基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及机制研究

目的探讨铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及作用机制。方法用高脂饲料喂养建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,随机分别给予生理盐水(10 mL/kg)、麝香保心丸溶液(20 mg/kg)、低剂量铁皮石斛液(10 g/kg)、高剂量铁皮石斛液(30 g/kg)为模型组、阳性药物组、低剂量组和高剂量组,普通饲料喂养ApoE-/-小鼠为对照组给予生理盐水(10 mL/kg),每组8只。治疗4周后,苏木精-伊红染色观察小鼠胸主动脉组织病理学改变;检测小鼠血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;利用荧光定量PCR技术检测胸主动脉中胆固醇外转运蛋白ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达情况。结果与对照组比较,模型组动脉内膜脂质斑块形成,斑块内有菱形胆固醇结晶,伴炎性细胞浸润和大量泡沫细胞聚集。与模型组比较,阳性药物组、低剂量组和高剂量组小鼠胸主动脉的泡沫细胞沉积减少,动脉粥样硬化病变程度减轻。与对照组比较,模型组TG、TC、LDL-C水平高、HDL-C水平低,ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、低剂量组和高剂量组TG和TC水平降低,HDL-C水平升高;阳性药组、高剂量组ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁皮石斛可改善ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的血脂水平,减轻动脉粥样硬化小鼠的动脉病变程度,可能与影响ABCA1、ABCG1和PPARγ的表达有关。

基于Wnt/β-catenin通路探讨通心络胶囊对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠炎症水平的影响

目的探究通心络胶囊对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其通过Wnt/β-catenin信号通路产生的作用机制。方法将24只ApoE-/-小鼠随机分为正常饮食组(n=6)及高脂饮食组(n=18)。高脂饮食组喂养8周后,随机分为阿托伐他汀组(n=6)、通心络胶囊组(n=6)、模型组(n=6),并分别给予阿托伐他汀4.8 mg/kg、通心络胶囊超微粉1.5 g/kg以及同体积的生理盐水,每日1次,持续8周。末次给药后禁食12 h,收集各组小鼠主动脉组织进行苏木素-伊红(HE)及油红O染色,观察主动脉斑块情况;收集小鼠血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting)和实时荧光定量聚合物酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白及基因表达量的变化。结果与正常组相比较,模型组小鼠的斑块面积明显增加,血清中的炎症因子TNF-α和IL-6含量增加。与模型组相比较,通心络胶囊能够明显降低ApoE-/-小鼠粥样硬化斑块面积,降低血清中TNF-α和IL-6含量,降低主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达和基因水平。结论通心络胶囊可降低ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠血清中炎症因子表达,降低斑块面积,其机制可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

目的从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)进程。方法ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养,其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周,对照组小鼠注射等体积无菌PBS,其余组腹腔注射10μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行,第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积;生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平;HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积;qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达;Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。结果与模型组相比,养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P<0.01),降低TG、LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C水平(P<0.05),降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P<0.05,P<0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),下调血清IL-6水平(P<0.05),上调TGF-β1水平(P<0.05)。与模型组比较,各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平;养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt3b mRNA(P<0.001)和Dnmt3a蛋白(P<0.05)表达,升高TGF-β1水平(P<0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P<0.05),主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P<0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05),增加TGF-β1水平(P<0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05)。结论养阴活血方通过调节血脂,降低DNA甲基化酶Dnmts的表达,改善炎症水平,从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。

ApoE-/-小鼠在中医抗动脉粥样硬化研究中的应用及进展

在全球范围内,心血管疾病已成为威胁人类健康的“头号杀手”,而动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病共同的病理生理基础,已成为欧美国家第一大死亡原因;在中国,随着经济水平及生活方式的改变,其发病率也呈逐年上升趋势。ApoE-/-小鼠由美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱纳大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除技术于1992年培育成功。ApoE-/-小鼠是动脉粥样硬化研究的经典动物模型,可在自然膳食的情况下形成严重的高脂血症,并自发形成纤维斑块和复合斑块,病理学改变与人类极为相似,因而被广泛应用于中医抗AS的研究。

