中国汉族儿童散发性激素耐药型肾病综合征CD2AP基因突变分析

目的分析中国汉族散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿CD2AP基因突变及其特点。方法40例中国汉族散发性SRNS患儿,以及50例尿检正常的汉族成年人,取外周静脉血3 ml,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增CD2AP基因全部18个外显子及其周围的部分内含子,进行直接DNA序列测定。应用神经网络程序对CD2AP基因内含子突变进行隐蔽性剪接位点预测。结果在40例散发性SRNS患儿中检测出11种CD2AP基因多态性,并在3例散发性SRNS患儿中检测出3种在正常对照人群中未发现的CD2AP基因变异,IVS7-135G>A、1083T>C和IVS13-137G>A。神经网络程序分析结果结合临床表型提示,IVS7-135G>A突变为非致病突变、1083T>C和IVS13-137G>A突变的致病性不明确。结论中国汉族散发性SRNS患儿存在CD2AP基因突变,今后尚需对CD2AP基因突变与SRNS患儿临床表型的关联性进行详尽研究。

中国汉族人群不明原因猝死与NOS1AP基因多态性的相关性

目的研究日常活动中不明原因猝死(sudden unexpected death,SUD)者NOS1AP基因的单核苷酸多态性。方法收集60例一般日常活动中SUD病例心血样本作为SUD组,另外随机抽取80例无关个体的外周血样本作为对照组,提取基因组DNA,用特异性引物对NOS1AP部分SNP位点(rs10494366、rs10918859、rs12143842、rs12742393、rs3751284、rs348624)进行PCR扩增和直接测序,计算等位基因频率和基因型频率,并分析各SNP位点在SUD组与对照组之间的差异性。结果 NOS1AP第6外显子区域的rs3751284位点的等位基因频率和基因型频率在两组人群中的差异均有统计学意义(P<0.05)。rs3751284位点的最小等位基因的频率在SUD组为0.325,在对照组为0.475。结论 rs3751284位点可能是SUD的易感基因位点。

连接酶反应分析ALOX5AP基因、PDE4D基因与江苏南京地区腔隙性脑梗死的易感性

目的:分析江苏省南京地区汉族人群腔隙性脑梗死患者的ALOX5AP基因、PDE4D基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP),并研究其与脑梗死的发病是否存在相关性。方法:运用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR),观察280例腔隙性脑梗死患者和258例对照组人群的ALOX5AP基因及PDE4D基因的4个SNP位点,并进一步分析其基因型。结果:PDE4D基因rs966221、rs456009的等位基因、基因型频率在两组间没有显著性差异,单倍体型构成在两组间亦无显著性差异;ALOX5AP基因的两SNP(rs4073259、rs4769055)的等位基因和基因型频率在两组间差异均有显著性(P<0.05),SNP单倍体型(GA、GC)在两组间差异更为明显(P<0.01)。结论:本研究未发现PDE4D基因与腔隙性脑梗死的发病相关,但ALOX5AP基因可能为中国江苏省南京地区腔隙性脑梗死的易感基因。

沈阳地区汉族人群脑梗死患者ALOX5AP基因SNP分析

目的研究沈阳地区汉族人群5-脂氧合酶激活蛋白基因(ALOX5AP基因)单核苷酸多态(singlenucleotide polymorphism,SNP)与脑梗死易患的相关性。方法收集2008年度沈阳地区常住汉族人群380例脑梗死患者,以及同期随机抽取的425例门诊体检正常对照者,通过多重PCR(Multiplex PCR)获得含有待检测突变位点的基因片断,然后进行多重酶检测反应(Multiplex LDR),最后通过测序仪电泳读取检测结果。并且进行血脂、血糖等的生化指标检查。多元logic回归分析方法校正传统危险因素后分析基因多态性和脑梗死之间的相关独立性。结果共检测7个基因位点的多态变化,在SG13S114,以及SG13S32位点脑梗死组和对照组有显著差异(OR=1.8,P<0.01;OR=1.4,P<0.01)。其它位点SG13S25、SG13S89、G13S32、SG13S35、SG13S41两组之间无差异,单倍体HapA在两组之间也无显著差异。回归分析显示高血压和SG13S114、SG13S32是沈阳地区汉族人群的独立危险因素。结论 ALOX5AP基因的SG13S114、SG13S32和脑梗死相关,是脑梗死的独立危险因素之一。

