Apelin调控TGF-β1/Smads信号通路对慢性肾衰大鼠肾间质纤维化的研究

探究Apelin调控TGF-β1/Smads信号通路对慢性肾衰大鼠肾间质纤维化的研究。方法 取SD成年大鼠35只,随机分为五组。行5/6肾切除手术造模,处理前及处理8周后分别行血清BUN、Scr水平检查。8周后取肾组织切片以免疫组化法检测肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达;RT-PCR法分析肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表达。结果 Apelin组、氯沙坦钾片组血清BUN、Scr水平明显降低,TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表达明显降低,Smad7mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与氯沙坦钾片组相比,Apelin组血清BUN、Scr水平明显降低,TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表达明显降低,Smad7的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 Apelin能降低CRF大鼠血清Scr和BUN水平,可通过调节TGF-β1/Smads信号通路来减轻慢性肾衰大鼠肾间质纤维化程度。

黄芪甲苷调节Apelin/APJ轴抑制喉癌Hep-2细胞的机制

目的探讨黄芪甲苷对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响以及对Apelin/APJ信号轴的调节作用。方法不同浓度(0、20、40、80μmol·L^(-1))黄芪甲苷溶液处理第3代对数生长期Hep-2细胞,检测细胞存活率、凋亡率、迁移和侵袭量细胞数量以及Apelin和APJ蛋白的相对表达量。结果随黄芪甲苷浓度的增加,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,迁移和侵袭细胞数量逐渐减少,Apelin和APJ蛋白的相对表达量逐渐降低,且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论黄芪甲苷可降低喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导癌细胞凋亡,其可能是通过抑制Apelin/APJ信号通路发挥作用。

Apelin/APJ信号在心血管系统的生理和病理生理作用

Apelin是G蛋白耦联受体APJ的内源性配体,在心血管系统高度表达。Apelin/APJ信号具有增强心肌收缩力、降低血压、促进新生血管形成、保护心肌缺血及再灌注损伤、调控脂肪-胰岛素轴等作用。在治疗心力衰竭、高血压、缺血性心血管疾病、心肌缺血-再灌注损伤等方面具有很大潜力。

门静脉高压症apelin/APJ信号活化的实验研究

目的:探讨apelin/APJ信号在门静脉高压症的激活状态以及门静脉高压症的过程是否有apelin/APJ信号的活化,并提出其可能的机制。方法:采用部分门静脉结扎(partial portal vein ligation,PPVL)及胆道结扎离断(bile duct ligation,BDL)两种方法制备SD大鼠不同特点的门静脉高压症模型。通过大体观察、血流动力学、病理学及免疫组织化学评估门静脉压力和apelin/APJ信号在肠系膜的激活。结果:两种模型组大鼠门静脉压力均比相应假手术组高。两种模型肠系膜血管新生明显,其侧支循环大量开放。BDL组和PPVL组大鼠肠系膜组织APJ和apelin蛋白与各自假手术组相比均有升高。结论:apelin/APJ信号可能在门静脉高压症形成过程中有重要作用。

Apelin/APJ信号系统对脑缺血后血管内皮细胞修复及机制的研究

目的探讨Apelin/APJ信号系统对脑缺血损伤的血管内皮细胞的修复作用.方法采用电凝烧灼法制备局灶性大脑皮质梗死模型,通过侧脑室注射腺病毒Ad-Apelin或对照病毒Ad-RFP.实验动物随机分为4组,分别为假手术(sham)组、脑梗死组(MCAO)、Ad-Apelin+脑梗死组(Ad-Apelin)组、Ad-RFP+脑梗死组(Ad-RFP)组.使用神经功能mNSS评分、Western blot、免疫组织化学、qPCR等技术检测Apelin过表达对小鼠神经功能、血-脑脊液屏障、血管新生及血管内皮细胞Notch、VEGF、Ang-Ⅰ/Ⅱ信号通路的影响.结果与Ad-RFP组相比,Ad-Apelin组小鼠mNSS评分明显降低,脑组织含水量明显降低,脑组织伊文思兰渗出明显减少.与Ad-RFP组相比,Ad-Apelin组新生血管内皮细胞特异标志物CD105表达上调,血管内皮细胞DLL4、VEGF、VEGFRⅡ、Notch1、AngⅠ、AngⅡ蛋白表达量明显升高.结论Apelin过表达后可通过上调Notch、VEGF、Ang-Ⅰ/Ⅱ信号通路促进脑血管内皮细胞修复及血管新生.

