明显升高(P<0.01),MAP组部分质控品FHb浓度已经超过中度溶血标准(1 000 mg/L);2组质控品保存末期(≤42 d)红细胞都会出现一定程度的皱缩并形成棘突,但2组之间无明显差异;2组质控品保存过程中都未见细菌生长。结论本室采用2种方法自制的全血质控品质量无明显差异,保存期都能达到42 d,且管间差异小、抗原抗体反应活性稳定,能够满足输血相容性检测室内质控的相关要求,适合在输血相容性检测实验室推广。

细胞浓度对血型血清学试验灵敏度的影响

目的探索在常用血型血清学试验细胞浓度范围内,浓度的上限和下限对直接血凝试验及间接抗球试验的检测灵敏度是否有影响。方法采用单克隆Ig M及Ig G抗-D分别与1%、2%、3%、4%、5%、6%的R1R2细胞反应,通过试管法结合流式细胞术,检测抗体与不同浓度红细胞的反应效价,以及同一抗体浓度下不同浓度红细胞的抗体结合效率的差异。并采用酶联免疫吸附(ELISA)方法对单克隆抗体浓度进行定量。结果单克隆Ig M抗-D及Ig G抗-D的效价随着红细胞浓度的下降而依次降低,在常用血清学红细胞浓度范围内,2%红细胞与两类抗体的反应效价皆是5%的4倍。在相同抗体浓度下,细胞结合抗体平均荧光强度(MFI)随细胞浓度下降而升高。其中当Ig M、Ig G抗-D浓度分别为(25.50±1.1)μg/m L和(2.71±0.08)mg/m L时,2%红细胞结合Ig M抗-D及Ig G的MFI分别比5%红细胞高出104.2%和67.8%。结论在常用血型血清学试验细胞浓度范围内,血型血清学试验检测灵敏度随红细胞浓度下降而升高。

人源抗-D亲和力测定方法的建立及其验证

目的建立1种相对简便的测量红细胞抗体亲和力方法,以之研究亲和力因素对红细胞抗体检测的影响。方法根据亲和力公式,在红细胞与抗体反应达到平衡时,通过测量游离抗体浓度以及计算红细胞表面结合与未结合抗体的抗原比例,可计算出抗体与相应红细胞的结合常数(Ka)即亲和力。应用定量的R1R1红细胞吸收高效价人源抗-D,先测定饱和吸收抗-D的量,再测量不同浓度抗-D被定量红细胞吸收后游离抗体浓度,计算红细胞结合与未结合抗-D的D抗原的比值,推导出人源抗-D与R1R1细胞反应的结合常数。结果检测中使用的人源抗-D与R1R1细胞反应亲和力为(2.1-7.6)×108;实验显示,红细胞结合抗体量越少,亲和力相对越高。平行检测的1例单克隆Ig G抗-D的亲和力约为4.6×109,明显高于人源抗-D。结论所建立的测量红细胞抗体亲和力方法更为简便,减少了出现偏差的机会,适用于基础、临床以及检测的方法研究。

流式细胞术快速测定逆转录病毒滴度的研究

目的 建立一种快速测定逆转录病毒滴度的方法。方法 用通过乒乓转导获得的逆转录病毒 (G1FP ,LGSN ,CD87)分别感染NIH 3T3受体细胞 ,以流式细胞术 (FCM )定量分析受体细胞中绿色荧光蛋白 (EGFP)或CD87的表达 ,并与常规的耐药集落形成法进行比较。结果 PT6 7/G1FP细胞高度表达EGFP ,荧光强度较对照细胞提高 10 5 1倍 ;G1FP - 8,Am12 /G1FP ,PT6 7/G1FP ,Am12 /LGSN和Am12 /CD87细胞上清中病毒滴度分别为 2 .9× 10 6,1.1× 10 5,2 .0× 10 6,1.5× 10 5和 4.3× 10 5感染性颗粒 /ml,比集落形成法测得的滴度低 3～ 6倍。结论 FCM分析抗原表达是测定逆转录病毒滴度的有效方法 ,特别适宜于缺乏选择性基因的载体。

旋转振荡法配制IFA抗原及其在TAT生产中的应用

建立了旋转振荡法配制弗氏不完全佐荆(IFA)抗原,并在精制破伤风抗毒素(TAT)生产中,与传统方法配制的IFA抗原进行比较。随机抽出40匹生产马(骡)分为两组,每组20匹,分别采用两方法配制的抗原实施免疫。于免疫第6程开始,两组再随机抽出10匹作为各自的实验组,辅以静脉注射小牛胸腺肤以提高其免疫血浆效价。结果:四组在小牛胸腺肽应用前的第5程,其免疫血浆效价比较(F=0.35,P>0.05)。至第11程四组比较(F=9.16,P<0.01)。提示:两方法在免疫及提高血浆效价方面,效果一致。本研究为实验室、尤其是临床血清生产中IFA抗原的制奋以及其他水油乳剂的乳化,提供了简便、快速,且能大量配制的可靠而有效的方法。

家禽卵黄抗体效价检测结果影响因素分析

为进一步规范卵黄HI抗体效价检测方法,试验从所用红细胞的种源性、稀释液种类以及抗原厂家3方面对HI抗体效价检测方法进行对比分析。研究发现,当卵黄样品抗体效价较高时使用异种家禽的红细胞对试验结果影响差异不显著(P>0.05),样品抗体效价较低时使用异种家禽红细胞对试验结果有一定影响,但差异同样不显著(P>0.05);选择1×PBS或者0.9%的生理盐水作为稀释液对试验结果影响不大(P>0.05);使用不同厂家的抗原检测抗体效价禽流感H5亚型(Re-7株)、禽流感H7亚型(H7N9),差异极显著(P<0.01)。卵黄抗体效价的检测,对稀释液的要求不高,但应尽量选择同种家禽的红细胞,抗体效价检测结果的对比分析应当选择正规厂家相同批次的抗原进行比较。