基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉,进行淋巴管内皮受体1(LYVE1)、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光组织化学染色,染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明,移至自制的样本容器中,荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低,外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强,更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便,特异性好。

有氧运动抑制炎症反应改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠心肌纤维化机制研究

背景动脉粥样硬化(AS)会引发心肌梗死、心肌纤维化等心血管病变,随着全球人口老龄化加重,发病人群逐渐增多。炎症反应是心肌纤维化的关键因素,规律的有氧运动可以减轻炎症保护心肌功能。但有氧运动对AS心肌纤维化的保护机制尚不清楚。目的本研究旨在探讨有氧运动对AS小鼠心肌纤维化的影响机制。方法2022年2—8月选取27只8周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠作为实验对象,将小鼠随机分为对照组、模型组和有氧运动组,每组9只。制备AS小鼠模型,对小鼠进行运动训练,Masson染色、苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织NOD受体3(NLRP3)、白介素1β(IL-1β)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达量。结果Masson染色结果示模型组心肌组织纤维化较对照组明显加重;有氧运动组心肌组织纤维化较模型组明显改善。HE染色结果示模型组小鼠心肌细胞排列较错乱,细胞形态、大小异常,细胞间隙增大,存在炎性细胞浸润;有氧运动组小鼠心肌细胞排列尚整齐,细胞形态、大小异常,细胞间隙基本正常。模型组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达高于对照组,有氧运动组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达低于模型组、高于对照组(P<0.05)。模型组SOD、GSH-Px表达量低于对照组,有氧运动组SOD、GSH-Px表达量高于模型组、低于对照组(P<0.05)。结论有氧运动明显改善ApoE^(-/-)AS小鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制心肌炎性反应、激活抗氧化水平有关。

香菇多糖对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及AMPK信号通路的影响

目的:探讨香菇多糖(LNT)对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法:ApoE^(-/-)小鼠分为模型组、立普妥组(5 mg/kg)、LNT低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,以相似遗传背景的C57BL/6小鼠为对照组。灌胃给药12周后,全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平;ELISA检测血清IL-6、IL-1β水平;油红O染色观察整体主动脉斑块形成情况;HE染色观察主动脉根部斑块形成情况;蛋白免疫印迹检测主动脉AMPK通路蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β水平、主动脉斑块面积、主动脉根部斑块面积、主动脉组织NLRP3、IL-6、IL-1β表达显著升高,主动脉组织p-AMPK/AMPK表达和血清HDL-C水平降低(P<0.05);与模型组比较,立普妥组、LNT中、高剂量组TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β、主动脉斑块面积、主动脉根部斑块面积、主动脉组织NLRP3、IL-6、IL-1β表达显著降低,主动脉组织p-AMPK/AMPK表达和血清HDL-C水平显著升高,且LNT各剂量组间差异有统计学意义(P<0.05);立普妥组与LNT高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LNT可能通过激活AMPK通路抑制AS小鼠炎症反应和AS斑块形成。

健脾祛痰方对限制活动ApoE^(-/-)小鼠体成分/行为学变化的影响

目的:观察健脾祛痰方对限制活动载脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E Knockout,ApoE^(-/-))小鼠体成分/行为学变化的影响。方法:将30只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组以及健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组;将6只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组以普通饲料喂养,其余5组以高脂饲料喂养,阿托伐他汀组进行阿托伐他汀2.4 mg/(kg·d)灌胃,健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组以健脾祛痰方[2.97 g/(kg·d)、5.94 g/(kg·d)、11.88 g/(kg·d)]灌胃,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,12周后进行脾虚痰浊模型评价。实验期间每周观察小鼠的皮毛色泽、活动能力及大便性状,检测体成分,以旷场实验、跑台实验进行动物行为学评估。结果:与正常组比较,模型组小鼠旷场实验运动总距离减少,跑台实验跑步力竭时间降低,体脂降低,差异有统计学意义(P <0.01)。与模型组比较,健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组小鼠旷场实验运动总距离呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);健脾祛痰方中、高浓度组小鼠跑台实验跑步时间增加,差异有统计学意义(P <0.05,P <0.01);阿托伐他汀组和健脾祛痰方低浓度组跑步时间均呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组小鼠体脂呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);阿托伐他汀组小鼠体脂显著增加,差异有统计学意义(P <0.01)。结论:健脾祛痰方可增加限制活动ApoE^(-/-)小鼠的行为活动,但对体成分改善作用不显著。

