PCSK9介导ApoER2降解在血管平滑肌细胞多倍体化及衰老中的作用

目的观察PCSK9过表达对人血管平滑肌细胞多倍体化及衰老的影响,并探讨ApoER2在其过程中发挥的作用。方法空载腺病毒(Ad-Null)和PCSK9过表达腺病毒(Ad-PCSK9)转染人血管平滑肌细胞,光镜观察细胞形态学改变;采用BrdU/PI染色,并采用LSC法检测细胞的增殖及多倍体水平;采用β-半乳糖苷酶检测试剂盒检测细胞衰老情况;采用Western blot法检测PCSK9和ApoER2的表达水平。采用人重组ApoER2蛋白(rhApoER2)干预Ad-PCSK9转染的人血管平滑肌细胞,并检测其增殖及多倍体水平。结果与Ad-Null转染组比较,光镜下Ad-PCSK9转染组中多倍体血管平滑肌细胞的数目显著增加(P<0.01);LSC法检测结果显示,Ad-PCSK9转染组的细胞多倍体水平显著上调并且增殖活性明显下降(P<0.01);β-半乳糖苷酶检测结果显示,PCSK9转染组中SAβG阳性细胞数目显著增加(P<0.01);Western blot法检测结果显示,ApoER2的表达水平随Ad-PCSK9的过表达而显著下调(P<0.01)。LSC法检测结果显示,rhApoER2可以显著抑制Ad-PCSK9诱导的多倍体血管平滑肌细胞形成(P<0.05)。结论PCSK9可通过介导人血管平滑肌细胞ApoER2的降解,促进血管平滑肌细胞多倍体的形成及衰老。

绵羊ApoER2基因克隆及其干扰质粒对睾丸共培养细胞硒蛋白表达的影响

本研究旨在克隆绵羊ApoER2基因,构建ApoER2-siRNA质粒载体,研究ApoER2基因沉默对睾丸共培养细胞SelP和PHGPx表达的影响。利用RT-PCR技术,克隆ApoER2序列,在此基础上构建4种pGPU6/GFP/Neo—ApoER2-siRNA质粒表达载体,利用脂质体将其转染到体外共培养绵羊睾丸细胞中,采用Real—time PCR和Western blotting方法,检测其抑制效应,并研究ApoER2基因沉默对Sel P和PHGPx mRNA表达的影响。本研究成功获得了长度为2 490 bp的绵羊睾丸ApoER2完整编码区序列,共编码892个氨基酸,绵羊ApoER2核苷酸序列与牛的同源性最高,相似性为97.7%。ApoER2-siRNA-1565和ApoER2-siRNA-2567位点重组质粒的干扰效果较好(P<0.01),选取ApoER2-siRNA-2567重组质粒,结果显示转染组Sel P和PHGPx表达量显著降低(P<0.01)。获得了绵羊ApoER2编码区序列和有效抑制该基因表达的2个质粒载体,ApoER2沉默可能影响了睾丸硒蛋白Sel P和PHGPx的表达,为进一步研究ApoER2转运硒机理提供了理论依据。

鹅ApoER2基因克隆及其在卵泡发育过程中的表达模式研究

为研究载脂蛋白E受体2(ApoER2)在鹅卵泡发育过程中的表达模式,本研究克隆了鹅ApoER2基因cDNA部分序列,并用Real-time PCR方法检测其在鹅等级前和等级卵泡颗粒层和膜层中的mRNA表达水平。结果表明:克隆得到的鹅ApoER2 cDNA部分序列长848 bp,编码282个氨基酸,预测的鹅ApoER2部分氨基酸序列有4个低密度脂蛋白受体家族的保守结构域,包括低密度脂蛋白受体重复A类结构域、重复B类结构域、YWTD结构域和钙结合表皮生长因子样结构域;ApoER2在卵泡颗粒层和膜层的表达水平均在F1卵泡处显著性升至最高(P<0.05),在其他等级和等级前卵泡颗粒层均趋于平稳(P>0.05),且在等级卵泡中的表达均高于等级前卵泡,在卵泡膜层中的表达先降低后显著性升高(P<0.05)。总体来看,ApoER2在鹅不同等级卵泡颗粒层的表达水平均远高于膜层。以上结果说明,鹅ApoER2蛋白应该具有转运脂质的功能。相比卵泡膜层,ApoER2主要在颗粒层实现其功能,重点表现在等级卵泡上,这可能与鹅卵黄脂质沉积特点有关。

恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达影响

目的观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响。方法将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激。同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变。另每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化。结果模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩。补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P<0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P<0.01)。结论恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。

鸭极低密度脂蛋白受体和载脂蛋白E受体2在肌肉组织中的发育性表达模式研究

为探索极低密度脂蛋白受体（verylowdensitylipoproteinreceptor，VLDLR）和载脂蛋白E受体2（apolipoproteinEreceptor2，ApoER2）在鸭肌内脂肪性状发育中的作用机制，本研究应用实时荧光定量PCR检测了VLDLR和ApoER2基因在1-8周龄北京鸭胸肌、腿肌、心肌中的表达丰度，分析其在早期生长阶段的发育性变化。结果显示VLDLR和ApoER2在鸭不同肌肉中的表达具有组织特异性。VLDLR基因mRNA丰度在3种肌肉组织中变化较大，且明显呈现上升下降（胸肌）、下降-上升-下降上升（腿肌）及下降-上升下降（心肌）3种模式的变化；ApoER2基因mRNA表达量在胸肌第3周龄时达最高（P〈0．01），在腿肌组织中前6周保持相对较低水平，在后2周迅速上升，且显著高于其余各周（P〈0．01），而在心肌组织中呈上升-下降趋势，且在前2周表达量显著高于其余各周（P〈0．01）。同周龄VLDLR和ApoER2基因mRNA的表达量在不同部位肌肉中表现出明显差异。以上结果说明，VLDLR和ApoER2基因在鸭肌内脂肪性状形成中起到了重要作用，且存在着时空特异性。