木犀草素改善高脂诱导的ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化作用研究

目的:探讨木犀草素对高脂诱导的Apo E-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化的改善作用。方法:采用高脂饲料喂养诱导非酒精性脂肪肝和动脉粥样硬化模型,木犀草素低、高剂量(70,140 mg/kg)灌胃给药,每天1次,连续12周。给药结束后,检测血清血脂四项、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),肝脏匀浆检测谷丙转氨酶、天冬氨酸氨基转移酶(AST);观察肝脏组织HE染色和油红O染色以及主动脉根部的油红O染色;通过TUNEL试验检测肝脏细胞的凋亡;应用免疫组化检测肝脏bcl-2和caspase-3的表达。结果:木犀草素能够使肝脏ALT、AST水平降低;提高血清中SOD、GSH-Px,降低血清MDA的表达;改善肝脏中脂质堆积以及脂肪泡的形成,减少主动脉根部的脂质堆积;降低TUNEL阳性细胞数,以及提高肝脏中bcl-2和减少caspase-3的表达。结论:本研究表明木犀草素可通过减少氧化损伤来改善高脂诱导的Apo E-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化。

miR-126在ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达

目的观察微小RNA(miR)-126及靶基因血管细胞粘附分子1(VCAM-1)在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达,探讨miR-126与动脉粥样硬化斑块形成的关系。方法取8周龄Apo E-/-小鼠24只,随机分为对照组(假手术+普通饮食)、模型组(颈动脉套管术+高脂饮食)各12只。术后第8周末检测血浆中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平,HE染色观察颈总动脉斑块面积/血管面积,荧光定量PCR(RT-PCR)检测斑块内miR-126、VCAM-1 mRNA水平的表达,Western blot检测VCAM-1蛋白水平的表达。结果与对照组相比,模型组血脂水平明显升高(P<0.05);模型组的颈动脉粥样硬化斑块面积/血管面积明显大于对照组(P<0.01);miR-126表达水平在模型组明显低于对照组(P<0.01);VCAM-1的mRNA及蛋白的表达在模型组明显高于对照组(P<0.01)。结论 miR-126在颈动脉粥样硬化斑块中的表达下调可能在斑块形成过程中发挥重要作用。

一种新型apoE-/-小鼠动脉粥样硬化和心肌梗死双模型的建立

目的对apoE-/-小鼠给予高脂饮食和开胸结扎左前降支(LAD)干预,探索建立一种新型同一生物体内动脉粥样硬化(AS)和急性心肌梗死(AMI)并存的小鼠双模型。方法选择30只雄性6周龄apoE-/-小鼠,高脂饮食饲养;5只普通饮食饲养作为对照。第12周时异氟烷气体麻醉下,开胸采用挤压法暴露心脏,直视下快速结扎LAD中段,体表心电图记录心电学变化;继续饲养3周后处死动物并取材,评估心肌梗死和动脉粥样硬化的病理改变。采用心肌Evans′blue-TTC染色观察心肌梗死范围,Masson染色观察心肌梗死病理变化;主动脉血管段行油红O染色及HE染色,观察动脉粥样硬化斑块形成。结果术中见结扎点下方心肌变白,心电图提示ST段和J点抬高,符合急性心肌梗死临床特征。心肌Evans′blue-TTC染色可见明显的白色梗死区域,Masson染色可见心肌梗死区凝固性坏死伴大量纤维组织形成,符合心肌梗死的典型病理改变。直视条件下主动脉血管段可见大量斑块形成,油红O染色见明显橘红色染色区域,HE染色可见斑块内泡沫细胞脂质沉积,证实apoE-/-小鼠结合高脂饮食可形成明显的动脉粥样硬化病理改变。结论首次报道一种新型apoE-/-小鼠动脉粥样硬化和心肌梗死双模型的建立,两种病理状态的并存更为接近临床心血管疾病的发病特点,为冠心病发病机制的研究和药物干预评估提供平台。

