口腔鳞状细胞癌患者外周血淋巴细胞计数及CD69表达

目的 分析外周血淋巴细胞计数及CD69的表达在口腔鳞状细胞癌发生及进展中的意义。方法 选取2018-2020年北京口腔医院收治的口腔鳞癌患者45例作为患者组,健康对照组65例。采用流式细胞术检测两组受试者外周血中淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达,分析患者组与对照组、不同临床分期及不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达的差异。结果 患者组外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达显著低于对照组(P<0.01);淋巴细胞计数在Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌中无显著性差异(P>0.05),Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌患者组外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达低于Ⅰ~Ⅱ期患者组(P<0.05)。不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达差异不显著。结论 口腔鳞癌患者外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数降低,CD69表达降低及T淋巴细胞CD69表达降低,可能与肿瘤的发生及进展相关。

中老年乳腺癌患者手术前后CD69、IL-2及IL-6水平的变化

目的探讨中老年乳腺癌患者手术前后CD69、IL-2及IL-6变化的临床意义。方法应用流式细胞仪检测正常妇女及45例中老年乳腺癌患者手术前后外周血T淋巴细胞CD69表达的百分率。ELISA法检测研究对象外周血IL-2及IL-6的水平。结果乳腺癌患者术前外周血中T淋巴细胞CD69表达的百分率低于正常对照组,血清IL-2水平低于正常对照组,血清IL-6水平高于正常对照组(P<0.05)。乳腺癌患者术后外周血中T淋巴细胞CD69表达的百分率高于术前水平,血清IL-2水平高于术前,血清IL-6水平低于术前(P<0.05)。结论中老年乳腺癌患者术前免疫功能较低,术后免疫功能明显提高,表明手术能在一定程度上改善患者自身免疫功能,对预后产生一定的积极作用。

有丝分裂原体外活化成人外周血自然杀伤细胞CD69表达的研究

目的 :利用自然杀伤细胞 (NK)的早期活化标记CD69的表达探讨NK细胞体外活化的规律 ,促进这类细胞的临床应用 方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人外周血单个核细胞 (PBMC) ,分别在两种不同的有丝分裂原 ,植物血凝素 (PHA ,2 0 μg/mL)和佛波醇酯 (PDB ,10 - 7mol/L)存在的条件下进行培养 ,于 0、2、12、2 4h收获细胞后进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对NK细胞的CD69分子表达情况进行分析 结果 :NK细胞在PHA、PDB刺激 2h后CD69的表达明显上升 ,而且随时间的延长CD69的表达率逐渐增加 ,2 4h分别达到 ( 84 .96± 9.2 4 ) %、( 91 85± 2 .94 ) % ;PDB刺激组CD69的表达率在不同的时间点均比PHA组高 结论 :体外条件下 ,PHA、PDB均能快速上调NK细胞CD69表达 ,而且PDB( 10 - 7mol/L)作用明显强于PHA( 2 0 μg/mL)

体外激活CD8^+T细胞表达CD69及γ-干扰素的研究

目的 :研究正常人外周血CD8+T细胞体外活化表达早期活化标志CD69分子及γ -干扰素 (IFN -γ)的规律 方法 :以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (Ion)或植物血凝素 (PHA)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,利用流式细胞术分析CD8+T细胞表达CD69及IFN -γ的情况 结果 :PDB +Ion和PHA活化CD8+T细胞CD69的表达率 ( % )分别为 78.4± 5.3和 2 7.4± 4 .4 ( x±s) ,明显高于对照组 ( 1.5± 0 .6) (P <0 .0 5) 当monensin存在时以PDB +Ion及PHA刺激 4h后IFN -γ阳性CD8+T细胞的百分比分别为 2 9.7± 6.5及 5.9± 1.8,均明显高于对照组 ( 0 .7± 0 .2 ) (P <0 .0 5) ,其中前者表达率高于后者 (P <0 .0 5) 结论 :PDB +Ion和PHA均可刺激CD8+T细胞表达CD69以及IFN -γ 。

紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。

ConA激活的小鼠T细胞CD69表达动力学的体内外研究

目的为明确 CD6 9体内外表达动力学并进一步探讨其作用。方法 Con A体内外刺激小鼠 T细胞后 ,选取不同时间点 ,流式细胞仪观察 T细胞 CD6 9表达率。结果 Con A刺激后 2 h CD6 9即有明显表达 ,6～ 8h达到峰值 ;CD8-与 CD8+T细胞相比无明显差异 ;体外条件对 CD6 9的表达有显著的影响。结论结果提示 CD8-和 CD8+T细胞的活化均需要 CD6 9的参与 ;T细胞可能在活化早期一过性高表达 CD6 9;CD6 9很可能是一个

结直肠癌围手术期患者外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR表达变化及意义

目的观察结直肠癌患者围手术期外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测40例结直肠癌患者(观察组)术前、术后第5、10天外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR的表达,并与同期检测15例健康体检者(对照组)进行比较,分析CD69、HLA-DR表达与临床病理参数的关系。结果观察组术前CD69、HLA-DR表达明显低于对照组(P<0.05),术后CD69、HLA-DR表达水平均较术前明显提高(P<0.05)。HLA-DR表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关(P<0.05),与其余临床病理参数无关(P均﹥0.05)。结论结直肠癌患者术前外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR表达明显降低,术后逐渐升高;检测二者表达有助于病情判断,进一步指导结直肠癌免疫治疗。

孕酮对人T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用

目的 :探讨孕酮 (Progesterone ,Prog)及地塞米松 (Dexamethasone,Dex )对人外周血T淋巴细胞体外活化CD6 9表达的作用。方法 :以女性健康志愿者 (10名 )为研究对象 ,以蛋白激酶C的刺激剂佛波醇酯 (Phorbolester,PDB)为T淋巴细胞的活化剂 ,采用双荧光染色流式细胞技术 ,检测CD3+的T淋巴细胞表达早期活化表面分子CD6 9的百分率 ,以观察Prog、Dex及Prog加上Dex对外周血T淋巴细胞体外活化的作用。结果 :在体外培养条件下 ,无论单独使用Prog还是Dex均增强低剂量PDB刺激CD6 9的表达。然而 ,与单独使用Prog或Dex的作用相比 ,Prog加上Dex明显减弱低剂量PDB的活化CD6 9的表达。结论 :同时使用Prog与Dex可明显抑制T淋巴细胞的体外活化 。

小鼠面神经损伤急性期T细胞CD69表达的研究

目的应用流式细胞技术探讨面神经损伤急性期T细胞功能状态及其病理生理意义,为揭示外伤性面瘫的神经免疫机制提供理论依据。方法制备面神经轴切损伤模型小鼠,分别于损伤后3天、2周分离小鼠肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN)、术侧颈部引流淋巴结(cervical draininglymph node,CDLN)细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术分析T细胞上CD69分子的表达情况。结果手术后3天,面神经损伤组颈部引流淋巴结T细胞CD69表达的百分率与相应手术对照组相比较差异有显著性(P=0.0457);而神经损伤组、手术对照组肠系膜淋巴结T细胞CD69表达的百分率与正常小鼠相比较差异无显著性(P值分别为0.2817、0.2724)。面神经轴切损伤后2周,神经损伤组CDLN的T细胞CD69表达的百分率仍然维持在较高水平,神经损伤组MLN的T细胞CD69表达的百分率出现上调,与相应对照组及术后3天时相比较差异均有显著性(P值分别为0.0082、0.0133)。结论面神经轴切损伤3天、2周时,颈部引流淋巴结存在T细胞活化并上调;在2周时,肠系膜淋巴结也出现低水平的T细胞活化。提示面神经损伤急性期,伴随着一个局部免疫应答向全身免疫应答转化的过程,在一定程度上有利于机体协调控制免疫应答的规模与方向。

免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系(英文)

