LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芹黄春浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的研究大鼠分别灌胃和静脉给药芹黄春(芹菜素-7-O-β-D吡喃葡萄糖苷)溶液后,血浆中的芹黄春药物浓度及其药代动力学性质。方法 6只雌性Sprague Dawley大鼠随机分为两组,每组3只,分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予芹黄春溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆。采用甲醇沉淀法处理血浆生物样品,利用LC-MS/MS方法对血浆生物样品进行分析。药代动力学参数由Kinetica 2000软件进行计算。结果芹黄春浓度在1~2 000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.997 4),定量下限为1 ng/mL,低(8 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(1 200 ng/mL)3个浓度的提取回收率均大于90%,日内日间精密度和稳定性的RSD均小于12.8%,日内日间准确度在91.5%~107%,方法学考察均符合要求。大鼠经静脉注射和灌胃芹黄春后,Cmax分别为(2 363±96)ng/mL和(13.3±5.8)ng/mL,AUC0~∞分别为(796±201)h·ng/mL和(28.9±9.2)h·ng/mL,大鼠经静脉注射和后t1/2为(1.20±0.17)h,芹黄春的口服生物利用度约为0.6%。结论所建立的LC-MS/MS分析方法方便、快速,灵敏度高,准确度好,可用于大鼠血浆芹黄春浓度测定及其药代动力学的研究。

芹甙元抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨芹甙元抑制破骨细胞分化机制。方法小鼠骨髓巨噬细胞(BMMs)分不同浓度的芹甙元组,通过CCK-8法检测芹甙元对BMMs的细胞毒性,抗酒石酸酶(TRAP)染色法检测各组成熟破骨细胞数量,荧光定量聚合酶法(qPCR)检测各组破骨细胞分化标志基因(NFATC1、TRAP、CTSK、Atp6v0d2、Dc-stamp、C-Fos)mRNA的表达,Western blot法检测核转录因子κB p65(NF-κB p65)中磷酸化蛋白的水平。结果CCK-8检测结果显示,芹甙元在50μmol/L范围内对BMMs无明显的细胞毒性;TRAP染色结果显示,TRAP染色阳性的破骨细胞数目随着芹甙元浓度的升高而减少;qPCR检测结果显示,随着芹甙元浓度的升高,破骨细胞分化基因(NFATC1、TRAP、CTSK、Atp6v0d2、Dc-stamp、C-Fos mRNA)mRNA的表达水平明显降低(P<0.05);Western blot法检测结果显示,芹甙元组p65的磷酸化水平相对于对照组明显降低(P<0.05)。结论芹甙元可以通过NF-κB通路抑制破骨细胞分化与成熟,有望作为治疗骨质疏松骨溶解的潜在药物。