西方饮食饲料对APOE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化造模的影响

目的为了研究西方饮食饲料快速建模及对APOE^(-/-)小鼠生物学指标及组织病理学的影响。方法用48♀48♂APOE^(-/-)小鼠、48♀48C57BL/6J进行了试验,分为8组,分别为APOE^(-/-)普通繁殖料组(24♀24♂)和APOE^(-/-)西方饮食饲料组(24♀24♂)、C57BL/6J普通繁殖料组(24♀24♂)和C57BL/6J西方饮食饲料组(24♀24♂)。从3周开始饲喂,直到20周实验结束。实验结束后采集血清检测生化指标,分离主动脉做大体油红O染色及分析,主动脉根部做石蜡切片和HE染色。结果西方饮食没有显著增加APOE^(-/-)体重,但可以显著提高APOE^(-/-)鼠的血脂指标、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白,促进动脉粥样硬化斑块的形成,雄鼠适合主动脉大体斑块的造模,雌鼠适合主动脉弓根部斑块造模。结论西方饮食饲料可以促进APOE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化造模,增加主动脉斑块面积比,缩短建模时间,提高建模的均一性。

铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及机制研究

目的探讨铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及作用机制。方法用高脂饲料喂养建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,随机分别给予生理盐水(10 mL/kg)、麝香保心丸溶液(20 mg/kg)、低剂量铁皮石斛液(10 g/kg)、高剂量铁皮石斛液(30 g/kg)为模型组、阳性药物组、低剂量组和高剂量组,普通饲料喂养ApoE-/-小鼠为对照组给予生理盐水(10 mL/kg),每组8只。治疗4周后,苏木精-伊红染色观察小鼠胸主动脉组织病理学改变;检测小鼠血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;利用荧光定量PCR技术检测胸主动脉中胆固醇外转运蛋白ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达情况。结果与对照组比较,模型组动脉内膜脂质斑块形成,斑块内有菱形胆固醇结晶,伴炎性细胞浸润和大量泡沫细胞聚集。与模型组比较,阳性药物组、低剂量组和高剂量组小鼠胸主动脉的泡沫细胞沉积减少,动脉粥样硬化病变程度减轻。与对照组比较,模型组TG、TC、LDL-C水平高、HDL-C水平低,ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、低剂量组和高剂量组TG和TC水平降低,HDL-C水平升高;阳性药组、高剂量组ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁皮石斛可改善ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的血脂水平,减轻动脉粥样硬化小鼠的动脉病变程度,可能与影响ABCA1、ABCG1和PPARγ的表达有关。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

芳香新塔花总黄酮通过调控PPARγ/LXRα/ABCA1通路对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢紊乱的影响

目的探究芳香新塔花总黄酮对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢及对PPARγ/LXRα/ABCA1通路的影响。方法60只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养8周后随机分为模型组、阿托伐他汀组(3 mg/kg)及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组12只。灌胃给予相应剂量药物干预12周,给药同时继续饲喂高脂饲料;另取12只C57BL/6J小鼠为空白组,灌胃给予生理盐水,同时喂养普通饲料。给药结束后,油红O染色观察肝组织脂质沉积情况,HE染色观察主动脉斑块形态,全自动生化分析仪检测血脂水平,ELISA法检测血清IL-18、IL-1β、MCP-1水平,试剂盒检测肝组织TC、TG、NEFA、FC水平,Western blot法检测肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组肝脏脂滴面积增加(P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-18、IL-1β、MCP-1水平和肝组织TC、TG、NEFA、FC水平均升高(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C水平和肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组和总黄酮中、高剂量组上述指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢水平,其机制可能与激活PPARγ/LXRα/ABCA1通路有关。