目的 :研究反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)模型CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平 ,并评价淋巴细胞免疫治疗 (lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系。方法 :评价CBA/J×DBA/ 2、C57BL/ 6×DBA/ 2和BALB/c×DBA/ 2小鼠胚胎和鼠仔的预后 ,绘制出生后 1 - 2 1d鼠仔离乳前生长曲线和Kaplan -Meier生存分析曲线。并且采用PE -CD69和FITC -DX5双色流式细胞术检测在有或无LIT的情况下 ,母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平。此外 ,对CD1 6/CD32 +NK细胞亚群等也进行检测。结果 :在孕期母鼠体重平均增长幅度、平均每窝产仔数、新生鼠仔出生第 1d平均体重和胚胎吸收率等方面 ,CBA/J×DBA/ 2小鼠与生殖力正常的对照组相比均有显著差异。在CBA/J×DBA/ 2小鼠中 ,代表活化型NK细胞的CD69+ DX5+ 细胞比率也显著高于对照组。而有效的LIT能够显著降低CD69在母胎交界面NK细胞表面的表达水平 ,并相应地显著降低胚胎吸收率。结论 :CD69+ DX5+ 细胞在胚胎被排斥的机制中可能具有重要作用。

可溶性MICA对外周血淋巴细胞受体NKG2D、CD69表达的影响

为了分析可溶性MHCⅠ类相关分子A(sM ICA)对淋巴细胞活化性受体NKG 2D及早期活化标志性受体CD 69表达的影响,从U 937细胞中经RT-PCR扩增出sM ICA的cDNA片段,经酶切后插入原核表达载体pQE 3.1,并命名为pQEM ICA。IPTG大量诱导表达后溶解包涵体,所得6个H is重组蛋白经N i+树脂纯化、稀释复性,最后与外周血单个核细胞作用。结果发现sM ICA蛋白可抑制NKG 2D的表达,并通过NKG 2D的下调而抑制CD 69的表达。该研究不仅为探讨sM ICA分子对淋巴细胞特别是NK细胞生物学特性影的研究响奠定基础,也为探讨M ICA介导的肿瘤免疫逃逸机制提供工具。

穿龙薯蓣皂苷元对小鼠T淋巴细胞CD69、CD25表达影响的体外研究

目的研究穿龙薯蓣皂苷元(diosgcnin,Dio)对小鼠脾脏T淋巴细胞CD69、CD25表达的影响,探讨Dio的免疫调节机制。方法以不同浓度Dio与经刀豆蛋白A(Con A)刺激的T淋巴细胞共同培养,用流式细胞术和Western-blot法检测Dio对CD69、CD25表达的影响。结果 Dio质量浓度在3.75~15 mg·L^(-1)内,对CD69、CD25的表达有抑制作用,随药物质量浓度递增抑制作用增强,7.5mg·L^(-1)为最佳抑制浓度,超过此浓度后,抑制作用逐渐减弱。结论 Dio对T淋巴细胞CD69、CD25的表达有抑制作用,即Dio对T淋巴细胞的早期、中期活化均有抑制作用。

卵巢癌细胞对CD8^+ T细胞活化分子CD69表达的影响

目的:探讨卵巢癌细胞对CD8+T细胞活化分子CD69表达的影响。方法:采用流式细胞术检测3株卵巢癌细胞(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+T细胞表达早期活化分子CD69表达的百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ的水平。结果:与对照组比较,3株卵巢癌细胞培养上清液可对CD8+T细胞CD69的表达产生明显的抑制作用(F=29.90,P<0.01),CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平显著降低(F=16.31,P<0.01)。结论:卵巢癌细胞早期就能抑制CD8+T细胞的活化,CD69可作为评价免疫效应细胞功能的指标。

通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响

目的:研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法:培养小鼠淋巴细胞,加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后,再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA),24 h后,用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结果:不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69,均有明显的下调作用(对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞),呈明显的量效关系。结论:TBL总碱可明显抑制 活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达,为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据。

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的:初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法:将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白(蒸馏水)对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果:雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义(P<0.05);雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

