从野桑蚕分离的NPV与BmNPV、ApNPV间的RAPD分析

将野外收集的野桑蚕核型多角体病毒(w-BmNPV)进行空斑筛选,纯化后的病毒通过碱裂解法抽提基因组DNA,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)的基因组DNA为对照,用随机引物进行PCR扩增。结果表明:野桑蚕分离的NPV和BmNPV、ApNPV间存在较大的差异性,通过版本为1.3b的Treecomw软件分析,野桑蚕体内的NPV和BmNPV的同源关系较近,而与ApNPV的同源关系较远。

不同柞蚕品种热激处理后F1代幼虫的ApNPV抗性研究

对柞蚕进行耐热性特征与ApNPV抗性研究,可为柞蚕的繁殖驯养、引种推广和抗逆性品种的选育提供依据。本文在前期的柞蚕幼虫耐热性研究基础上,调查了热激处理后耐热性良好的4个柞蚕品种方山黄、抗大、5204及F的F 1代稚蚕的抗ApNPV能力,发现在高温胁迫后,2种热激蛋白基因表达量较高的柞蚕品种方山黄和5204,其稚蚕同样表现出优异的抗ApNPV能力,表明柞蚕品种热激蛋白的表达量可能与ApNPV抗性具有相关性。

克隆ApNPV对柞蚕蛹不同发育时期的感染及其与野生ApNPV对柞蚕蛹侵染力的比较

进行了ApNPV对柞蚕蛹(青六)侵染力及不同发育时期的柞蚕蛹对ApNPV抗性的研究,分析了克隆ApNPV和野生ApNPV侵染力的差异。试验结果表明:克隆ApNPV和野生ApNPV的侵染力基本相同;蛹期不同发育阶段对ApNPV的抗性以滞育中最强,解除滞育后次之,进入滞育前最弱;蛹期♀蛹对的抗性大于蛹对的抗性。

ApNPV编码的DNA单链结合蛋白基因lef-3的克隆与分析

用随机克隆法,克隆得到了柞蚕核型多角体病毒(Antheraeapernyinucleopolyhedrovirus,ApNPV)PstⅠ和XhoⅠ片段,经序列分析表明,该片段含有完整的晚期表达因子3(lef3),与其它来源的lef3基因具有很高的同源性。ApNPVlef3基因的阅读框为1110bp,编码369个氨基酸,编码一种DNA单链结合蛋白(singlestrandedDNAbindingprotein,SSB)。lef3基因参与病毒DNA复制,是病毒DNA复制必不可少的蛋白质因子。LEF3的N-端有一个氨基酸保守序列区,推测此氨基酸序列保守区是LEF3的主要功能区。在lef3基因上游的互补序列有一编码127个氨基酸序列的不完全阅读框,根据同源性比较,此阅读框与黄杉毒蛾核型多角体病毒(Orgyiapseudotsugatanucleopolyhedrovirus,OpNPV)的ORFs73编码相似的基因,而在该片段的3′端其序列与近缘种OpNPV和云杉卷叶蛾多角体病毒(Choristoneurafumiferananucleopolyhedrovirus,CfNPV)没有同缘性,显示了ApNPV基因组结构有其固有的特点。

柞蚕核型多角体病毒宿主载体表达系统的研究现状及展望

对构建柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)宿主载体表达系统及利用其生产有用外源基因产物的基本原理、研究进展和应用前景进行了论述。指出该系统为真核生物表达系统,与大肠杆菌等原核生物和其他昆虫杆状病毒表达系统相比,在表达出的目的基因产物特性、经济效益和产业化生产等方面均具有明显的优越性,应用前景广阔。

柞蚕核型多角体病毒侵染对不同柞蚕品种幼虫中肠SOD及CAT基因表达的影响

柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)是柞蚕血液型脓病的病原物,柞蚕血液型脓病严重影响柞蚕产量,是制约柞蚕产业经济效益增长的主要因素之一。为探究病原物侵染后柞蚕的抗逆机制,分别对4个柞蚕品种(辽蚕527、辽蚕582、抗大、9906)的幼虫添食ApNPV,分析侵染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h抗氧化酶基因ApSOD和ApCAT mRNA相对表达量的变化趋势。结果显示,4个柞蚕品种的幼虫中肠ApSOD基因相对表达量在感染ApNPV后24 h开始上调,36 h达到最高值,随后下调;ApCAT基因的相对表达量在感染后12 h开始上调,在24~36 h达到峰值,随后迅速下降。2个基因相对表达量总体呈现先上升后下降的变化趋势,且4个品种的处理组在侵染前期相对表达量显著高于对照组,而后期显著低于对照组。研究结果可为探究柞蚕对ApNPV感染的生化响应机制提供理论依据。

