老年高血压患者载脂蛋白A-Ⅰ与颈动脉粥样硬化的相关性分析

目的探讨老年高血压患者载脂蛋白A-Ⅰ与颈动脉粥样硬化的相关性,为老年高血压患者的危险因素进行早期干预提供参考依据。方法回顾性分析2022年4月至2023年4月于呼和浩特市第一医院门诊及住院治疗的老年高血压合并颈动脉粥样硬化患者的临床资料,将其作为观察组,另收集同期门诊及住院高血压患者的资料作为对照组。所有研究对象均进行血清载脂蛋白A-Ⅰ及颈血管彩超的检测。比较上述指标的变化情况,并分析老年高血压患者载脂蛋白A-Ⅰ与颈动脉粥样硬化的相关性。结果观察组研究对象载脂蛋白A-Ⅰ水平低于对照组,颈动脉血管彩超检查,观察颈内动脉、颈外动脉、颈总动脉的最大流速(V max)、最小流速(V min)、阻力指数RI、管径、内中膜厚度、斑块的大小、颈动脉狭窄差异均有统计学意义(P<0.05)。结论老年高血压患者载脂蛋白A-Ⅰ水平越低,颈动脉粥样硬化程度水平越高,且载脂蛋白A-Ⅰ与颈血管血流、颈动脉狭窄水平呈显著正相关。临床可应用载脂蛋白A-Ⅰ水平控制作为老年高血压合并颈动脉粥样硬化患者的早期干预指标,有助于延缓老年高血压患者颈动脉粥样硬化的发生,从而降低心脑血管病的发生率、致残率。

鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

血清分泌型卷曲蛋白5载脂蛋白A-Ⅰ载脂蛋白B超敏C反应蛋白在2型糖尿病颈动脉粥样硬化中的应用价值

目的分析血清分泌型卷曲蛋白5(SFRP5)、载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)、载脂蛋白B(ApoB)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)在2型糖尿病(T2DM)颈动脉粥样硬化中的应用价值。方法选取2021年1月至2023年1月郑州大学附属郑州中心医院收治T2DM伴颈动脉粥样硬化患者共43例。另选取43例单纯T2DM患者。回顾性分析2组的血清SFRP5、ApoA-Ⅰ、ApoB、hs-CRP水平。结果观察组患者血清SFRP5为(45±6)pg/ml、ApoA-Ⅰ为(1.13±0.11)g/L低于对照组的(48±6)pg/ml和(1.19±0.12)g/L,(t=2.350,P=0.020;t=2.417,P=0.018)。观察组患者血清ApoB为(1.19±0.16)g/L、hs-CRP为(12.9±3.3)mg/L高于对照组的(1.08±0.13)g/L和(9.6±2.6)mg/L(t=3.499,P=0.001;t=2.417,P=0.018)。患者SFRP5、ApoA-Ⅰ、ApoB、hs-CRP四项指标间均具有相关性(P<0.05)。血清SFRP5、ApoA-Ⅰ、ApoB、hs-CRP及四项指标联合检测在预测T2DM伴颈动脉粥样硬化的ROC曲线下面积分别为0.683、0.653、0.637、0.706、0.657(P=0.004,0.008,0.026,0.001)。结论血清SFRP5、ApoA-Ⅰ、ApoB、hs-CRP在T2DM患者颈动脉粥样硬化诊断中均具有较好的价值。