PBMC中CD69、CD107a表达上调在诊断迟发型药物变态反应中的意义

目的检测药疹患者外周血单个核细胞中CD69和CD107a的表达,评价其与迟发型药物变态反应的相关性。方法 2010年5月至2011年4月采集20例药疹患者和10例健康对照者的外周血,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,按2×106细胞/孔种植于24孔板,给予致敏药物刺激,培养72 h后采用流式细胞术染色并检测外周血单个核细胞中CD69和CD107a分子的表达。结果健康对照组外周血单个核细胞中CD107a阳性、CD69阳性、CD107a与CD69双阳性细胞刺激前的比例分别为(0.41±0.18)%、(0.33±0.13)%、(0.12±0.06)%,经致敏药物刺激后分别为(0.38±0.28)%、(0.35±0.12)%、(0.14±0.08)%,刺激前后无明显差异,药疹患者外周血单个核细胞中CD107a阳性、CD69阳性、CD107a与CD69双阳性细胞刺激前的比例分别为(0.45±0.25)%、(0.31±0.12)%、(0.15±0.07)%,与健康对照组无明显差异,但经致敏药物刺激后外周血单个核细胞中CD69阳性、CD107a阳性、CD107a与CD69双阳性细胞表达比例明显增高[分别为(9.01±2.91)%、(1.78±0.76)%、(0.74±0.19)%],和健康对照组、药疹未刺激组比较有统计学差异(P<0.01),且随着致敏药物浓度的增加,CD69和CD107a的表达呈剂量依赖性上调。结论药疹患者外周血单个核细胞经致敏药物刺激后CD69、CD107a表达增加。

CD69在细胞活化、凋亡中的双向免疫调节作用

分化抗原簇69（cluster of differentiation69,CD69）于1981年发现,早期被称为活化诱导分子（activation inducer molecule,AIM）,早期活化抗原-1（earlyactivationantigen-1，EA-1）等，是C-型凝集素受体家族的成员，CD69基因属于自然杀伤细胞（natural killer cell，NK细胞）信号转导基因复合体家族，在细胞的生物功能调节中起着重要的信号转导作用。

HBV相关慢加急性肝功能衰竭患者外周血单核细胞CD163和CD69的表达及其与病情、预后的关系

目的了解HBV相关慢加急性肝功能衰竭(HBV-ACLF)患者外周血单核细胞CD163和CD69的表达情况,分析其与患者病情、预后的关系。方法应用流式细胞术对HBV-ACLF患者30例、乙型肝炎肝硬化25例、慢性乙型肝炎18例、健康对照15例外周血单核细胞CD163与CD69的表达情况进行检测,结合肝功能衰竭患者病情及预后进行分析。结果 HBV-ACLF组外周血单核细胞表面CD163的表达率低于肝硬化组、慢性乙型肝炎组及健康对照组(P<0.05),随肝功能衰竭早、中、晚期病情进展,CD163的表达率逐渐降低(F=10.921,P=0.000),死亡组CD163的表达率明显低于存活组(P<0.05);HBV-ACLF组CD69的表达率高于肝硬化组、慢性乙型肝炎组及健康对照组(P<0.05),随肝功能衰竭早、中、晚期病情进展,CD69的表达率逐渐增高(F=11.504,P=0.000),死亡组CD69的表达率明显高于存活组(P<0.05);CD163和CD69评估HBV-ACLF患者3个月内死亡情况所对应的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.726、0.735。结论 HBV-ACLF患者外周血单核细胞CD163和CD69的表达与病情严重程度及预后密切相关。

肺癌患者外周血NK细胞表达CD69的临床意义

目的 从自然杀伤细胞 (NK)表面表达CD6 9的情况 ,探讨肺癌患者的细胞免疫状态 ,为临床免疫治疗提供指引。方法 用密度梯度离心法分离出肝素抗凝血外周血单核细胞 (PBMC) ,用PDB刺激PBMC的条件下进行细胞培养 ,于 2 ,1 2 ,2 4h后收获细胞 ,进行anti-CD5 6 -FITC与anti-CD6 9-PE免疫标记 ,利用流式细胞仪对标记细胞进行分析。结果 体外刺激后 ,肺癌患者组各时点NK细胞中表达CD6 9的阳性细胞百分率分别是(2 8 73± 1 99) % ,(5 5 0 8± 4 4 4 ) % ,(6 8 0 7± 3 5 2 ) % ,与对照组各时点相比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。结论 肺癌患者NK细胞活化明显不足和功能严重障碍 ,该研究结果为肺癌患者的免疫治疗提供理论依据和新的指引。