17β-雌二醇对ApoE-/-鼠Teff/Treg细胞平衡和氧化应激的影响及与动脉粥样硬化的关系

目的探讨不同时间给予17β-雌二醇(E2)替代治疗对apo E-/-雌鼠动脉粥样硬化(As)病变内效应性T细胞(Teff)和调节性T细胞(Treg)平衡和氧化应激的影响及其与As的关系。方法 5周龄apo E-/-鼠摘除卵巢后用高脂餐喂养,随机分为早期、延迟及持续治疗组,给予E2皮下注射(5μg/天)8周或16周,检测主动脉根部As病变大小、组成改变以及硫氧还蛋白TRX1的表达,并检测As病变内Th1细胞的细胞因子IFN-γ、Treg细胞的转录因子Foxp3和TRX1 m RNA的表达。结果 (1)和对照组相比,早期E2治疗使apo E-/-鼠脂质条纹的面积显著减少(8.82%±0.98%vs.19.3%±1.26%in controls,P<0.01);而延迟E2治疗纤维脂质斑块的面积明显增加(30.7%±0.74%vs.25.1%±0.94%in controls,P<0.05);持续E2治疗纤维脂质斑块的面积亦明显降低(22.48%±0.92%vs.25.63%±1.04%in controls,P<0.05);(2)延迟E2治疗斑块内胶原和平滑肌细胞含量明显减少,而巨噬细胞数量显著增加;持续E2治疗斑块内胶原和平滑肌细胞含量明显增加,而巨噬细胞数量明显减少;(3)早期及持续E2治疗As病变内代表促炎作用的IFN-γm RNA的表达明显降低,而延迟E2治疗斑块内IFN-γm RNA的表达明显增加;(4)早期及持续E2治疗AS病变内代表抑炎作用的Foxp3 m RNA的表达明显增加,而延迟E2治疗斑块内Foxp3 m RNA的表达明显降低;(5)早期及持续E2治疗,apo E-/-鼠血清过氧化脂质(LPO)的含量明显减少,而延迟E2治疗血清LPO含量明显增加;(6)早期及持续E2治疗As病变内TRX1 m RNA及蛋白水平的表达明显降低;而延迟E2治疗斑块内TRX1 m RNA及蛋白水平的表达却明显增加。结论 apo E-/-鼠摘除卵巢后,早期E2替代治疗可抑制As病变的形成,而缺乏雌激素一定时间后,再给予E2治疗却加速了As病变的进展并使斑块趋于不稳定,其机制与调节Teff/Treg细胞平衡以及对氧化应激的影响有关。

青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的探讨青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化以及炎症因子的影响。方法将20只ApoE-/-基因敲除小鼠分为青蒿素组和PBS处理组,每组10只,经高脂喂养8周,与对照组小鼠(C57BL/6J标准饮食小鼠,10只)比较,通过血管大体油红O染色评价斑块面积;HE染色观察病变形态及血浆中炎症因子的变化。结果与对照组比较,PBS处理组及青蒿素组均可见动脉硬化斑块,炎症因子水平升高。青蒿素组的动脉硬化程度及炎症因子水平均明显低于PBS处理组。结论青蒿素可以改善ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展。

BMSC治疗ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠模型的初步研究

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对ApoE^(-/-)缺陷小鼠动脉粥样硬化(AS)的治疗作用。方法 ApoE^(-/-)缺陷小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,同时设置正常对照组。实验组、阴性对照组于9 w龄时开始分别经尾静脉注射BMSC悬液200μl(1×10~5个BMSC)和同体积生理盐水,正常对照组和空白对照组不做处理。小鼠分别于12 w时和BMSC注射后4 w,采用全自动生化分析仪测定各组血液总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,油红O染色观察主动脉弓斑块形成情况。结果空白对照组与正常对照组小鼠相比,TC、TG、LDL-C明显升高(P<0.05),主动脉弓油红O染色可见空白对照组主动脉弓出现斑块。BMSC治疗后,实验组的TC、TG、LDL-C较阴性对照组明显下降(P<0.05),油红染色发现实验组主动脉弓斑块斑块数量及面积均减少。结论 ApoE^(-/-)缺陷小鼠高脂饮食至12 w龄时出现典型动脉粥样硬化(AS)临床表征,而同种异体BMSC具有一定降低血脂、抑制主动脉弓内斑块形成的作用。