高密度脂蛋白组分中血浆淀粉样蛋白A与载脂蛋白A-Ⅰ比值在冠心病诊断中的价值

目的：探讨高密度脂蛋白（HDL）组分中血浆淀粉样蛋白A（SAA）与载脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）比值在冠心病诊断中的价值。方法：入选我院冠状动脉造影患者152例，按冠状动脉狭窄程度分为冠心病组77例，对照组75例。密度梯度超速离心法分离提取血浆HDL，酶联免疫吸附法分别检测HDL及血浆中SAA与apoA-Ⅰ的含量。结果：与对照组相比，冠心病组HDL组分中SAA（HDL-SAA）显著升高（P〈0．001），HDL组分中apoA-Ⅰ（HDL—apoA-Ⅰ）显著降低（P〈0．001）。多因素logistic回归分析显示HDL—SAA／HDL—apoA—Ⅰ比值与冠心病风险独立相关（比值比：9．521，95％可信区间：3．345～27．100，P〈0．001）。受试者工作特征曲线分析显示HDL—SAA／HDL—apoA—Ⅰ比值具有中等程度诊断冠心病的能力（曲线下面积：0．712，95％可信区间：0．632～0．793，P〈0．001），最佳诊断临界点为3．27。血浆中SAA／apoA—Ⅰ比值与HDL-SAA／HDL—apoA-Ⅰ比值呈显著正相关（r=0．857，P〈0．001），诊断冠心病的能力相似（曲线下面积：0．676，95％可信区间：0．591～0．761，P〈0．001），诊断的最佳临界点为8.3。

载脂蛋白A-Ⅰ通过PKA信号途径影响ABCA1的表达与功能

以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察载脂蛋白A-Ⅰ与三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)的相互作用,并探讨它们相互作用的机制,以便了解载脂蛋白A-Ⅰ和ABCA1在动脉粥样硬化发生发展中的作用.THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经各种因素处理后,采用油红“O”染色,观察细胞内的脂滴,运用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹分析法分别检测ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白质的水平.实验结果显示,载脂蛋白A-Ⅰ和腺苷酸环化酶激动剂Forskolin(FRK)引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯减少,而腺苷酸环化酶抑制剂SQ-22536引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯增加.载脂蛋白A-Ⅰ引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平和细胞内胆固醇流出增加.FRK引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平和细胞内胆固醇流出呈时间和浓度依赖性增加.SQ-22536引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平和细胞内胆固醇流出减少.结果提示,载脂蛋白A-Ⅰ可提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平,增加细胞内胆固醇流出,降低细胞内胆固醇聚积.其机制可能是通过PKA信号途经使细胞ABCA1蛋白质水平增加.

16层螺旋CT血管成像评价颈动脉斑块性质与载脂蛋白A-Ⅰ/载脂蛋白B关系的研究

目的应用16层螺旋CT颈部血管成像技术,探讨不同性质的斑块与载脂蛋白A-Ⅰ/载脂蛋白B(ApoA-Ⅰ/ApoB)的关系。方法选择60例缺血性脑卒中患者,常规血糖、血脂、肝肾功能、ApoA-Ⅰ、ApoB等检查,ApoA-Ⅰ/ApoB<1为观察组,ApoA-Ⅰ/ApoB≥1为对照组。均经颈部彩色多普勒检查(CDS)初步筛选颈部有无斑块。在经踝静脉注入对比剂行颈部16层螺旋CT血管造影(CTA)检查,进行后处理,观察颈部血管斑块情况,依据CT值判定斑块性质,同时与ApoA-Ⅰ/ApoB分析。结果 60例患者共发现208块斑块。颈动脉不同部位斑块性质的分布间差异有统计意义(χ2=28.62,P<0.01)。颈动脉不同部位的狭窄程度比较,差异均有统计学意义(Hc=28.62,P<0.01),其中颈总动脉起始段与颈总动脉分叉部、颈总动脉中段与颈内动脉起始段、颈总动脉分叉与颈内动脉起始段的狭窄程度比较,差异均有统计学意义(t值分别为-4.62、-3.38、2.51,P<0.01)。观察组与对照组分别比较责任病灶与非责任病灶侧血管内软斑块、中间斑块、硬斑块分布,差异均有统计学意义(Hc=3.17,Hc=3.32,P<0.05);两组责任病灶侧斑块分布比较,差异有统计学意义(Hc=15.00,P<0.01);两组非责任病灶侧斑块分布比较,差异无统计学意义(Hc=1.67,P>0.05)。结论 16层螺旋CT能够较大范围地发现颈动脉粥样斑块的分布,可对其性质、狭窄程度进行判定。ApoA-Ⅰ/ApoB<1可视为颈动脉不稳定斑块的危险度评估,作为降脂治疗的指导指标。

