APOBEC-1和NF-1在上皮性卵巢癌的作用机制及临床意义

目的研究载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽-1(Apolipoprotein B m RNA editing enzyme,catalytic polypeptide 1,APOBEC-1)和Ⅰ型神经纤维瘤蛋白(Neurofibromatosis type 1,NF-1)在上皮性卵巢癌中的作用机制及其临床意义。方法收集2017年6月至2019年7月在我院进行手术治疗卵巢癌患者组织,包括上皮性卵巢癌患者组织(Epithelial ovarian cancer,EOC)50例、低度潜能恶性卵巢肿瘤患者组织(Low-potential malignant ovarian tumor,LMO)15例、卵巢良性肿瘤(Benign ovarian tumor,BOT)患者组织30例及正常对照组(Normal)卵巢组织40例。免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测患者组织和细胞中APOBEC-1/NF-1的表达;ELISA检测患者外周血中APOBEC-1和NF-1的表达;分析APOBEC-1/NF-1的表达与患者年龄、临床分期、病理分级、组织学分类、淋巴结转移之间的相关性;Trans-well实验观察沉默APOBEC-1表达A2780细胞迁移和侵袭能力的变化。结果EOC患者组织中APOBEC-1蛋白水平和mRNA水平表达显著高于其他患者组织,而NF-1蛋白水平和mRNA水平表达明显低于其他患者组织(P<0.05)。EOC患者血清APOBEC-1表达显著高于其他组,NF-1明显低于其他组(P<0.05)。EOC患者组织中APOBEC-1/NF-1的表达与患者的病理分级、淋巴结转移相关(P<0.05)。沉默A2780细胞APOBEC-1表达显著抑制其迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论APOBEC-1可能通过降低NF-1的表达参与卵巢的发生发展。

基于APOBEC-1底物基因三区一位的结构筛选新的底物基因

使用生物信息学软件从APOBEC-1编辑底物编码基因序列中筛选出B-Raf基因,在生物信息数据库中获得了B-Raf的一级结构、模体、三维结构信息,分析B-Raf蛋白功能。

Apobec-1加重神经源性细胞缺氧损伤并上调COX-2的表达

目的:研究三种神经源性细胞中,缺氧条件下Apobec-1的表达与COX-2表达水平及细胞缺血损伤程度之间的关系。方法:对SH-SY5Y细胞,NG108-15细胞和PC12细胞分别施以无氧-无糖刺激,进而检测刺激前后细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,以及Apobec-1的表达量,以研究缺氧对Apobec-1表达的影响。在这三种细胞中分别过表达Apobec-1,检测细胞中COX-2蛋白及m RNA的水平。结果:1在三种神经源性细胞中,随着无氧-无糖刺激时间的延长,细胞损伤程度加重,同时Apobec-1和ACF的表达量升高。2过表达Apobec-1可加重无氧-无糖刺激导致的神经细胞损伤,具体表现为细胞活力降低及LDH释放量增加。3Apobec-1可在此三种神经源性细胞中提高COX-2蛋白及m RNA的水平。结论:Apobec-1在神经源性细胞中与细胞缺氧损伤程度及COX-2表达密切相关。

肾病综合征兔肝脏获得性表达apobec-1降脂效应及可能机制

目的观察肝脏获得性表达apobec-1对肾病综合征（NS）兔血脂代谢及肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）、低密度脂蛋白受体相关蛋白（LRP）表达的影响，探讨Ns兔apobec-1降脂效应及其可能机制。方法30只健康雄性普通级新西兰兔随机分为假手术组、Ns组、apobec-1治疗组，每组10只。Ns组、apobec-1治疗组适应性喂养1周后行左肾切除术，术后1周耳缘静脉注射阿霉素（4mg／kg）构建Ns模型；术后11周apobec-1治疗组耳缘静脉注射apobec-1重组腺病毒（1×10^13病毒颗粒／kg）。术后12周处死所有兔，并摘除右侧肾脏和肝脏，留取血液及24h尿液，检测24h尿蛋白（24UPr）、清蛋白（A1b）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血脂等指标，HE染色观察肾脏病理，Western blot检测肝脏LDLR、LRP蛋白表达水平。结果1．假手术组、Ns组及apobec．1治疗组3组之间比较显示24UPr（F=42．778，P=0．000）、Alb（F=3．819，P=0．034）、BUN（F=6．562，P=0．005）、Cr（F=16．076，P=0．000）、总胆固醇（TC，F=17．531，P=0．000）、三酰甘油（TG，F=6．192，P=0．006）、极低密度脂蛋白（VLDL—C，F=6．192，P=0．006）、低密度脂蛋白（LDL．C，F=34．924，P=0．000）、载脂蛋白B100（ApoB100，F=5．180，P=0．012）、载脂蛋白B48（ApoB48，F=6．161，P=0．006）差异均有统计学意义。2．与假手术组比较，Ns组24UPr、BUN、Cr、TC、TG、VLDL—C、LDL—C、ApoB100明显升高，而Alb明显降低，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。3．与Ns组比较，apobec-1治疗组Tc、TG、VLDL—C、LDL．C、ApoB100、ApoB48明显降低，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。4．与假手术组比较，apobec．1治疗组24UPr、BUN、Cr明显升高，而Alb、ApoB48明显降低，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。5．Western blot结果显示3组之间LRP（F=44．180，P=0．000）、LDLR（F=63．141，P=0．000）差异具有统计学意义，与假手术组、Ns组比较，apobec．1治疗组肝脏LDLR蛋白表达明显下调（P〈0．01、0．05）；LRP蛋白表达明显上调（P均〈0．01）。结论NS肝脏获得性表达apobec-1可通过上调LRP，加速ApoB48-脂蛋白的清除，进而起到一定降脂效应。

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达

目的构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达。方法提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定。Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况。划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响。结果酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05)。结论成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒。A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关。

载脂蛋白B RNA编辑机制概述

载脂蛋白B(apoB)是负责脂类转运的脂蛋白中的蛋白组成部分,在人体内主要以apoB-100和apoB-48两种形式存在。apoB-48是apoB-100mRNA转录后经RNA编辑产生的。包含apoB-48的脂蛋白不会变成致动脉粥样硬化的低密度脂蛋白。编辑过程涉及一系列蛋白质对单个碱基进行精确的脱氨基修饰,受多种因素的调节。这些蛋白质的精确组成及各自在编辑过程中的作用尚不清楚。对apoBmRNA编辑机制的理解有助于为脂蛋白相关疾病治疗提供理论依据。

RNA编辑研究进展

RNA编辑是指转录后成熟的RNA分子的修饰和加工,使得RNA所携带的遗传信息发生改变的过程。迄今为止,在真核生物的tRNAr、RNA和mRNA中都发现了RNA编辑的现象。RNA编辑有核苷的插入或删除编辑和碱基替换编辑两种类型。这种改变影响了基因的表达,生成不同的氨基酸和新的开放读码框。编辑可在多种水平被调节,且与人类疾病有一定的相关性。

载脂蛋白B编辑催化多肽-1的研究进展

载脂蛋白B编辑催化多肽-1(Apobec-1)是催化ApoB mRNA编辑的编辑酶复合物的主要催化成份,对它的研究有助于对mRNA编辑的理解。本文综述了近年来国外有关Apobec-1的最新研究进展,对Apobec-1的蛋白质结构与编码基因、功能与表达调控等作了较全面的介绍。