NOS1AP基因多态性对瑞舒伐他汀钙调脂效果的影响Δ

目的:探讨一氧化氮合酶1转接蛋白(NOS1AP)基因rsl2742393位点A/C多态性对瑞舒伐他汀钙调脂效果的影响。方法:选取2014年1月-2015年6月于我院心内科接受治疗的冠心病患者236例,予瑞舒伐他汀钙等对症治疗12周。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法检测各患者NOS1AP基因rs12742393位点A/C多态性,采用光电比色法分别于治疗前和治疗后第4、12周检测其血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,分析患者基因型与血脂水平变化的相关性。结果:236例冠心病患者中,AA、AC、CC基因型分别有131(55.5%)、98(41.5%)和7例(3.0%),各基因型和等位基因频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);血脂正常患者132例,合并高脂血症患者104例,两者各基因型和等位基因型频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。104例冠心病合并高脂血症患者在治疗前,AA与AC+CC基因型患者TG、TC、LDL-C和HDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后第4、12周,各基因型患者TG、TC和LDL-C水平均较治疗前显著降低;治疗后第4周,AC+CC基因型患者LDL-C水平显著低于AA基因型患者,且较治疗前的变化幅度显著大于AA基因型患者,差异均有统计学意义(P<0.05);各基因型患者HDL-C水平与治疗前比较,治疗后第4、12周AA基因型患者TG、TC、HLD-C水平及其较治疗前的变化幅度与AC+CC基因型患者比较,以及治疗后第12周AA基因型患者LDL-C水平及其较治疗前的变化幅度与AC+CC基因型患者比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:NOS1AP基因rs12742393位点A/C多态性与冠心病患者合并高脂血症有关,该位点C等位基因可能通过影响LDL-C水平来增强冠心病合并高脂血症患者对瑞舒伐他汀钙调脂效果的反应性。

CD2AP基因多态性与晚发性阿尔茨海默病相关性研究

目的分析宁夏汉族人群CD2AP的rs9296559位点多态性与晚发性阿尔茨海默病（LOAD）是否存在关联。方法采用病例-对照研究,提取研究对象的外周血DNA,用ARRAY i PLEX行CD2AP基因的rs9296559位点单核苷酸多态性（SNP）的表达分布情况。结果 LOAD组和对照组的C等位基因频率分布比较差异有统计学意义（P〈0.001,OR=1.52,95%CI：1.18-1.97）。结论 CD2AP基因与宁夏汉族人群LOAD有相关性,其rs9296559 SNP位点C等位基因为危险等位基因。

NOS1AP基因rs12742393位点多态性对瑞格列奈治疗我国汉族2型糖尿病患者疗效的影响

目的:探讨一氧化碳合成酶1调节蛋白(NOS1AP)基因rs12742393位点多态性对瑞格列奈治疗我国汉族2型糖尿病(T2DM)患者疗效的影响。方法:选取2015年8月-2017年3月于徐州医科大学附属医院初诊为T2DM且未接受过任何降糖治疗的汉族患者100例,在常规治疗的基础上加用瑞格列奈片1.0 mg,tid,连续治疗至少8周。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性法检测患者NOS1AP基因rs12742393位点的基因型,并观察其治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后血糖(PPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)、餐后胰岛素(PINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。结果:退出和失访的患者各有1例,共有98例患者完成本研究。NOS1AP基因rs12742393位点AA、AC、CC型患者分别有39、42、17例,分布频率分别为39.8%、42.9%、17.3%,均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。治疗8周后,所有患者的FPG、PPG、HbA1c、HOMA-IR、TC、TG水平较治疗前显著下降,FINS、PINS水平较治疗前显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,各基因型患者各项临床指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,各基因型患者FPG、PPG、HbA1c水平,AA型患者HOMA-IR水平,CC型患者TC水平,AA、CC型患者TG水平均较治疗前显著下降;各基因型患者PINS水平,AC、CC型患者FINS水平,CC型患者HOMA-IR水平均较治疗前显著升高;CC型患者FPG、PPG水平显著高于AA、AC型患者,其较治疗前的下降值显著小于AA、AC型患者;AC型患者FPG水平显著高于AA型;AC、CC型患者FINS水平及较治疗前的上升值、HOMA-IR水平均显著高于或大于AA型,各基因型患者HOMA-IR较治疗前的变化值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。而其余指标在治疗前后、组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:NOS1AP基因rs12742393位点多态性可能影响瑞格列奈治疗我国汉族T2DM患者的疗效,其风险基因C可能通过影响患者的FPG、PPG、FINS和HOMA-IR水平来降低瑞格列奈的疗效。