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对肥胖大鼠心脏结构和功能的影响及可能机制研究

目的探讨载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽(L-4F)对肥胖大鼠心功能的影响及可能机制。方法 50只SD大鼠中,随机选择10只喂食普通饲料为对照组,另40只喂食高脂饲料8周后,肥胖模型造模成功率75%,将肥胖模型成功大鼠30只再随机分为肥胖组、诱导剂组[血红素氧合酶1(HO-1)诱导剂L-4F]和抑制剂组(HO-1抑制剂SnMP),每组10只,各组每天腹腔注射相应药物,持续8周。心脏超声和血流动力学检测后,自腹主动脉取血,ELISA检测各项指标。苏木精-伊红染色观察心肌组织病理变化;分别用RT-PCR和Western blot测心肌组织HO-1、脂联素基因和蛋白表达。结果与对照组比较,肥胖组和抑制剂组干预8周体质量较基线体质量增加显著升高(P<0.01),血糖、胰岛素、TNF-α、白细胞介素6和丙二醛水平明显升高(P<0.05,P<0.01),胆红素、超氧化物歧化酶[(3.26±0.51)μg/L和(5.90±0.49)μg/L vs (8.66±0.70)μg/L,P<0.05,P<0.01]和脂联素水平明显降低[(4.16±0.75)μg/L和(4.62±0.52)μg/L vs (6.72±1.09)μg/L,P<0.05],诱导剂组上述指标无明显变化(P>0.05);肥胖组和抑制剂组左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径显著增大(P<0.01),左心室短轴缩短率和LVEF及左心室最大压力最大变化速率显著降低(P<0.05,P<0.01),肥胖组左心室收缩压和左心室舒张末压明显升高(P<0.01),而诱导剂组上述指标则无明显变化(P>0.05)。肥胖组和抑制剂组心肌组织HO-1和脂联素mRNA和蛋白表达较对照组明显减低(P<0.05,P<0.01);诱导剂组HO-1和脂联素蛋白表达显著高于肥胖组和抑制剂组(P<0.01);而抑制剂组与肥胖组HO-1和脂联素蛋白表达无显著差异(P>0.05)。苏木精-伊红染色显示,肥胖组心肌细胞肥大、充血,心肌细胞间有较明显的纤维条索形成,慢性炎性反应明显,抑制剂组心肌组织也有较明显的充血、心肌细胞肥大,纤维条索形成,但是较肥胖组减轻;诱导剂组与对照组相似。结论 L-4F上调肥胖大鼠HO-1与脂联素轴,降低肥胖大鼠体质量,减轻胰岛素抵抗和炎性反应,改善氧化应激状态,抑制心肌重构,改善肥胖大鼠的心功能。

载脂蛋白A-Ⅰ在8种不同组织学分型肾肿瘤中的表达

目的:研究载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在8种不同组织学分型的肾肿瘤组织中的表达情况,探索用于鉴别诊断的新型肿瘤标志物。方法:应用免疫组织化学方法检测23例肾肿瘤(包括透明细胞癌11例、乳头状细胞癌1例、嫌色细胞癌3例、嗜酸细胞腺癌1例、多房性囊性细胞癌2例、肾盂尿路移行上皮癌3例、后肾腺癌1例、集合管癌1例)及5例癌旁正常组织中Apo A-Ⅰ的表达,癌旁正常组织取自除外23例肾癌组织的其他5例肾肿瘤的切缘外非癌组织。结果:23例肾肿瘤中,Apo A-Ⅰ阳性21例(阳性率91.3%);肾癌旁组织5例,阳性2例(阳性率40.0%),Apo A-Ⅰ在肿瘤组织与癌旁正常组织中的表达差异有统计学意义(Z=-2.829,P=0.003)。比较不同组织学分型的肾肿瘤,11例肾透明细胞癌中,阳性9例(阳性率81.8%),Apo A-Ⅰ的表达程度与肿瘤细胞的恶性程度有关,透明细胞癌Ⅱ级、Ⅲ级的表达程度明显高于Ⅰ级,差异有统计学意义(Z=-2.070,P=0.038);乳头状细胞癌、嫌色细胞癌、嗜酸细胞腺癌、多房性囊性细胞癌、肾盂尿路移行上皮癌、后肾腺癌、集合管癌均有不同程度的阳性着色。结论:Apo A-Ⅰ在肾肿瘤组织中的表达特异升高,可作为区分不同组织学分型肾肿瘤的免疫组织化学标志物。