心脉康增强血管平滑肌细胞自噬改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探讨心脉康(鳖甲、三棱、莪术等组成)调节血管平滑肌细胞(VSMC)自噬改善动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法72只敲除载脂蛋白E基因(ApoE^(-/-))的小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物(阿托伐他汀钙片)对照组(2.6 mg·kg^(-1))及心脉康低、中、高(30、60、90 g·kg^(-1))剂量组,每组12只。空白组小鼠喂养常规饮食,余下各组喂养高脂饮食12周,建立AS模型。模型复制成功后给予心脉康灌胃6周,每天1次。检测小鼠血清血脂四项:总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C);油红O、HE和Masson染色观察小鼠主动脉根部血管组织病理变化;免疫荧光检测主动脉根部血管组织微管相关蛋白l轻链3B(LC3B)和平滑肌22 alpha蛋白(SM22α)的表达;采用Western Blot法检测主动脉血管组织中LC3B、自噬效应蛋白1(Beclin-1)和SM22α蛋白的表达水平;qRT-PCR法检测主动脉中LC3B、Beclin-1和SM22αmRNA的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠血清血脂四项结果显示,HDL-C下降,TC、TG、LDL-C均升高(P<0.05);油红O、HE和Masson染色结果显示,小鼠主动脉根部血管组织斑块面积增多,内壁增厚并伴有大量胆固醇结晶以及炎症细胞浸润,胶原纤维含量减少;免疫荧光结果显示,LC3B和SM22α共定位面积明显减少(P<0.05);qRT-PCR和Western Blot结果显示,LC3B,Beclin-1和SM22α蛋白及m RNA表达下降(P<0.05)。与模型组比较,心脉康低、中、高剂量组及阳性药物对照组HDL-C水平明显升高,TC、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05);主动脉内斑块面积减少,胆固醇结晶以及炎症浸润降低,胶原纤维含量增多;LC3B和SM22α共定位面积明显增加(P<0.05);LC3B、Beclin-1、SM22α蛋白以及mRNA表达增加(P<0.05)。结论心脉康能降低血脂水平,减少斑块面积,改善动脉粥样硬化,其机制可能与增强血管平滑肌细胞自噬水平有关。

化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肠道菌群及肠黏膜屏障损伤的影响

目的观察化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠肠道菌群及黏膜屏障的影响,探讨调控肠道菌群及肠黏膜屏障防治AS的作用机制。方法40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组,化瘀祛痰方低、中、高剂量组,10只C57BL/6J小鼠作为正常组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,正常组给予普通饲料喂养。造模成功后化瘀祛痰方不同剂量组分别给予相应的药物灌胃,对照组与模型组给予等量的生理盐水。30 d后16S rDNA分析小鼠肠道菌群变化;HE染色观察肠黏膜屏障病理变化;ELISA法检测血清及肠道内容物中脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的含量;Western blot法及Realtime RT-PCR法检测肠道上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Claudin、Occludin1蛋白及mRNA表达。结果与正常组相比,模型组肠道菌群多样性降低,厚壁菌门及放线菌门比例升高,拟杆菌门及变形菌门的比例降低;毛螺菌属(f-Lachnospiraceae)、梭菌目(o-Clastridiales)、梭菌属(c-Clastridia)、脱硫弧菌科(f-Desulfovibrionaceae)、脱硫弧菌目(o-Desulfovibrionales)丰度存在差异。模型组小鼠HE染色显示,肠上皮细胞上皮下间隙增宽,大片绒毛脱落,固有层裸露;血清及盲肠内容物LPS水平升高(P<0.05或P<0.01);肠道上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Claudin1、Occludin蛋白及mRNA的表达降低(P<0.05或P<0.01)。化瘀祛痰方干预后,肠上皮细胞上皮下间隙变窄,绒毛脱落减少;血清及盲肠内容物LPS水平显著降低(P<0.05或P<0.01);ZO-1、Claudin1、Occludin蛋白及mRNA的表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可能通过调节ApoE^(-/-)小鼠肠道菌群结构,改善肠道黏膜屏障功能,降低炎性介质LPS释放入血,从而防治动脉粥样硬化。