人ALOX5AP基因启动子的克隆及生物信息学分析

目的克隆人ALOX5AP(Arachidonate 5-lipoxygenase activating protein)基因启动子区域并构建荧光素酶报告基因表达载体,运用生物信息学分析该序列并预测启动子候选区及转录因子结合位点。方法PCR扩增ALOX5AP基因转录起始点上游2000 bp的片段,将其连接至pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因重组质粒,MluⅠ与HindⅢ双酶切及测序鉴定。采用Promoter 2.0、CpGPlot、AliBaba 2.1等软件对启动子及转录因子结合位点进行预测与分析。结果构建了含有ALOX5AP基因启动子序列的重组质粒,双酶切与测序验证构建成功。生物信息学分析表明ALOX5AP基因转录起始点上游2000 bp有3个启动子候选区,未发现CpG岛;上游区域共发现245个潜在的转录因子结合位点,分布在启动子候选区内的有Pit-1α、TBP、TBPWT1-κ、Sox-2等。结论成功构建人ALOX5AP基因启动子荧光素酶报告基因表达载体,生物信息学分析鉴定出启动子候选区,其中含有多个潜在的转录因子结合位点,为ALOX5AP基因的转录调控分析提供了理论依据。

金钗石斛AP2/ERF基因家族的鉴定和表达分析

对金钗石斛AP2/ERF转录因子基因家族在全基因组上进行鉴定及生物信息学分析,为进一步阐明金钗石斛AP2/ERF转录因子的功能研究奠定理论基础。利用BLASTP比对金钗石斛蛋白,并通过在线网站NCBI CDD、InterPro和SMART进一步鉴定,共获得97个金钗石斛AP2/ERF基因,然后通过ProtParam分析金钗石斛AP2/ERF家族蛋白的理化性质、亲疏水性,使用MEGA11.0软件构建进化树,利用Map Gene Chrome、GSDS、MEME、PlantCARE在线工具分析AP2/ERF转录因子的基因定位、基因结构和保守基序,并预测基因上游的顺式作用元件,利用TBTools分析并可视化AP2/ERF基因在各部位的表达情况。结果表明,金钗石斛AP2/ERF转录因子家族的成员,大部分定位在细胞核中,相对分子质量介于2726.88~71682.81 u之间,氨基酸数量介于94~659个之间,等电点介于4.45~10.44之间。进化树分析显示,AP2/ERF家族成员分为AP2、RAV、ERF及DREB 4个亚家族。97条基因不均匀地分布在19条染色体上,各个亚族都有独特基序,AP2/ERF基因启动子上游区域光响应作用元件种类最多,数量也最多。大多数DnAP2s基因在根中的表达量最大,不同的居群DnAP2s基因表达有较大不同。鉴定得到97个金钗石斛AP2/ERF蛋白,DnAP2s基因在根茎叶花中表达具有差异性,地理分布导致不同居群的遗传多样性水平不同。

大叶桉根、茎、叶转录组比较和AP 2/ERF基因家族分析

2021年对广西六峰山林场的大叶桉(Eucalyptus robusta)进行采样,采用Hiseq 2000对大叶桉根、茎、叶组织分别进行转录组测序。结果获得40786个Unigene;通过数据库比对,共注释了31662个Unigene。GO注释结果最多的条目为膜组成部分;KEGG注释结果表明,5654条序列参与129条代谢通路,参与基因最多的通路为核糖体。对比分析大叶桉根部和茎,以及根部和叶之间的转录差异,发现多条富集的通路,包括α-亚麻酸代谢和萜类骨架生物合成等。鉴定出AP 2/ERF家族基因84个,其中AP 2家族含有9个基因,RAV家族含有2个基因,ERF家族包含73个基因,各基因家族在根茎叶中的表达模式有所差异。

