ApiIa抗菌肽基因的化学合成、克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了ＡｐｉＩａ抗菌肽基因，全长为８０个核苷酸．它被分成４个寡 核苷酸片段，分别在ＤＮＡ合成仪上合成．经分离纯化后的寡核苷酸片段经酶促连接，然后被 克隆到分泌型载体质粒ｐＦＤ１０１上．经限制酶酶切、ＰＣＲ模板检测以及双链 ＤＮＡ序列分析 检测，证明合成的ａｐｉＩａ基因和设计的完全一致．将含有ａｐｉＩａ基因的质粒ｐＦＤ１００１经ＢｇｌⅡ 酶切后，转化毕氏酵母．所得转化子经摇瓶发酵，上清液经２５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，有 ＡｐｉＩａ抗 菌肽表达．用抑菌圈试验作定性实验表明，表达的ＡｐｉＩａ有明显的生物活性．