雷公藤内酯醇对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用研究

目的研究不同剂量雷公藤内酯醇对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的治疗效果。方法将4只10周龄雄性ApoE-/-小鼠作为模型组,4只10周龄雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,适应性喂养1周后处死,取主动脉标本做HE染色。另将10周龄雄性ApoE-/-小鼠32只作为实验组,按每天每千克体重给药量随机分为4组:50μg/(kg·d)、75μg/(kg·d)组、100μg/(kg·d)、空白对照组,每组8只。10周龄雄性C57BL/6J小鼠8只作为阴性对照组。给药3周后处死小鼠,取主动脉标本做HE染色;收集血清,测定IL-10、IL-12含量。结果 (1)在11周龄时两组主动脉HE染色Roberts&Thompson方法评分分别为:模型组[(5.250±0.500)分]>对照组[(0.500±0.577)分],差异有统计学意义。(2)经不同浓度雷公藤内酯醇处理3周后,各组主动脉HE染色Roberts&Thompson方法评分分别为:空白对照组[(6.500±0.189)分]>100μg/(kg·d)组[(4.625±0.183)分]>50μg/(kg·d)组[(3.375±0.183)分]>75μg/(kg·d)组[(1.375±0.183)分]>阴性对照组[(0.000±0.000)分],差异有统计学意义。(3)75μg/(kg·d)组血清中IL-10浓度升高最明显,与各组比较差异均有统计学意义(P<0.001);各组血清中IL-12浓度均较空白对照组降低,其中75μg/(kg·d)组降低最明显,两者之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)在11周龄时,ApoE-/-小鼠能形成AS模型。(2)不同浓度雷公藤内酯醇处理3周后,ApoE-/-小鼠AS病变有不同程度缓解,其中75μg/(kg·d)浓度下效果最佳。(3)雷公藤内酯醇能够上调IL-10、下调IL-12的表达水平,抑制炎症反应,减轻粥样斑块的形成,此可能为免疫抑制剂抗动脉粥样硬化的机制之一。

新塔花对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中TLR4/NF-κb信号通路的影响

目的观察新塔花水提物抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制并对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κb(NF-κb)信号通路及相关细胞因子的影响并探讨其机制。方法 40只8周龄ApoE小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组[3 mg/(kg·d),溶于0.5 mL蒸馏水]、新塔花水提物高剂量组[32 g/(kg·d)]、新塔花水提物低剂量组[9 g/(kg·d)],每组10只;同品系C57小鼠10只为空白组。所有小鼠给予高脂饲料普通环境饲养。适应性喂养1周后,实验组给予一定剂量药物灌胃,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,每周根据小鼠体质量变化调整灌胃剂量。12周后处死小鼠,采集血清及主动脉。胸主动脉用于苏木素伊红(HE)染色;血清用于酶联免疫双抗夹心(ELISA)法和血脂4项检测:三酰甘油(TAG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);升主动脉用于免疫组织化学(IHC)法检测TLR4、NF-κb蛋白水平。结果血脂检测他汀组、高剂量组、低剂量组具有明显的降脂效果(P <0.01),高剂量组和低剂量组具有一定的降低胆固醇效果(P <0.05);ELISA见模型组细胞黏附因子(ICAM)比空白组明显升高(P <0.01),他汀组、高剂量组、低剂量组低于模型组(P <0.01);模型组基质金属蛋白酶-9(MMP-9)较空白组明显升高(P <0.01),他汀组、高剂量组、低剂量组低于模型组(P <0.01);免疫组化(IHC)结果模型组高于空白组免疫组化分析模型组TLR4、NF-κb表达水平均高于空白组(P <0.01),他汀组、高剂量组和低剂量组TLR4、NF-κb表达水平均低于模型组(P <0.01)。结论新塔花具有预防AS的作用,其机制可能与调控TLR4/NF-κb信号通路有关。