柞蚕核型多角体病毒odv-e56基因的克隆与分析

为获得柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyinucleopolyhedrovirus,ApNPV)基因组序列,采用随机克隆方法,建立ApNPV的质粒基因文库,并通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得了编码包涵体衍生型病毒特异囊膜蛋白基因odv-e56。该基因上游具有晚期调控保守序列TTAAG,是一个晚期表达基因,阅读框为1125bp,共编码374个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性比较结果表明:ApNPV的odv-e56基因与黄杉毒蛾多角体病毒(OpNPV)和云杉卷叶蛾核型多角体病毒(CfNPV)的同源性较高,而与松树小叶蜂核型多角体病毒(NlNPV)和松环螺旋多角体病毒(NsNPV)的同源性最低。由此认为,杆状病毒科的odv-e56基因在进化上存在两种进化方式:一类以点突变为主,基因长度变化不明显;另一类突变以小片段的碱基增减为特征。

柞蚕核型多角体病毒病及其防治方法的研究进展

柞蚕核型多角体病毒,是柞蚕血液型脓病的病原。对柞蚕的侵染途径主要通过食下和体壁创伤进行。目前已建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统,并分别在体内、体外表达了报告基因。鸡免疫卵黄抗体是一种新型饲料添加剂,已用作促进畜禽生长、繁殖和防治疾病,进行蚕病防治的探索性研究,为有效防治蚕病提供了新的思路。

柞蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子的克隆与分析

以柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)DNA为模板,运用PCR技术钓取ApNPV(IE-1)基因的启动子片段,并将其克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。将测序的2.7 kb DNA片段用EcoRⅠ和BglⅡ双酶切,回收3'端1.6 kb的DNA片段。将该片段插入到pGFP-N2表达载体上构建以其作为启动子的IE-1/pGFP-N2重组质粒。重组质粒经脂质体介导转染Hela细胞,结果可见绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达,证明钓取的IE-1基因启动子片段具有启动子的转录活性。

低温胁迫对柞蚕幼虫生长发育的影响

低温冷害对柞蚕幼虫生长发育及蚕茧产量均有重要影响。本试验探讨了低温胁迫对柞蚕5龄幼虫生长发育的影响。结果表明,低温胁迫组的发病率显著高于空白对照组,说明低温胁迫可以诱导发病;添食柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)组的发病率显著高于空白对照组;先添食ApNPV再低温胁迫组与先低温胁迫再添食ApNPV组之间的发病率差异不显著,但显著高于空白对照组、低温胁迫组和添食ApNPV组;经过低温处理后的5龄柞蚕,营茧后其千粒茧重均有不同程度降低且与空白对照之间存在显著差异(P<0.05)。超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性分析结果表明,低温处理后辽蚕527的SOD及CAT酶活性均为最强;辽蚕527低温胁迫选择试验结果表明,选择系的发病率比非选择系低67.23百分点。综上所述,低温胁迫对柞蚕的抗病性、茧质性状及理化性质均有较大影响,低温胁迫选择使其抗病性有了显著提高,为耐低温冷害品种的选育提供了理论依据。

抗柞蚕核型多角体病毒病免疫卵黄抗体制备和防治效果研究

柞蚕脓病是柞蚕Antheraea pernyi养殖面临的主要病害之一。卵黄球蛋白作为来源丰富的多克隆抗体,提供了一种经济、安全、高效的动物疾病防治手段。本研究使用柞蚕脓病病原柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)免疫产蛋母鸡,制备抗ApNPV免疫卵黄抗体(IgY),并测定了IgY对柞蚕的安全性;随后饲喂试验确定了IgY的最佳稀释倍数;探索添食IgY对柞蚕脓病的预防和治疗效果。结果显示:(1)免疫抗原后6~8周收集的IgY具有最高效价,达到1∶210;(2)安全性试验未发现不良影响,且IgY最佳稀释倍数为64倍;(3)同时饲喂IgY和病毒处理的叶片时,柞蚕脓病发病率显著降低,对柞蚕脓病抑制效果最佳;先饲喂病毒叶后给予IgY叶也有一定的效果。研究结果表明,抗ApNPV IgY对柞蚕脓病具有防治作用,为柞蚕脓病的防治探索了一条新途径。