Piezo1在不同周龄ApoE^(-/-)小鼠中的表达水平及对血管内皮功能的作用

目的:探明ApoE^(-/-)小鼠中机械敏感性离子通道Piezo1的表达变化及Piezo1在动脉粥样硬化血管内皮功能中的作用。方法:选用24只SPF级8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠为模型组,24只SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组,高脂饲料喂饲,于高脂饲料干预的第12、14、16和18周,每组各处死6只小鼠,检测小鼠主动脉病理情况、血脂水平、血管内皮功能及Piezo1的表达。进一步选用SPF级8周龄Piezo1^(flox/flox)Cdh5-Cre^(+)/ApoE^(-/-)(以下简称Cre^(+))小鼠与Piezo1^(flox/flox)Cdh5-Cre-/ApoE^(-/-)(以下简称Cre-)小鼠各10只,采用高脂饲料喂养12周,从小鼠病理染色、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、内皮素1(endothelin-1,ET-1)、前列环素I_(2)(prostaglandin I_(2),PGI_(2))、血栓素A_(2)(thromboxane A_(2),TXA_(2))和离体血管环张力等多方面检测Piezo1缺失对动脉粥样硬化小鼠血管内皮功能的影响。结果:通过对高脂饲料喂养不同时间的小鼠进行观察显示,模型组小鼠主动脉斑块较正常组逐渐加重;血脂水平较正常组显著升高(P<0.01)。血清中eNOS与PGI_(2)的含量降低(P<0.01),ET-1与TXA_(2)含量增多(P<0.05)。免疫荧光染色显示模型组小鼠主动脉斑块组织中内皮细胞完整性受损,Piezo1的表达较正常组升高,但随着高脂饲料喂养周时的延长,模型组小鼠Piezo1的荧光强度及m RNA水平逐渐下降。通过Person相关性检验分析显示,Piezo1与小鼠内皮功能相关指标eNOS和PGI_(2)表达呈正相关,与ET-1和TXA_(2)表达呈负相关(P<0.01)。Piezo1表达水平与血管内皮功能有较强相关性。进一步在基因敲除小鼠中观察到,Cre^(+)小鼠主动脉斑块面积较Cre-小鼠显著降低(P<0.01);Cre^(+)小鼠血清eNOS和PGI_(2)含量较Cre-小鼠显著减少(P<0.05,P<0.01),TXA_(2)含量较Cre-小鼠显著增加(P<0.05)。血管细胞活力检测观察到Cre^(+)小鼠细胞活力较Cre-小鼠显著减弱(P<0.01)。小鼠离体主动脉张力检测显示Cre^(+)小鼠主动脉环对乙酰胆碱的内皮依赖性舒张作用较Cre-小鼠显著减弱(P<0.05)。免疫荧光染色检测到Cre^(+)小鼠主动脉斑块组织中内皮细胞完整性受损较Cre-小鼠严重,Piezo1的表达降低。结论:Piezo1参与了ApoE^(-/-)小鼠的病理进程,与血管内皮功能密切相关,Piezo1基因的缺失影响了ApoE^(-/-)小鼠斑块的形成,加重血管内皮功能的损伤。

基于Wnt/β-catenin通路探讨通心络胶囊对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠炎症水平的影响