TR3受体激动剂6-mercaptopurine对糖尿病ApoE-/-小鼠NF-κB p65/CylinD1通路影响及其与抗动脉硬化关系

目的:观察TR3受体激动剂(6-mercaptopurine,6-MP)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE-/-)敲除糖尿病小鼠糖脂代谢及NF-κBp65/CylinD1通路的影响及其与抗动脉硬化的关系,探讨TR3受体在改善糖尿病动脉粥样硬化可能机制。方法:40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为4组:ApoE^-/-组、STZ-ApoE^-/-组、STZ-ApoE^-/-+6-MP5(5mg·kg^-1·d^-1)组、STZ-ApoE^-/-+6-MP10(10mg·kg^-1·d^-1)组,每组10只;6-MP腹腔注射法给药,每天1次,连续8周;STZ60mg/kg腹腔注射ApoE^-/-小鼠建立糖尿病动脉粥样硬化模型,血糖试纸法测血糖水平;酶法或匀相法测血脂水平;蛋白免疫印迹试验(Western-blotting)测胸主动脉组织NF-κBp65/CylinD1蛋白水平;油红O染色观察胸主动脉内膜动脉脂质沉积;HE染色测胸主动脉内膜粥样斑块面积。结果:与ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-组血糖及血清TG、TCHO、LDL-C均显著增高(P<0.05);TR3受体激动剂6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE^-/-小鼠血糖、血脂水平,与STZ-ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组血糖、TG、LDL-C、TC均显著降低(P<0.05),与ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-组胸主动脉NF-κB p65、CylinD1蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE^-/-小鼠胸主动脉NF-κB p65/CylinD1蛋白表达,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组NF-κBp65/CylinD1蛋白表达水平均明显低于STZ-ApoE^-/-组(P<0.05);STZ-ApoE^-/-+6-MP10组与STZ-ApoE^-/-+6-MP5组之间胸主动脉NF-κBp65/CylinD1蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。油红O染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性抑制STZ-ApoE^-/-小鼠胸主动脉内膜脂质沉积;HE染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性降低STZ-ApoE^-/-小鼠胸主动脉内膜斑块面积,减少斑块内部有空洞(脂质)形成,抑制斑块周围组织及斑块基底部平滑肌层增生,与STZ-ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组胸主动脉内膜斑块面积明显减小(P<0.05),STZ-ApoE^-/-6-MP10组斑块面积进一步减小(P<0.01)。结论:TR3激动剂6-MP可明显降低糖尿病ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的形成,其机制可能与其改善糖脂代谢,抑制NF-κBp65/CylinD1信号通路有关。

青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的探讨青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化以及炎症因子的影响。方法将20只ApoE-/-基因敲除小鼠分为青蒿素组和PBS处理组,每组10只,经高脂喂养8周,与对照组小鼠(C57BL/6J标准饮食小鼠,10只)比较,通过血管大体油红O染色评价斑块面积;HE染色观察病变形态及血浆中炎症因子的变化。结果与对照组比较,PBS处理组及青蒿素组均可见动脉硬化斑块,炎症因子水平升高。青蒿素组的动脉硬化程度及炎症因子水平均明显低于PBS处理组。结论青蒿素可以改善ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展。