四倍体硬粒小麦及其他小麦族AP2/ERF基因家族比较分析及表达鉴定

为探究硬粒小麦及其他小麦族中AP2/ERF家族基因响应非生物胁迫的机理,本研究采用生物信息学的方法在全基因组范围内对硬粒小麦、野生二粒小麦及粗山羊草的已有公开数据进行分析,分别鉴定了215、232、139个AP2/ERF基因家族成员,AP2/ERF家族基因在不同物种中的基因组位置、基因结构、启动子顺式作用元件相似及差异部分。利用硬粒小麦在不同发育时期及非生物胁迫下的转录组数据,对这些AP2/ERF基因进行表达模式分析,发现有6个AP2/ERF基因在硬粒小麦胚乳发育过程中起着一定程度的调节作用;有23个AP2/ERF基因在硬粒小麦花后热胁迫反应中上调表达,其中13个基因可以同时响应硬粒小麦花前缺水及花后热胁迫反应。

墨兰CsAP1-A基因克隆及表达分析

【目的】AP1基因在植物的花器官发育和开花调控中发挥重要作用,对墨兰AP1基因进行克隆与表达分析可为研究其在墨兰花发育和开花调控中的作用提供前期基础。【方法】以墨兰品种‘小香’为材料,克隆到1个AP1基因,命名为CsAP1-A。通过生物信息学分析其基因结构、蛋白结构域和进化关系,利用RTqPCR方法分别检测CsAP1-A在墨兰不同器官、不同花发育阶段和不同花组织部位的表达情况;通过转录组测序分析CsAP1-A在5个不同花型墨兰品种花组织部位的表达情况;通过蛋白互作预测软件分析CsAP1-A与其他蛋白的互作关系。【结果】CsAP1-A基因编码区为744 bp,编码248个氨基酸,含有高度保守的MADS-box和K-box结构域,符合MADS-box转录因子家族特征。CsAP1-A与其他兰科植物AP1蛋白相似性较高,其中与春兰AP1/FUL3(APY18447.1)和蕙兰MADS1(AGE15496.1)的同源性最高。RT-qPCR分析结果表明,CsAP1-A在墨兰不同器官中均有表达,在花中表达量最高,且集中在花芽分化初期(S1)高表达。在不同花型的墨兰品种中,CsAP1-A在WT(普通型)、MPV(重瓣花型)、LaPV(花瓣唇瓣化花型)和NLV(唇瓣萼片化花型)4种花型的合蕊柱中表达量均最高,而在萼片中表达量最低;在合蕊柱异常发育的MPV中,CsAP1-A在合蕊柱的表达量显著提高,而在花瓣蕊柱化的梅瓣花型(GPV)中整体表达量最高,且表达区域从合蕊柱扩展到花瓣。蛋白互作预测CsAP1-A蛋白可与MADS1、MADS6、MADS47、MADS8等10个蛋白存在互作关系。【结论】墨兰CsAP1-A的基因结构、进化关系、时空表达情况和蛋白互作预测可为墨兰花发育的研究提供理论依据,对进一步揭示CsAP1-A基因在墨兰成花过程中的作用奠定基础。

SfAp参与调控白背飞虱的翅发育

【目的】Apterous(Ap)属于LIM结构域家族的发育调控蛋白。本研究旨在探究Ap基因在白背飞虱Sogatella furcifera翅发育中的作用。【方法】基于白背飞虱基因组和转录组数据库,采用RT-PCR验证SfAp的cDNA序列并进行生物信息学分析;利用RT-qPCR检测SfAp在白背飞虱不同发育阶段(1-5龄若虫和雌雄成虫)和成虫不同组织(头、胸、腹、足、翅、体壁、脂肪体和肠道)中的表达量;通过RNAi技术靶向沉默3龄若虫SfAp后观察白背飞虱的生长发育情况,并统计RNAi后的存活率、总死亡率和翅畸形率,采用RT-qPCR测定翅发育信号通路关键基因(鞣化激素基因SfBurs-α和SfBurs-β、Hippo信号通路基因SfHippo和SfSal、Wnt信号通路基因SfWg、Hedgehog信号通路基因SfHh和SfDpp及SfHOW)的表达量。【结果】克隆获得了白背飞虱SfAp(GenBank登录号:PP901867)的开放阅读框,长1287 bp,编码428个氨基酸的蛋白质,其编码蛋白质预测的分子量为47.41 kD,理论等电点为8.99,SfAp含有典型的LIM保守结构域;SfAp与褐飞虱Nilaparvata lugens的NlAp亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达84.86%。发育表达谱结果显示,SfAp在4龄若虫前表达量较高,随后逐渐下降,到5龄第3天若虫期表达量显著升高,成虫羽化后表达量下降;组织表达谱结果表明,SfAp在成虫胸部中表达量最高,其次是在腹部、脂肪体和肠道中高量表达。显微注射dsSfAp导致羽化成虫表现出翅不伸展及畸形,并且翅发育相关基因SfBurs-α,SfBurs-β,SfHippo,SfSal,SfWg,SfHh,SfDpp和SfHOW的表达也被显著抑制。【结论】SfAp通过影响翅发育信号通路关键基因的表达量,进而影响白背飞虱的翅伸展及发育过程。