目的探究通心络胶囊对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其通过Wnt/β-catenin信号通路产生的作用机制。方法将24只ApoE-/-小鼠随机分为正常饮食组(n=6)及高脂饮食组(n=18)。高脂饮食组喂养8周后,随机分为阿托伐他汀组(n=6)、通心络胶囊组(n=6)、模型组(n=6),并分别给予阿托伐他汀4.8 mg/kg、通心络胶囊超微粉1.5 g/kg以及同体积的生理盐水,每日1次,持续8周。末次给药后禁食12 h,收集各组小鼠主动脉组织进行苏木素-伊红(HE)及油红O染色,观察主动脉斑块情况;收集小鼠血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting)和实时荧光定量聚合物酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白及基因表达量的变化。结果与正常组相比较,模型组小鼠的斑块面积明显增加,血清中的炎症因子TNF-α和IL-6含量增加。与模型组相比较,通心络胶囊能够明显降低ApoE-/-小鼠粥样硬化斑块面积,降低血清中TNF-α和IL-6含量,降低主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达和基因水平。结论通心络胶囊可降低ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠血清中炎症因子表达,降低斑块面积,其机制可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

基于TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝组织TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法将50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(216、144、072 g/kg),每组10只,高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预;另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组,普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后,取肝脏行HE染色观察组织病理变化,采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大,边缘变钝,呈黄色油腻感,镜下可见大小不等的脂肪空泡形成,证实模型制备成功;茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组,茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB、IL-β、FAS mRNA表达低于模型组(P<005)。结论茯砖茶可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路来达到预防NAFLD形成的作用。

六味地黄方通过调节肠道菌群和胆汁酸代谢改善绝经后APOE^(-/-)小鼠的胆固醇代谢异常

目的探究六味地黄方调节肠道菌群和胆汁酸代谢改善小鼠绝经后胆固醇代谢异常及可能的作用机制。方法利用双侧卵巢摘除的APOE^(-/-)小鼠给予高脂饮食,复制绝经后胆固醇代谢异常模型,并给予0.13 mg·kg^(-1)的雌二醇和9.0 g·kg^(-1)的六味地黄方进行治疗。90 d治疗结束后,生化法检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和肝脏、粪便中TC水平;ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)水平;肝脏HE和油红O染色观察小鼠肝脏脂质损伤;生化法检测小鼠肝脏、血清、胆囊和粪便中总胆汁酸(TBA)含量;液相质谱联用技术(UPLC-MS)对小鼠肝脏和粪便胆汁酸组分定量分析;16S rRNA测序分析小鼠结肠菌群,并分析粪便胆汁酸组分和肠道菌群之间的相关性。结果六味地黄方可以降低模型小鼠血清TC、TG、LDL-c以及TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.01),提高HDL-c水平(P<0.01);并减少肝脏脂质堆积,减轻肝脏损伤;还可降低血清、胆囊和肝脏TBA水平(P<0.01),增加粪便中TBA排出(P<0.01);减少粪便TαMCA、TβMCA、TCA、TCDCA、TDCA和CA结合型胆汁酸的含量(P<0.05,P<0.01),增加次级胆汁酸LCA的含量(P<0.01)。六味地黄方恢复了模型小鼠结肠菌群的平衡,上调粪异杆菌属(Allobaculum)的相对丰度(P<0.01),并下调颤螺菌属(Oscillospira)和普氏菌(Prevotella)的相对丰度(P<0.05)。结论六味地黄方通过重塑结肠菌群的结构恢复菌群的平衡,增加粪便中次级胆汁酸的排出以降低血清和肝脏中胆固醇沉积,从而改善模型小鼠胆固醇代谢异常。

养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

目的从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)进程。方法ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养,其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周,对照组小鼠注射等体积无菌PBS,其余组腹腔注射10μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行,第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积;生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平;HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积;qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达;Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。结果与模型组相比,养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P<0.01),降低TG、LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C水平(P<0.05),降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P<0.05,P<0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),下调血清IL-6水平(P<0.05),上调TGF-β1水平(P<0.05)。与模型组比较,各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平;养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt3b mRNA(P<0.001)和Dnmt3a蛋白(P<0.05)表达,升高TGF-β1水平(P<0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P<0.05),主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P<0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05),增加TGF-β1水平(P<0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05)。结论养阴活血方通过调节血脂,降低DNA甲基化酶Dnmts的表达,改善炎症水平,从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。