调脂方对ApoE-/-小鼠动脉斑块及端粒酶—端粒系统的影响

目的:观察调脂方对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠外周血白细胞端粒、端粒酶以及主动脉病变、血脂、炎症指标的影响,探讨其抗AS作用机制。方法: 30只8周龄雄性ApoE -/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、中药干预组,每组10只。另取同周龄雄性C57BL/6小鼠10只做空白对照组。采用高脂饲料喂养方法建立AS模型,空白对照组、模型组小鼠用蒸馏水灌胃,中药干预组灌服中药“调脂方”,阿托伐他汀组阿托伐他汀钙灌胃给药,持续12周。运用生化仪检测脂代谢指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及炎症指标:超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6);采用油红“O”染色,观察动脉斑块形成及脂质堆积程度;荧光定量聚合酶链反应法检测外周血白细胞及血管细胞的端粒长度及端粒酶活性。结果:与正常空白对照组比较,模型组血清脂代谢指标和炎症指标均明显升高( P <0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组和中药干预组均显著降低TC、LDL、HDL、hs-CRP( P <0.01),TG、IL-6( P <0.05);与阿托伐他汀组比较,中药干预组降低TC的作用较弱( P <0.05),而中药干预组在降低TG程度上优于阿托伐他汀组( P <0.05),在降低LDL、hs-CRP、IL-6及升高HDL上无明显差异。主动脉病理油红“O”染色显示模型组AS程度明显,中药干预组和阿托伐他汀组AS程度较模型组明显改善,阿托伐他汀组作用优于中药干预组。模型组外周血白细胞端粒长度明显短于空白对照组、外周血白细胞端粒酶活性低于空白对照组( P <0.05)。与空白对照组比较,中药干预组端粒酶活性、阿托伐他汀组端粒长度、端粒酶活性明显提高( P <0.01),中药干预组与阿托伐他汀组之间外周血白细胞端粒长度及端粒酶活性则无明显统计学差异。结论:调脂方具有抗小鼠AS作用,其机制可能与改善脂代谢、炎症指标及调控端粒长度及端粒酶活性相关。

ApN/TNF-α信号途径在有氧运动防治ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化过程中的抗炎症作用

目的观察有氧运动对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的防治效果,探讨脂联素(ApN)/肿瘤坏死因子(TNF)-α信号途径的抗炎症作用。方法 8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组(C,10只)和运动组(E,10只)。14 w运动干预结束后取材观察主动脉管壁的病理变化,检测脂肪组织ApN mRNA表达和血清ApN水平及主动脉脂联素受体(AdipoR)1、TNF-α蛋白表达水平。结果 C组小鼠主动脉血管壁纤维板断裂,可见大量泡沫细胞浸润和纤维斑块,E组小鼠较C组主动脉病变有所延缓;E组小鼠ApN mRNA表达及血清水平显著高于C组(P<0.05);E组小鼠主动脉AdipoR1蛋白表达显著高于C组(P<0.05),主动脉TNF-α蛋白表达显著低于C组(P<0.05)。结论有氧运动通过增强ApoE-/-小鼠ApN信号途径,抑制主动脉TNF-α蛋白表达,发挥防治AS的抗炎症作用。

BMSC治疗ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠模型的初步研究

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对ApoE^(-/-)缺陷小鼠动脉粥样硬化(AS)的治疗作用。方法 ApoE^(-/-)缺陷小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,同时设置正常对照组。实验组、阴性对照组于9 w龄时开始分别经尾静脉注射BMSC悬液200μl(1×10~5个BMSC)和同体积生理盐水,正常对照组和空白对照组不做处理。小鼠分别于12 w时和BMSC注射后4 w,采用全自动生化分析仪测定各组血液总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,油红O染色观察主动脉弓斑块形成情况。结果空白对照组与正常对照组小鼠相比,TC、TG、LDL-C明显升高(P<0.05),主动脉弓油红O染色可见空白对照组主动脉弓出现斑块。BMSC治疗后,实验组的TC、TG、LDL-C较阴性对照组明显下降(P<0.05),油红染色发现实验组主动脉弓斑块斑块数量及面积均减少。结论 ApoE^(-/-)缺陷小鼠高脂饮食至12 w龄时出现典型动脉粥样硬化(AS)临床表征,而同种异体BMSC具有一定降低血脂、抑制主动脉弓内斑块形成的作用。