Apelin促大鼠血管平滑肌细胞增殖的PI3K／Akt信号通路研究

目的：研究G蛋白偶联受体APJ的内源性配体多肽apelin-13是否通过P13K／Akt信号通路影响血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的牛长增殖，发现apelin—APJ系统促血管平滑肌细胞增殖的新的信号转导机制；方法：培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞，噻唑蓝比色法（MTT）观察VSMCs增殖；Westernblot检测P13K等信号蛋门表达。结果：Western blot检测结果显尔，apelin-13（0、0．5、1、2、4gmol／L）刺激大鼠血管平滑肌细胞P13K磷酸化、Akt磷酸化增加，以1p．M最为明显；lgMapelin-13分别刺激大鼠VSMCs0、5、15、30、45、60min，P13K磷酸化、Akt磷酸化表达在30min时最为明显，P13K阻断剂LY294002明显抑制apelin-13诱导的P13K磷酸化及Akt磷酸化表达，Akt阻断剂1701．1明显抑制apelin—13诱导的Akt磷酸化、ERK1／2磷酸化及cyclinDl表达，MTT法显示P13K抑制剂LY294002和Akt抑制剂1701—1能明显抑制apelin--13诱导的VSMCs增殖；结论：Apelin-13通过P13K／Akt信号转导通路促进大鼠血管平滑肌细胞增殖。

Apelin/APJ信号系统对脑卒中后血管内皮细胞的影响

目的探讨Apelin/APJ信号系统对脑卒中后血管内皮细胞是否具有保护作用。方法采用电凝烧灼法制备局灶性大脑皮质梗死模型,通过侧脑室注射腺病毒,使小鼠脑组织稳定过表达Apelin蛋白,评估神经功能缺损、血-脑脊液屏障破坏以及脑血管内皮细胞炎症反应、氧化应激、细胞凋亡情况。结果小鼠脑梗死后脑组织Apelin表达下调,Ad-Apelin干预可使小鼠脑组织稳定过表达Apelin蛋白。小鼠脑梗死后mNSS评分升高,脑组织含水量升高,梗死区可见明显的伊文思兰溢出;脑组织occludin、ZO-1、JAM、claudin5蛋白表达降低;脑血管内皮细胞ROS、Superoxide、NF-kB(p65)表达上调(P<0.05),出现NF-kB(p65)核聚集,TRL表达无明显变化(P>0.05),细胞凋亡增加(P<0.05)。Ad-Apelin干预小鼠脑梗死后较对照组mNSS评分降低,脑组织含水量降低,梗死区伊文思兰溢出减少;脑组织occludin、ZO-1、JAM、claudin5蛋白表达上调;脑血管内皮细胞ROS、Superoxide、NF-kB(p65)表达下调(P<0.05),NF-kB(p65)核聚集减少,细胞凋亡减轻(P<0.05),TRL表达无明显变化(P>0.05)。结论Apelin参与脑梗死病理过程。Apelin干预可改善脑缺血损伤导致的神经功能缺损,减轻血-脑脊液屏障破坏,减轻血管内皮细胞氧化应激、凋亡及炎症反应,从而保护血管内皮细胞。

Apelin/APJ信号在肝硬化及肝癌中的生物作用

Apelin/APJ信号在心脏、血管、脑、肺、胃肠道、肾脏和骨骼肌等多种组织中都有表达,可以参与多种细胞的信号转导过程,所以在调节人体生理和病理生理活动方面可发挥重要的调节作用。Apelin/APJ信号的作用主要包括调节心血管系统的稳态、维持水电解质的平衡、促进垂体激素释放、调节生物节律,还可以作为免疫调节因子对免疫系统进行调节。但是apelin/APJ信号在肝脏疾病中发挥什么样的作用还知之甚少。在肝脏疾病中,apelin/APJ信号可能参与到肝纤维化、肝硬化和肝癌的发生和发展,并且可抑制肝脏的再生。我们对apelin/APJ信号近年来在肝脏方面的研究做一综述。

Apelin/APJ系统及其基因多态性与心脑血管疾病的相关性

Apelin作为一种脂肪因子,已被鉴定为孤儿G蛋白偶联受体APJ的内源性配体,它们共同组成了apelin/APJ系统。Apelin和APJ在多种组织,尤其是心脏和血管中表达。越来越多的证据表明,apelin/APJ系统作为心脑血管稳态的重要调节者,参与许多心脑血管疾病的病理生理过程,包括心脏病、脑血管病、高血压等疾病。靶向apelin/APJ作用轴或许可以产生对抗这些心脑血管疾病的保护作用。本文就apelin/APJ系统及其基因多态性与心脑血管疾病相关性进行综述。进一步了解apelin/APJ系统在心脑血管中的作用将有助于开发新的治疗干预措施。