参附黄配方对脓毒症小鼠不同脑区IL-33/ST2轴的影响

目的 观察参附黄配方对脓毒症小鼠不同脑区白细胞介素-33(IL-33)/ST2轴的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、脓毒症组和参附黄组。脓毒症组和参附黄组采取盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型。参附黄组术后给予每日2次的2.5 g/kg参附黄配方0.5 m L灌胃;脓毒症组和对照组给予每日2次的纯净水0.5 mL灌胃。采用临床分级评价小鼠临床指数,采用神经功能分级评价神经功能指数,采用酶联免疫标记法评价各组小鼠前额叶皮层和海马区IL-33和ST2的含量。结果 与对照组比较,脓毒症组小鼠临床指数显著增高,神经功能指数显著降低(P<0.05);前额叶皮层和海马区IL-33和ST2蛋白表达显著增多(P<0.05)。与脓毒症组相比较,参附黄组临床指数显著降低(P<0.05),神经功能指数显著增高(P<0.05);前额叶皮层和海马区IL-33蛋白表达显著增高(P<0.05),ST2蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论 参附黄配方对CLP小鼠临床症状和神经功能具有一定保护作用,其机制可能与调节IL-33/ST2轴有关。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

丹参有效成份配伍对ApoE^(-/-)小鼠心脏的保护作用及TLR4/NF-κB通路的影响

目的研究丹参4种主要的水溶性成分丹参素(DSS)、丹酚酸(Sal)-A、Sal-B和原儿茶醛(PAL)的有效配伍组合(SABP)对ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠心脏的保护作用及其机制。方法6周龄雄性的ApoE^(-/-)小鼠被随机分为:模型(Model)组、SABP组、阳性药瑞舒伐他汀(RC)组。雄性的C57BL/6J小鼠作为正常对照(Control)组。所有的小鼠正常饮食。RC组每天腹腔注射0.4 mg/kg的RC,SABP组每天腹腔注射丹参4种水溶性成分的有效组合(DSS:5 mg/kg,Sal-A:0.233 mg/kg,Sal-B:10.000 mg/kg,PAL:17.000 mg/kg)。Control组和Model组每天腹腔注射等剂量的生理盐水。8 w后,通过全自动生化分析仪检测血清脂类水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心脏的形态学变化。免疫组化和Western印迹检测心脏组织中Toll样受体(TLR)4、转化生长因子β激活激酶(TAK)1、核转录因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达的变化。结果SABP可以有效地降低血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,改善心脏损伤,减少心脏中TLR4、TAK1、IL-6和TNF-α蛋白表达,抑制NF-κB的磷酸化。结论SABP对ApoE^(-/-)小鼠心脏具有保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

γ-亚麻酸对糖尿病小鼠记忆衰退的影响及机制

目的 探究γ-亚麻酸(GLA)对糖尿病小鼠记忆衰退的影响及机制。方法 选取16只8周龄野生型小鼠,雌雄各半,分成GLA组及对照组,对所有小鼠使用1 g/kg D-果糖加10%饮用水饮食(持续40 d)诱导糖尿病小鼠记忆衰退模型。对照组小鼠给予每日1 mg/kg生理盐水灌胃,GLA组小鼠给予每日1 mg/kg GLA灌胃。干预7 d后,以Morris水迷宫评估小鼠的学习和记忆障碍情况,处死小鼠取大脑皮层及海马组织,以HE染色检查二者病理改变,以透射电镜观察小鼠海马神经元超微结构变化,以Western Blot实验检测小鼠海马组织中GRP78、GRP94、NOX2和NOX4蛋白表达水平。结果 GLA组小鼠的逃逸潜伏期短于对照组,穿越环次数高于对照组(P<0.05)。GLA组小鼠大脑皮层和海马组织病理变化以及海马神经元超微结构损伤程度均较对照组轻。GLA组小鼠海马组织GRP78、GRP94、NOX2和NOX4蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。结论 GLA能通过抑制海马神经元内质网应激反应,进而改善糖尿病小鼠记忆衰退。