丹芪通脉破壁饮片颗粒对apoE-/-小鼠主动脉粥样硬化影响的实验研究

目的 :观察丹芪通脉破壁饮片颗粒对apo E-/-小鼠血脂及氧化应激指标的影响,初步探讨其对主动脉粥样硬化的作用机制。方法:将40只apo E-/-小鼠以高脂饲料喂养8周构建动脉粥样硬化小鼠模型,随机分为模型组、饮片组、低浓度颗粒组、中浓度颗粒组、高浓度颗粒组,每组8只,另取8只C57BL/6雄性小鼠为空白对照组。饮片组以丹芪饮片煎剂12 g/(kg·d)灌胃,低浓度颗粒组、中浓度颗粒组及高浓度颗粒组分别以1.5、3、6 g/(kg·d)浓度灌胃丹芪通脉破壁饮片颗粒,模型组和空白对照组灌胃等量生理盐水。空白对照组以普通饲料喂养,其余各组小鼠均以高脂高胆固醇饲料喂养。ELISA法检测血清血脂四项,检测主动脉组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,HE染色观察小鼠胸主动脉管腔内粥样斑块。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠从第4周开始体质量显著升高,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均显著升高,小鼠主动脉组织SOD和NO浓度显著下降,MDA浓度显著升高;各给药组小鼠TC、TG、LDL-C及HDL-C水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,从第4周开始,饮片组及各浓度颗粒组小鼠体质量显著减少,饮片组、中浓度颗粒组、高浓度颗粒组TC、TG、LDL-C、MDA水平均显著下降,主动脉组织SOD和NO浓度均显著升高,低浓度颗粒组SOD和NO浓度均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:丹芪饮片煎剂及丹芪通脉破壁饮片颗粒均具有改善血脂谱、减轻氧化应激及抗动脉粥样硬化等作用,疗效一致。

橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制

目的探讨橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制。方法40只8周龄apoE-/-小鼠随机分为4组,即普通饮食组(NC)、动脉粥样硬化高脂饮食组(WD)、橙皮素高剂量(100 mg/kg)组(H-HES)、橙皮素低剂量(50 mg/kg)组(L-HES),各10只。采用灌胃方式给予橙皮素,根据每只小鼠体质量给予不同的剂量,12周后处死小鼠前眶静脉采血,全自动生化分析仪检测血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇浓度,并采用ELISA试剂盒检测apoE-/-小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,麻醉小鼠后左心室灌注多聚甲醛固定,主动脉树油红O染色观察斑块百分比,同时取材主动脉窦采用免疫荧光技术观察斑块巨噬细胞的浸润情况。结果与NC组比较,WD组、H-HES组及L-HES组apoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度显著升高,HDL-C显著降低(P<0.05),且H-HES及L-HES组TC、TG、LDL-C的水平显著低于WD组(P<0.05)。高脂高胆固醇饲料喂养12周后,WD组的主动脉树动脉粥样硬化病变非常显著,其主动脉树的AS斑块面积百分比为(0.1430±0.0604),而H-HES组、L-HES组的主动脉树AS的面积百分比分别为(0.0404±0.0175)、(0.0252±0.0195),与WD组相比,H-HES组、L-HES组主动脉树AS病变显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。WD组的主动脉窦动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞浸润增加,经过橙皮素12周治疗后,H-HES和L-HES组主动脉窦斑块部位CD68巨噬细胞浸润减少(P<0.05)。WD组apoE-/-小鼠血清MCP-1和TNF-α的浓度分别为(807.33±122.46)、(9.87±1.75)μg/L高于H-HES及L-HES组的(365.83±66.31)、(6.34±0.65)μg/L及(405.74±46.21)、(9.48±0.82)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论橙皮素有明显的调脂降血脂作用,同时具有抗动脉粥样硬化效果,其主要通过抗炎发挥药理作用。

养阴活血方对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化的影响

探讨养阴活血方(YHF)对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。小鼠给予高脂饮食诱导AS,YHF低剂量(18 g/kg,以生药计)、YHF高剂量(36 g/kg,以生药计)灌胃给药20周进行干预。油红O脂肪染色法观测主动脉斑块面积变化;生化分析血脂水平;流式细胞术检测外周血Treg、Th17比例;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化(IHC)及Western blot检测主动脉Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达。分离小鼠脾脏CD4+T细胞并用anti-CD3/CD28活化,再经LPS刺激和YHF干预后,qRT-PCR与免疫荧光(IF)检测CD4+T细胞Foxp3、RORγt表达。结果显示,YHF显著减小主动脉斑块面积,降低血脂水平,增加Treg/Th17比值;上调主动脉Foxp3表达而下调RORγt表达;且在体外上调CD4+T细胞Foxp3表达而下调RORγt表达。本研究表明,YHF可以调节高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17比例失衡,减弱LPS对CD4+T细胞的炎性刺激影响,从而改善AS。

