Apelin13对人胚胎干细胞定向心肌细胞分化效率的影响

目的探讨Apelin13对人胚胎干细胞(hESCs)定向心肌细胞分化效率的影响。方法将hESCs单层培养后经EDTA消化传代,应用明确的诱导分化培养基对观察组(加Apelin13)和对照组(不加Apelin13)定向诱导hESCs向心肌细胞分化。于诱导第2天(中胚层阶段)、第4天(心肌分化初始阶段)、第7天(心肌分化末阶段)作为时间节点,采用实时荧光定量PCR检测两组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ mRNA表达水平,采用Western blotting检测两组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ、Nanog、Sox2蛋白表达;同时于诱导第7天采用细胞免疫荧光技术检测两组心肌细胞标志物肌钙蛋白T2(TNNT2)、α-辅肌蛋白(α-actinin)表达。结果诱导第7天观察组hESCs定向心肌分化程度高于对照组,免疫荧光染色倒置显微镜下可清楚看到成熟心肌细胞的肌结及心肌细胞TNNT2、α-actinin表达。在3个诱导时间节点,观察组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ mRNA及其蛋白表达均高于对照组(P均<0.05),观察组hESCs标志蛋白Nanog、Sox2低于对照组(P均<0.05)。结论 Apelin13可提高hESCs向心肌细胞的分化效率。

阿尔茨海默病患者血清中Apelin13和FKBP5的表达水平及临床意义

目的探究阿尔茨海默病(AD)患者血清中Apelin13和FK506结合蛋白51(FKBP5)的表达水平及意义。方法选取93例AD患者(AD组),同时选取同年龄层体检的90例健康者(对照组)。比较2组血清Apelin13、FKBP5 mRNA水平差异。Pearson相关分析Apelin13、FKBP5 mRNA与简易精神状态量表(MMSE)评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Apelin13、FKBP5 mRNA对AD患者重度认知功能障碍的诊断价值。结果AD组患者MMSE评分、血清Apelin13水平较对照组降低,而FKBP5 mRNA水平较对照组升高(均P<0.01)。轻、中及重度组AD患者血清中Apelin13水平依次降低,而FKBP5 mRNA水平依次升高(均P<0.05)。二元Logistic回归分析显示,较高的MMSE评分、Apelin13是AD发生的保护因素,而较高的FKBP5 mRNA是AD发生的危险因素(均P<0.05)。AD患者MMSE评分与血清FKBP5 mRNA水平呈负相关,而与Apelin13水平呈正相关(均P<0.05)。ROC曲线显示,Apelin13联合FKBP5 mRNA诊断重度认知功能障碍的曲线下面积(AUC)及95%CI[0.884(0.808~0.961)]明显高于单一Apelin13[0.776(0.673~0.879)]或FKBP5 mRNA[0.801(0.699~0.902)],其敏感度和特异度分别为81.25%和86.89%(均P<0.05)。结论AD患者血清中Apelin13水平降低,而FKBP5 mRNA水平升高,Apelin13联合FKBP5 mRNA对AD患者重度认知功能障碍具有良好的诊断效能。

Apelin13增强大鼠吗啡镇痛效能及对p38 MAPK和ERK活化的影响

目的探讨鞘内注射Apelin13(APL)对大鼠吗啡镇痛效能的影响。方法选取40只雄性健康SD大鼠进行鞘内置管,并随机分为对照组、APL高剂量(APL-H)组、中剂量(APL-M)组及低剂量(APL-L)组(n=10),APL-H、APL-M及APL-L组分别接受鞘内注射10μl含APL 0.05、0.5、5μg的MES缓冲液,对照组鞘内注射等体积的MES缓冲液,1次/d,连续5 d。各组均在鞘内给药前(d0)和给药后第6天(d6)、7(d7)、8(d8)天皮下注射10 mg/kg吗啡,测定各组右后爪的热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)及甩尾潜伏期(TFL),并计算最大可能镇痛效应百分比(MPE)。第8天行为学测试结束后处死大鼠,采用Western印迹检测脊髓腰膨大处的磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达。结果各组d0时基础PWTL和TFL的差异无统计学意义(P>0.05),且对照组和APL-L组d0、d6、d7、d8时PWTL、MPE和TFL的差异无统计学意义(P>0.05);APL-M组和APL-H组d6~d8时的PWTL、MPE和TFL水平均高于d0,且APL-M组和APL-H组d6~d8时的PWTL、MPE和TFL水平均高于对照组(P<0.05);APL-M组和APL-H组的p-p38 MAPK和p-ERK水平均低于对照组和APL-L组,且APL-H组该两种蛋白水平均低于APL-L组和APL-M组(P<0.05)。结论鞘内注射APL可抑制热痛敏并提高吗啡镇痛效能,其机制可能与抑制p38 MAPK和ERK活化有关,在恢复吗啡耐受大鼠的吗啡镇痛效果上有一定价值。