HHcy对ApoE^(-/-)鼠动脉粥样硬化的影响及叶酸、VB_(12)的干预效应

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响及叶酸、维生素B1(2VB12)的干预效应。方法健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食。另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,随机平均分为高脂血症组、HHcy组、干预组。喂养14周后,取血测定血清Hcy及血脂水平,取主动脉进行石蜡包埋并切片,HE染色后检测主动脉斑块面积及内中膜厚度。结果 HHcy组血清同型半胱氨酸(Hcy)水平明显高于对照组与干预组(P<0.001),与对照组比较,其血脂LDL、TG、CHOL分别升高约2.2、7.6、7.2倍,HDL下降约63%(P<0.001)。HE染色可见三组ApoE-/-鼠均有AS斑块形成,HHcy组主动脉斑块面积6.21×105μm2明显大于高脂血症组3.99×105μm2与干预组4.41×105μm(2P<0.05)。AS斑块面积与其血清Hcy水平呈正相关(r=0.4898,P<0.001)。结论 HHcy导致ApoE-/-鼠AS病变形成,且病变程度依赖血清Hcy水平,叶酸和VB12的干预可有效缓解HHcy引起的血管损伤。

吡格列酮对尿毒症apoE^(-/-)小鼠调节性T细胞和动脉粥样硬化的影响

目的:观察吡格列酮(Pio)对尿毒症apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠调节性T细胞(Treg)和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。方法:ApoE-/-小鼠通过二步外科手术法建立尿毒症模型,对照组行假手术。造模后检测肾功能判断造模是否成功。实验动物分为:尿毒症Pio干预组(UP)、尿毒症安慰剂组(UO)及对照安慰剂组(CO),分别以Pio或安慰剂干预8周。干预结束后检测肾功能、血脂及血糖;血清转化生长因子β1(TGF-β1)及干扰素γ(IFN-γ)浓度;脾脏Treg比率;主动脉叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)及IFN-γmRNA的表达;主动脉根部AS斑块相对面积。结果:手术后肾功能检测提示造模成功。干预结束后UO组与CO组相比,主动脉根部斑块相对面积显著增大;脾脏Treg比率下降;血清TGF-β1浓度降低、IFN-γ浓度升高;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达下调、IFN-γmRNA表达上调。Pio干预能逆转上述指标的改变,即UP组与UO组相比,主动脉根部斑块面积显著缩小;脾脏Treg比率上升;血清TGF-β1浓度升高、IFN-γ浓度降低;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达上调、IFN-γmRNA表达下调。结论:Pio可上调尿毒症apoE-/-鼠体内受损Treg的数量和功能,校正Treg/效应性T细胞(effectorTcell,Teff)失衡和延缓其主动脉加速发展的AS,而此作用与改善糖脂代谢无关。

Hcy对动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)促进ApoE基因敲除(ApoE-/-)鼠动脉粥样硬化(AS)形成同时是否对肝脏脂质代谢产生影响。方法取健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)12只作为正常对照组,饲以普通饮食;另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,分为模型对照组、高同型半胱氨酸血症(HHcy)组、叶酸和VB12干预的干预组,每组12只,饲养18周后,生化分析仪测定血清Hcy及血脂总胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平,主动脉冰冻切片苏木素-伊红(HE)染色后观察并测量斑块面积;肝脏组织冰冻切片油红O染色观察肝脏细胞脂质变化,酶法测定肝脏脂质代谢改变。结果与正常对照组比较,HHcy组血清Hcy、LDL、TG、CHOL水平明显增高(P<0.01),分别升高约2.3、2.8、5.0、10.7倍,HDL下降约64%(P<0.01);干预组Hcy、LDL、CHOL水平较HHcy组分别下降43%、34%、21%,HDL水平增高36%(P<0.05),TG无明显变化;HE染色可见3组ApoE-/-鼠主动脉均有AS形成,其中HHcy组主动脉斑块面积28.2×104μm2,明显大于模型对照组的17.0×104μm2(P<0.05),干预组斑块面积17.1×104μm2,较HHcy组减轻(P<0.05)。肝脏油红O染色HHcy组脂质积累明显;干预组肝细胞内有少量脂质沉积;氧化酶法检测发现HHcy组肝脏组织中CHOL和TG分别是正常对照组的2.2、2.8倍(P<0.01);干预组肝脏CHOL、TG水平与HHcy组比较下降30%、33%(P<0.01)。结论 Hcy促进ApoE-/-鼠AS形成的同时加速肝脏脂代谢紊乱。