补阳还五汤抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用与机制研究

目的探究补五还阳汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的抗击作用与机制研究。方法构建ApoE-/-动脉粥样硬化模型,并分为造模组、观察组A和观察组B各5只,分别每天给予高脂饮食、高脂饮食+补五还阳汤5 g/kg、补五还阳汤15 g/kg共12周,并用C57BL/6J-12小鼠5只作为空白对照进行正常饮食,对比4组小鼠的体质量、血脂、炎性因子的水平。结果给药前4组小鼠体质量并无明显差异(P<0.05),随着时间增加,各组小鼠体质量均明显增大,对比给药12周后各组小鼠的体质量,发现造模组和观察组小鼠体质量明显低于空白对照组(P<0.05),而观察组A小鼠体质量明显低于造模组小鼠,观察组A与观察组B小鼠体质量并无明显的差异(P>0.05);造模组小鼠的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平明显高于空白对照组小鼠(t=5.274、5.101、4.763、4.856,P<0.05),而高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白(ApoA-I)显著低于空白对照组小鼠(t=5.924、5.806,P<0.05);观察组A小鼠的TG、TC、LDL-C、ox-LDL水平明显低于造模组小鼠(t=6.283、5.934、5.553,P<0.05),而HDL-C、ApoA-I显著高于造模组小鼠(t=4.683.5.271,P<0.05),而观察组A与观察组B小鼠并无明显差异(P>0.05);造模组小鼠血清中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)、单核细胞趋化活性蛋白1(MCP-1)的含量均明显高于空白对照组小鼠(t=9.238、12.156、7.232、15.681、21.164、11.059、13.068、16.329,P<0.05),而观察组A小鼠以上指标均明显低于造模组小鼠(t=7.435、10.182、6.568、13.143、19.642、10.506、12.306、13.132,P<0.05),观察组A与观察组B并无明显差别(P>0.05);而4组小鼠NF-κB的表达水平并无明显变化。结论补五还阳汤可以降低ApoE-/-小鼠的体质量、血脂水平和炎性因子水平,但对NF-κB无影响。

基于代谢组学探究清血消脂方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的干预作用

目的采用基于氢谱的核磁共振代谢组学( 1 H-nuclear magnetic resonance, 1 H-NMR)技术,从整体代谢网络调控角度阐释化痰活血复方清血消脂方干预ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型的作用机制。方法高脂饮食9周建立ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型,将造模成功的小鼠随机分为3组:模型组、清血消脂方组(4.541 g/kg)、阿托伐他汀钙组(0.003 g/kg),每组15只,另取正常饮食同周龄小鼠15只作为空白对照组。于第9~18周连续给药,给药组每日2次灌胃给药,空白对照组及模型组分别给予等体积的蒸馏水。给药9周后,观察各组小鼠主动脉组织结构及病理改变;采用酶直接法微量测定血脂水平、化学发光微粒子免疫检测法测定血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量;采用 1 H-NMR代谢组学技术对小鼠血浆样本中的内源性物质进行了相对含量测定。结果清血消脂方对高脂饮食诱导的ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型糖脂、氨基酸等代谢紊乱有明确的治疗作用,通过代谢组学及主成分分析可得出,空白对照组与模型组显著分离,清血消脂方组与阿托伐他汀组处于模型组与空白对照组之间,并且向空白对照组靠近。数据分析处理发现其改善ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型的糖脂代谢紊乱以及氨基酸代谢异常与同型半胱氨酸、胆碱/磷脂酰胆碱、氧化三甲胺(trimethylamine-n-oxide,TMAO)、胆汁酸、短链脂肪酸等28个代谢物有关。结论化痰活血复方清血消脂方通过改善ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型体内的糖脂代谢、TMAO、同型半胱氨酸及胆碱/磷脂酰胆碱、胆汁酸、丁酸等代谢产物水平延缓动脉粥样硬化的进展。