喜旱莲子草AP2/ERF基因家族的鉴定及其在除草剂胁迫下的表达模式

【背景】喜旱莲子草(Alternanthera philoxeroides)是一种极难防除的恶性入侵杂草,给我国生态环境造成了严重危害。AP2/ERF(APETALA2/ethylene responsive factor)家族是植物中最大的转录因子家族之一,不仅参与植物体内多种信号网络的调控,还在植物响应除草剂胁迫中发挥重要作用。【目的】系统分析喜旱莲子草ApAP2/ERF家族成员的基本特征,揭示其在除草剂胁迫下的表达模式,明确ApAP2/ERF潜在的生物功能,挖掘抗除草剂的潜在靶标基因,为精准、合理地选择除草剂提供依据。【方法】利用本地BLASTp从喜旱莲子草基因组数据库中对AP2/ERF家族成员进行鉴定,运用MEME、ExPASyServer10、Plant-mPLoc、SWISS-MODEL、NCBI SRA数据库和psRNA Target在线网站获取保守基序(Motif)、蛋白理化性质、亚细胞定位、三级结构、转录组、靶向miRNA信息。通过GFF3基因组注释文件获取基因结构信息。利用MEGA 11、TBtools和R语言绘制系统发育树、表达模式热图和miRNA靶向关系图等。采用RT-qPCR法分析ApAP2/ERF家族成员在5种除草剂和不同时间点(0—7 d)处理下的表达模式。【结果】从喜旱莲子草中共鉴定出96个ApERF、9个ApAP2和4个ApRAV,并根据其在基因组中的位置分别命名为ApERF1—ApERF96、ApAP2-1—ApAP2-9和ApRAV1—ApRAV4。鉴定到的ApAP2/ERF均为亲水蛋白,位于细胞核和细胞质中;ApAP2/ERF表达模式受地理条件、水分条件和低钾胁迫的调控。41%草甘膦处理中,ApERF7/74/94在3—7 d内被高度诱导;50%异丙隆处理中,6个ApERF均在特定的时间被高度诱导;10%乙羧氟草醚处理中,ApERF7/13/49/94表达量呈现先升高后下降再上升的趋势;20%氯氟吡氧乙酸处理中,ApERF7/13/49/54/94在0.5 d时被高度诱导;13%噁草酮处理中,ApERF13/49/54/74在短时间内显著下调表达。【结论】鉴定出109个喜旱莲子草AP2/ERF家族成员,位于同一亚组的成员具有相似的motif。ApAP2/ERF的表达受到地理条件、水分条件和低钾胁迫的调控,同时也受除草剂的诱导,推测其通过影响乙烯信号通路以响应除草剂胁迫。

墨兰AP3基因过表达载体构建及遗传转化铁皮石斛

为探讨墨兰(Cymbidium sinense)AP3基因在兰花唇瓣中的功能,基于前期从墨兰转录组中得到的AP3基因序列,通过PCR技术构建墨兰AP3基因过表达载体,利用农杆菌EHA105转化铁皮石斛(Dendrobium officinale)原球茎,建立遗传转化体系。经PCR验证,20棵抗性苗中获得9棵阳性苗,其阳性苗率达45%,成功将墨兰AP3基因导入铁皮石斛。

广东地区原发性激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2、CD2AP基因突变筛查

目的研究广东地区原发性激素耐药型肾病综合征（SRNS）患儿NPHS2和CD2AP基因变异情况，探讨NPHS2和CD2AP基因变异与SRNS发病的关系，为儿童SRNS的临床诊治提供理论依据。方法随机选取26例广东地区原发性SRNS患儿和20例健康儿童，对其NPHS2基因8个外显子和CD2AP基因18个外显子的PCR产物进行直接测序，所得结果与美国国立生物技术信息中心（NCBI）的基因数据库进行比对，检测基因变异情况。结果26例患儿中14例SRNS患儿和4例健康对照组儿童存在NPHS2单核苷酸多态性（288C〉T，954T〉C，1038A〉G），均为已报道的单核苷酸多态性，但2组之间的基因型和等位基因频率比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）；所测SRNS患儿中仅有2例检测出CD2AP基因1个内含子区突变（1917＋20C〉G）。结论NPHS2基因变异可能并非中国广东地区SRNS患儿发病的主要机制；CD2AP基因内含子突变可能增加患儿对早发性SRNS和局灶节段性肾小球硬化的易感性，提示内含子可能参与SRNS的发病。