Apelin抑制小鼠气道平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的探讨apelin抑制PDGF诱导小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用及其分子机制。方法采用组织块贴壁法培养原代BALB/c小鼠ASMCs,以PDGF(20 ng/mL)诱导ASMCs增殖建立模型;将ASMCs分为3组:正常对照组、PDGF刺激组、PDGF+apelin干预组,应用BrdU试剂盒检测各组细胞的增殖效应,应用Western blot检测各组中TGF-β1、p-Smad3和p27蛋白水平;沉默APJ基因,将ASMCs分为4组:正常对照组、PDGF刺激组、PDGF+apelin干预组、APJ shRNA+apelin+PDGF干预组,再次检测各组ASMCs的增殖情况,以及TGF-β1、p-Smad3和p27蛋白水平。结果 Apelin(1 nmol/L)可以有效抑制PDGF刺激ASMCs增殖的作用(P <0.05);apelin可以抑制PDGF升高TGF-β1、p-Smad3水平、下调p27表达的作用;转染APJ shRNA,可以逆转apelin抑制ASMCs增殖,下调TGF-β1、p-Smad3,增加p27蛋白水平的作用。结论 Apelin与其受体APJ结合,可有效抑制PDGF刺激的ASMCs增殖,其机制可能是通过抑制TGF-β/Smad信号通路而实现。

Apelin抑制TGF-β诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换

目的探讨多肽Apelin对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换(EMT)的抑制作用及其机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞,分别给予含TGF-β1(2μg/L)和/或不同浓度Apelin-13的培养基孵育细胞48 h,设立6个实验组(每组n=5):对照组、TGF-β组、TGF-β+Apelin(10-8,10-7和10-6mol/L)组和Apelin(10-6mol/L)组。刺激结束后,用免疫荧光染色观察细胞的上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布和表达。Western blot检测细胞中E-cadherin、α-SMA及Smads信号通路的主要信号分子p-Smad2/3、Smad2/3和Smad-7的蛋白表达。RT-PCR法检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及细胞自身Apelin和APJ受体的mRNA表达量。结果与对照组相比TGF-β组细胞为长梭形,E-cadherin的表达减少,α-SMA的表达增多,细胞外基质FN和Col-Ⅰ的mRNA表达量也显著升高;TGF-β+Apelin组上述效应被显著抑制,且呈浓度依赖性。与TGF-β组相比,TGF-β+Apelin组细胞活化型Smads的水平降低(P<0.05),Smad7的表达增加(P<0.05)。TGF-β组细胞自身APJ受体的表达量显著升高(P<0.05),TGF-β+Apelin组上述效应受到抑制,且呈浓度依赖性。结论 Apelin干扰TGF-β/Smads信号通路从而抑制肾小管上皮细胞EMT;肾小管上皮细胞自身Apelin/APJ系统可能起到一定的代偿作用。

Apelin-13在脑血管病中的研究进展

脑血管病发病率逐年增高,病死率、致残率居高不下,严重影响人类的健康。研究表明Apelin-13参与脑血管病发病过程,由Apelin-13和Apelin受体APJ组成的Apelin-13/APJ信号通路对脑血管病具有保护作用,有望为脑血管病提供潜在的治疗靶点。本文主要通过其对缺血性和出血性脑血管病的影响进行综述。

右美托咪定调控Apelin/APJ信号系统减轻小鼠脑出血损伤的机制研究

目的 通过研究右美托咪定(Dex)对脑出血(ICH)小鼠脑损伤后血管紧张素受体AT1相关受体蛋白(Apelin)/孤儿G蛋白偶联受体(APJ)信号系统的影响,探究其在脑出血后减轻脑损伤的可能作用机制。方法选取健康雄性C57BL/6J小鼠120只,应用胶原酶法制作小鼠ICH模型,采用随机数字表法将小鼠分为三组:假手术组(sham组)、脑出血组(ICH组)、脑出血+右美托咪定组(ICH+Dex组),每组40只。ICH+Dex组于造模成功后,30min内通过腹腔注射右美托咪定[25μg/(kg·d)],连续给药3天,sham组和ICH组于相应时间点给予等量的生理盐水。在ICH第1、3天分别进行神经功能损伤评分(mNSS score)以评价小鼠神经功能障碍;在ICH第3天,利用干湿重法评估脑水肿程度、通过蛋白印迹分析测定脑组织紧密连接蛋白ZO-1及claudin-5的表达水平、采用ELISA法测定脑组织Apelin及APJ的表达变化、采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果 与sham组比较,ICH组小鼠神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡数均升高(P<0.05),而ZO-1、claudin-5及Apelin、APJ表达降低(P<0.05);与ICH组相比,ICH+Dex组小鼠神经功能评分及脑组织含水量及神经元凋亡细胞数均降低(P<0.05),而ZO-1、claudin-5及Apelin、APJ表达升高(P<0.05)。结论 右美托咪定对脑出血小鼠具有脑保护作用,该作用可能是通过调控Apelin/APJ信号系统从而保护血脑屏障完整性,减轻脑水肿、减少神经元细胞凋亡,从而改善神经功能障碍。