Reelin可增强海马神经元的多巴胺D1受体表达

目的研究Reelin对小鼠海马神经元多巴胺D1受体的调控及其是否依赖Reelin受体(ApoER2/VLDLR)发挥调控作用。方法原代分离培养新生C57BL/6J小鼠海马神经元,将培养5 d后的神经元随机分为6组:空白对照组、CR-50组(CR-50),EDTA组(EDTA),Reelin组(Reelin),Reelin拮抗组(Reelin+CR50)和Reelin受体拮抗组(Reelin+EDTA)。分别加入Reelin、CR-50、EDTA进行共培养,其后利用免疫荧光的方法观察Reelin受体ApoER2、VLDLR和多巴胺D1受体在海马神经元上的定位以及各组多巴胺D1受体的变化。结果 (1)Reelin受体ApoER2、VLDLR均与多巴胺D1受体在海马神经元上共定位;(2)Reelin拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.215±0.09)较Reelin组(0.663±0.15)减弱(P<0.01);(3)Reelin受体拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.687±0.11)与Reelin组(0.666±0.15)无明显差异(P>0.05)。结论Reelin可增强小鼠海马神经元上的多巴胺D1受体的表达,Reelin上调多巴胺D1受体的作用并不是依赖Reelin的经典受体ApoER2、VLDLR,其调控机制有待进一步研究。

Reelin蛋白在阿尔茨海默病中的研究进展

Reelin作为分泌型基质外糖蛋白,在神经发育早期以及成熟后的大脑中都有重要作用。近年来研究表明,包括阿尔茨海默病、精神分裂症、双相情感障碍等在内的多种神经精神疾病中,都出现了 Reelin蛋白的异常表达。该文主要对Reelin蛋白的结构功能及所属通路在阿尔茨海默病发病机制中的作用进行综述。

亚慢性铝染毒对转人载脂蛋白E4基因小鼠β-淀粉样蛋白含量及低密度脂蛋白家族的影响

[背景]铝是阿尔兹海默病的重要环境因素,载脂蛋白E4基因(ApoE4)是阿尔兹海默病的重要遗传因素。近年来铝和ApoE4基因如何导致学习记忆损伤引起了广泛关注。铝和ApoE4基因分别对β-淀粉样蛋白(Aβ)清除和神经元突触可塑性的影响有待进一步研究。[目的]探究铝与ApoE4基因联合作用对小鼠Aβ及载脂蛋白E受体2(ApoER2)等低密度脂蛋白家族含量的影响。[方法]野生型和转人ApoE4基因型的C57BL/6小鼠各16只,每种类型小鼠随机分为染铝组[40μmol·kg^-1Al(mal)3]、对照组(生理盐水),每组8只。染毒方式为腹腔注射,每注射5d停止2d,染毒时间为60d。采用Morris水迷宫试验检测小鼠学习记忆能力,以高尔基染色检测海马CA1区突触可塑性,采用Western blotting法检测海马组织中ApoER2、低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP1)、极低密度脂蛋白受体(VLDLRs)、淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白表达情况,用Elisa方法检测海马中Aβ40和Aβ42蛋白含量。[结果]Morris水迷宫试验结果显示野生型小鼠对照组和染铝组、转ApoE4基因型小鼠对照组和染铝组染毒结束后第1天逃避潜伏期分别为(48.56±18.31)、(46.77±19.91)、(45.13±19.07)、(46.81±18.04)s,至染毒结束后第5天分别下降至(19.43±13.28)、(27.03±17.47)、(21.27±20.17)、(30.06±20.02)s。方差分析显示,染毒结束后第4、5天各组逃避潜伏期差异有统计学意义(P<0.05);同类型小鼠对照组低于染铝组,同处理条件下野生型小鼠低于转基因型小鼠,但基因类型和铝之间交互作用无统计学意义(P>0.05)。野生型小鼠对照组和染铝组、转基因型小鼠对照组和染铝组穿越平台次数分别为(2.86±0.99)、(1.88±0.64)、(2.63±0.77)、(0.50±0.53)次,基因类型和铝之间交互作用有统计学意义(P<0.05)。野生型小鼠对照组和染铝组、转基因型小鼠对照组和染铝组树突棘密度分别为每微米(0.57±0.06)、(0.34±0.05)、(0.39±0.05)、(0.26±0.04)个,基因类型和铝之间交互作用有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,染铝与基因类型对ApoER2和LRP1的蛋白表达存在交互作用(P<0.05),且均会导致ApoER2和LRP1蛋白表达下降,对APP和VLDLRs的蛋白表达无交互作用(P<0.05)。Elisa检测结果表明,β40蛋白表达在各组间差异无统计学意义(P>0.05);而Aβ42蛋白表达在各组间差异有统计学意义,且基因类型和铝之间存在交互作用(P<0.05)。[结论]铝和ApoE4基因对小鼠学习记忆能力存在一定程度的影响,尤其是空间学习记忆能力。铝和ApoE4基因对海马CA1区突触可塑性可能存在交互作用,表明铝和ApoE4基因联合作用可能对突触可塑性造成影响;铝和ApoE4基因对Aβ含量变化可能存在交互作用,尤其是Aβ42含量的变化,其原因可能是铝和ApoE4基因联合作用导致低密度脂蛋白家族中ApoER2和LRP1降低。