AP1基因转化地被菊品种‘玉人面’的研究

The flower’s meristematic characteristic gene AP1 was introduced into Chrysanthemum morifolium cv. ‘Yu Ren Mian’ mediated by Agrobacterium tumefaciens.The factors influencing genetic transformation protocol were studied.The results showed that the leaf explants precultured for 2～8 hours or not precultured were best for transformation by A. tumefaciens. The suitable concentration of bacterial and the time for infecting was OD_ 600 0.5 for 10 minutes. Leaves were cocultivated with bacterial at 23～25 ℃ for 2 days,then delayed selection for 3 days. Kan^r plant were selected by increased selective press from 5 mg·L ~ -1 G418 to 7.5 mg5L~ -1 G418 followed by 10 mg5L~ -1 G418. The integration of AP1 gene into C. morifolium ‘Yu Ren Mian’ was confirmed by PCR and Southern blotting.Two of transgenic plants bloomed 15 days earlier than untransformed plants.

毛叶枣APETALA1同源基因的克隆

分析在植物花分生组织及花器官形成过程中起重要作用的APETALA1(AP1)基因的保守区序列 ,设计 1对长度为 2 3bp的PCR引物 ,以毛叶枣基因组DNA为模板 ,采用PCR方法扩增出长为 648bp的DNA片段 ,克隆入pUCm T载体 ,测序和序列分析结果表明获得了毛叶枣AP1同源基因中部的 1个片段 ,该片段有 2个内含子 ,长度分别为15 2bp和 386bp ,编码区共编码 36个氨基酸 ,其序列已在GenBank中登记 (登记号为AF35 65 41) .在GenBank中进行同源性检索 ,结果表明其氨基酸序列与其他植物AP1同源基因的氨基酸序列同源性高达 66 %～ 88% 。

无抗性选择标记转AP1基因抗病水稻新品系的选育

为获得无任何抗生素抗性基因的抗病转基因水稻新品系,将克隆自甜椒的两亲性蛋白AP1基因与潮霉素抗性选择标记基因(HPT)分别构建位于同一农杆菌双元载体上的两个独立的T-DNA区中,并经农杆菌介导,将其导入江苏省推广的两个粳稻品种广陵香粳和武香粳9号中,获得了一批转基因水稻植株。PCR和Southern杂交分析表明,AP1基因和HPT基因已同时导入受体基因组中,并从共转化植株的自交后代中筛选到了无HPT基因的转AP1基因水稻植株。结合田间农艺性状考察,选育了多个无抗性选择标记基因的纯合转AP1基因水稻新品系;抗病性鉴定结果表明,转AP1基因水稻对稻白叶枯病的抗性与未转化对照相比有显著提高,部分转基因水稻对纹枯病的抗性与未转化对照相比也有一定程度的提高。

AP2基因家族的起源和棉花AP2转录因子在抗病中的作用

植物中庞大的AP2基因家族成员因其广泛参与植物响应外界环境胁迫、生长发育相关的转录调控而备受重视。AP2基因曾被认为植物所特有,但最近在蓝藻、线虫和病毒中发现了具有AP2结构域和位点特异核酸内切酶的蛋白。所以有人认为当今植物中的AP2基因起源于细菌或者病毒的基因的横向转移,AP2结构域可能来自后来进化为叶绿体的原始蓝细菌的内共生。ERF是AP2大家族中的一个亚族,它编码的蛋白能特异结合含有GCC盒的病程相关基因的表达,参与植物抗病反应。ERF基因的表达受到疾病相关刺激以及环境胁迫的诱导,并且在乙烯、茉莉酸和水杨酸信号传导途径中发挥一定的作用。同时,某些ERF基因在转基因植物中的超表达表现了一定的广谱抗性,因而在分子育种中具有一定的应用前景。棉花上AP2基因家族的基因克隆与分析最近才得以进行,介绍了我们在棉花上相关的研究工作并讨论了它们在植物抗病反应中的作用。