尿毒症ApoE基因敲除小鼠加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系

目的建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,探讨模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系。方法选用C57BL/6J遗传背景的apoE-/-鼠为研究对象,通过右肾皮质电凝加左肾切除术建立尿毒症apoE-/-鼠模型,对照apoE-/鼠行假手术。造模后2周检测肾功能判断造模是否成功。造模后10周采血检测肾功、血清总胆固醇;应用ELISA法检测血清TGF-β1及IFN-γ浓度;应用流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;应用实时荧光定量PCR法检测主动脉组织中Foxp3及IFN-γ mRNA的表达;收集主动脉根部行冰冻切片油红O染色计算斑块相对面积。分析肾功能指标与Treg数量的相关性。结果造模后肾功能检测显示造模成功。造模后10周与对照组apoE-/鼠相比:尿毒症apoE-/-鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块相对面积显著提高,脾脏Treg细胞比率下降,血清TGF-β1浓度降低及IFN-γ、总胆固醇浓度升高,主动脉Foxp3 mRNA表达下调及IFN-γ mRNA表达上调。肾功能指标与Treg数量呈显著负相关。结论成功地建立了尿毒症apoE-/-小鼠模型。模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内Treg数量减少、功能受损及Teff功能上调,即T细胞亚群(Treg/Teff)失衡有关。

ApoE缺陷大鼠动脉粥样硬化模型的构建

目的构建大鼠的动脉粥样硬化模型。方法将载脂蛋白E(ApoE)缺陷(ApoE-/-)大鼠共16只,均分为两组作为实验组和对照组,均予高脂饲料喂养12周。实验组在前4周予Alzet渗透泵植入大鼠皮下,内部填充血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),以1μg/(kg·min)的速率匀速释放。对照组仅予等量生理盐水处理。第12周麻醉后测体重、取血并处死,检测炎症因子及血脂,取心脏及主动脉组织,切片作HE、油红O、Masson染色。结果实验组大鼠出现动脉粥样硬化斑块,对照组无类似表现,两组之间在其他方面无统计学差异。结论 ApoE-/-大鼠予高脂饮食饲养并予AngⅡ刺激,可成功造成大鼠动脉粥样硬化模型。

miR-124及其启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致动脉粥样硬化中的作用

本文旨在探讨mi R-124在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化中的作用及其启动子区DNA甲基化调控机制。Apo E-/-小鼠给予高蛋氨酸饮食16周复制高同型半胱氨酸血症动物模型,并设正常对照组(C57BL/6J小鼠正常饮食)及Apo E-/-对照组(Apo E-/-小鼠正常饮食)。HE及油红O染色后观察各组小鼠主动脉粥样硬化程度;生化分析仪检测各组小鼠血清Hcy及血脂水平;复制泡沫细胞模型,油红O染色确定模型是否复制成功;分别以0、50、100、200、500μmol/L Hcy及50μmol/L Hcy+10μmol/L 5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞。实时定量PCR(RT-q PCR)检测各组小鼠主动脉及泡沫细胞中mi R-124的表达变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测各组小鼠主动脉及泡沫细胞中mi R-124启动子区DNA甲基化水平,同时在细胞水平观察DNA甲基化抑制剂AZC对mi R-124启动子区DNA甲基化水平及其表达的影响;泡沫细胞油红O染色观察mi R-124甲基化改变对细胞脂质蓄积的影响。结果显示,与Apo E-/-对照组相比,高蛋氨酸组小鼠血清Hcy水平显著升高(P<0.01),且主动脉发生明显粥样变,mi R-124的表达水平显著降低(P<0.01),而mi R-124启动子区DNA甲基化水平显著升高(P<0.01)。给予不同浓度Hcy刺激泡沫细胞后,mi R-124的表达水平呈下降趋势,而mi R-124启动子区DNA甲基化水平逐渐升高,且随Hcy浓度增加改变越明显,呈剂量依赖关系(P<0.05,P<0.01),给予AZC干预后可逆转上述变化(P<0.05)。以上结果提示,mi R-124表达下调可能在Hcy致动脉粥样硬化过程中发挥重要作用,而mi R-124启动子区高甲基化改变可能是其表达下调的重要机制。