Apelin/APJ通路基因多态性与代谢综合征及apelin水平的关系

目的探讨福建地区apelin/APJ通路基因多态性与代谢综合征(MS)及其相关组分以及血浆apelin的关系。方法纳入2015年2月至2016年2月福建医科大学附属第一医院心血管内科住院患者1018例,其中MS组457例,非MS组561例,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆apelin36浓度,连接酶检测反应(LDR)探针法检测apelin/APJ基因分型。比较两组间等位基因频率分布情况、不同等位基因分组中各MS组分以及apelin浓度的差异性。结果男性MS受试者apelin基因rs3115757位点的C突变等位基因频率明显高于非MS组(P<0.05);女性MS受试者APJ基因rs7119375位点的A突变等位基因频率明显低于非MS组(P<0.05);Logistic回归分析显示,调整年龄、吸烟、饮酒后,女性携带rs7119375 A突变等位基因者较携带野生等位基因者患MS的风险减少35.4%(OR=0.646,P<0.05)。男性APJ位点rs7119375A、rs10501367T突变等位基因组受试者的空腹血糖高于野生等位基因组(均P<0.05)。调整年龄、腰围、吸烟、饮酒后,Logistic回归分析显示男性携带rs7119375 A、rs10501367T突变等位基因是血糖异常的独立相关因素(OR=1.374、1.443,均P<0.05)。男性APJ位点rs10501367不同基因型间的血浆apelin浓度差异有统计学意义(P<0.05),携带TT突变基因型个体的血浆apelin浓度小于CC基因型和CT基因型(均P<0.05),而携带CC基因型个体的血浆apelin浓度与CT基因型差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Apelin/APJ通路基因多态性与MS及血糖异常以及血浆apelin水平明显相关,并且存在性别差异。

四妙勇安汤调控滋养血管网重建稳定ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化易损斑块的实验研究

观察四妙勇安汤干预AS易损斑块的效应,并以滋养血管(Vasa Vasorum,VV)新生为切入点,进一步探讨其起效的机制和靶点。方法:将雄性Apo E-/-小鼠随机分模型组、辛伐他汀组、四妙勇安汤组,采用添加1.1%L-蛋氨酸的高脂饲料喂养8周,建立AS易损斑块模型,并以C57BL/6小鼠作为对照。连续给药8周后,采用HE染色观察斑块的病理形态;采用免疫组化法观察斑块内与主动脉外膜VV密度以及斑块内巨噬细胞的聚集情况;检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C等血脂变化;采用Western blot技术检测HIF-1α-Apelin/APJ信号通路的关键节点蛋白。四妙勇安汤能够显著改善小鼠主动脉斑块病理形态,减小斑块面积及斑块与管腔面积比,增加最小纤维帽厚度以稳定斑块,且四妙勇安汤对纤维帽厚度的改善明显优于辛伐他汀;可有效抑制斑块内与血管外膜VV新生,降低斑块内巨噬细胞含量。四妙勇安汤可有效降低小鼠血清TC、TG、LDL-C水平,但对血清HDL-C水平无明显的改善作用。四妙勇安汤可降低HIF-1α蛋白表达水平,且其作用优于辛伐他汀;下调主动脉Apelin蛋白、APJ蛋白表达水平;显著降低Phospho-MEK1/2(Ser217/221)、Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)、Phospho-p70 S6 Kinase(Thr421/Ser424)蛋白表达水平。结论:四妙勇安汤可通过调节HIF-1α-Apelin/APJ信号通路,抑制VV新生,从而稳定AS易损斑块。

基于“肾主生殖”理论探讨卵巢颗粒细胞增殖的中西医机理

卵巢颗粒细胞的增殖是体现人类生殖能力的重要环节。文章通过概述PKC-ERK1/2-cyclins信号通路中相关蛋白促进颗粒细胞增殖的机制及其中西医研究进展,初步探讨Apline在此通路中发挥的作用及其与人类生殖的关系并丰富"肾主生殖"理论,以期能够从微观化的角度为卵巢颗粒细胞增殖在中西医生殖领域的治疗提供新的研究思路与方法。

Apelin-13在缺血性脑血管病中的研究进展

缺血性脑血管病具有发病率、致残率、致死率、复发率较高的特点,严重威胁人群健康。有研究表明Apelin-13参与脑血管病发病过程,由Apelin-13和受体血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(Putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1,APJ)组成的Apelin-13/APJ信号通路对缺血性脑血管病具有保护作用。本研究主要针对其在缺血性脑血管病中的研究进展进行综述。