慢性心力衰竭不同心功能阶段患者血浆脂肪因子Apelin12、Apelin13的表达研究

目的研究未经系统治疗、不同心功能阶段的慢性心力衰竭（cHF）患者血浆脂肪因子Apelinl2和Apelinl3的水平，探索Apelin在不同心功能状态下的表达差异及相关临床意义和机制。方法选取未经系统治疗、不同心功能阶段的CHF患者186例，分为心衰早期组86例（NYHA心功能分级I～II级）、心衰晚期组100例（NYHA心功能分级Ⅲ～Ⅳ级）；另选健康体检人员30例作对照组。CI-IF组在治疗前、对照组在体检时抽取空腹外周血，用酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定外周血浆Apelinl2和Apelinl3水平，常规方法测定血脂水平，放射免疫法测定血浆NT．proBNP，心脏彩色多普勒超声测定LVIDd及EF，对检测结果进行统计学检验及相关性分析。结果CHF患者Apelinl2、Apelinl3总体平均值和对照组比较无统计学差异（P〉0．05），但心衰早期组分别高于对照组（P〈0．05）和心衰晚期组（P〈0．01），心衰晚期组低于对照组（P〈O．05），晚期心衰组随心功能的下降Apelin表达水平呈明显下降；多因素回归分析提示不同心功能阶段CHF患者Apelinl2、Apelinl3表达与EF呈正相关（P〈0．05），而与LVIDd、NT．proBNP呈负相关（P〈0．05），与年龄、血脂水平无明显相关性。结论不同心功能阶段且未经治疗的CHF患者血浆Apelinl2、Apelinl3水平有明显差异，心衰早期Apelin明显升高，心衰晚期则明显下降并且低于对照组，在早、晚期心力衰竭患者中Apelin表达的差异可能是适应心脏功能改变的结果；检测血浆Apelinl2、Apelinl3水平可作为一种观察CHF心功能状况和预后的辅助指标。

Elabela促进脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞分化

背景:Elabela是近几年发现的新型APJ内源性受体,在成人心血管系统中广泛分布,对心血管疾病也有一定的影响,但是Elabela在干细胞向心肌样细胞诱导分化过程中的作用以及分化过程中对APJ表达量的影响尚未发现相关研究。目的:探讨Elabela对脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的影响。方法:复苏冻存的脐带华通胶间充质干细胞,当细胞汇合度达到80%-90%时,使用5-氮胞苷使其向心肌样细胞分化,24 h后实验组更换为含Elabela、体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基,对照组更换为含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基。诱导第7,14,21,28天,观察细胞形态变化,同时收集各组细胞的总RNA和总蛋白,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测心肌特异性标记物Nkx2.5、cTnT、Connexin 43 mRNA及蛋白表达;采用实时荧光定量PCR和流式细胞技术检测诱导后的心肌样细胞中APJ的表达。结果与结论:①在诱导分化各阶段,实验组心肌特异性标记物Nkx2.5、cTnT、Connexin43 mRNA和蛋白表达量均高于对照组,APJ表达量也高于对照组;②结果表明,Elabela在脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞分化过程中起一定的促进作用;Elabela作为APJ的另一个激动剂在诱导分化过程中可促进APJ的表达。

血清LCN2、Apelin-13水平对老年男性骨质疏松预测价值

目的探讨老年男性血清中脂质运载蛋白(LCN)2和脂肪细胞因子(Apelin)-13对骨质疏松(OP)的预测价值。方法2018年1月至2020年6月到济南市第四人民医院检查的老年男性256例,根据骨密度(BMD)测定结果,分为OP组93例和对照组(非OP)163例。通过测定并比较两组Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)、全段甲状旁腺素(iPTH)、血钙(Ca)、血磷(P)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及胱抑素(Cys)-C;采用酶联免疫法检测血清中LCN2及Apelin-13的水平。采用Pearson相关考察各参数与BMD关系;多因素Logistic回归确定危险因素;并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析LCN2和Apelin-13对OP的预测价值。结果OP组年龄、CysC、CTX、PINP显著高于对照组,而BMD、OC、血清LCN2及Apelin-13显著低于对照组(P<0.05)。Pearson相关显示,BMD与老年男性的CTX、PINP呈显著负相关(均P<0.001),与OC、血清LCN2及Apelin-13呈显著正相关(均P<0.01)。Logistic回归显示,年龄、CTX、PINP、OC、血清LCN2及Apelin-13均是影响老年男性发生OP的独立危险因素。ROC曲线显示,血清LCN2的临界值为50.46 ng/L,其ROC曲线下面积(AUC)为0.806,预测的敏感度为76.8%,特异性为77.4%;血清Apelin-13的临界值为968.42 pg/mg,AUC为0.854,预测的敏感度为82.9%,特异性为81.6%。确诊为OP的90例患者经红外灸疗仪治疗后的LCN2、Apelin-13、BMD水平明显高于治疗前。结论血清LCN2、Apelin-13与老年男性发生OP相关,可作为OP的预测指标及康复治疗的疗效指标。