孕期不同甲状腺功能状态血清高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A-Ⅰ的变化趋势

目的：研究不同甲状腺功能状态对孕妇血清高密度脂蛋白胆固醇（high density cholesterol,HDL-C）和载脂蛋白A-Ⅰ（apolipoprotein A-Ⅰ,ApoA-Ⅰ）代谢的影响。方法：采集30名甲状腺功能正常（正常组）、19名亚临床甲状腺功能减退（亚甲减组）及8名亚临床甲状腺功能亢进（亚甲亢组）孕妇孕9~12、14~17、23~26和37~40周的空腹血清标本,测其血清HDL-C和ApoA-Ⅰ含量。采用重复测量数据方差分析的秩和检验分析4个妊娠时段孕妇血清HDL-C、ApoA-Ⅰ含量的变化;采用一般线性模型（general linear model,GLM）分析3组孕妇孕期血清HDL-C、ApoA-Ⅰ含量的差异。结果：孕期各组孕妇血清HDL-C含量的变化差异均无统计学意义（χ~2=5.428,P=0.143;χ~2=2.027,P=0.567;χ~2=2.885,P=0.410）,正常孕妇和亚甲减孕妇血清ApoA-Ⅰ的含量增高,差异均有统计学意义（χ~2=46.343,P〈0.001;χ~2=35.984,P〈0.001）,亚甲亢孕妇血清ApoA-Ⅰ含量的变化差异无统计学意义（χ~2=6.750,P=0.080）。亚甲亢孕妇孕期血清HDL-C和ApoA-Ⅰ的含量均低于正常孕妇,差异均有统计学意义（P=0.025,P=0.027）,正常孕妇与亚甲减孕妇孕期血清HDL-C和ApoA-Ⅰ含量的差异均无统计学意义（P=0.378,P=0.549）。结论：妊娠期亚甲亢影响孕妇血清HDL-C和ApoA-Ⅰ代谢,进而影响胎儿的生长发育;妊娠期亚甲减（经优甲乐治疗后）未发现影响孕妇血清HDL-C和ApoA-Ⅰ代谢。

老年缺血性心肌病患者ApoB水平和ApoB/ApoA-Ⅰ比值及其与预后的关系

目的通过测定载脂蛋白(Apo)B及ApoB/ApoA-Ⅰ水平,评估老年缺血性心肌病患者严重程度及预后,并探讨其临床价值。方法选择老年缺血性心肌病患者54例,根据NYHA心功能分级分为心功能Ⅱ级20例,Ⅲ级18例,Ⅳ级16例,比较各级间ApoB及ApoB/ApoA-Ⅰ水平;同时所有受试者在接受常规抗心力衰竭治疗基础上加用他汀类调脂药物(阿托伐他汀钙片)治疗2个月,比较治疗前后ApoB及ApoB/ApoA-Ⅰ、血浆B型脑利钠肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)、左室收缩末容积指数(LVESVI)和左室舒张末容积指数(LVEDVI)水平。结果 (1)治疗前和治疗后,心功能Ⅲ级、Ⅳ级患者ApoB水平及ApoB/ApoA-Ⅰ比值均高于心功能Ⅱ级患者,而心功能Ⅳ级患者ApoB水平及ApoB/ApoA-Ⅰ比值高于心功能Ⅲ级患者,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)治疗后,各级心功能患者ApoB水平及ApoB/ApoA-Ⅰ比值较治疗前降低,LVESVI、LVEDVI较治疗前降低,LVEF较治疗前升高,LDL-C、BNP水平较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ApoB水平及ApoB/ApoA-Ⅰ比值可用于评估老年缺血性心肌病患者严重程度,规律应用他汀类药物可有效改善缺血性心肌病预后。

健脾化瘀祛痰法对apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A信号通路介导的脂肪酸β氧化改善血脂异常的调控作用及其机制

目的:探讨健脾化瘀祛痰法对高脂血症大鼠血脂异常的影响,基于载脂蛋白AⅠ(apoA-Ⅰ)/单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)/肉毒碱棕榈酰转移酶ⅠA(CPT1A)信号通路阐明其分子机制。方法:32只大鼠随机分为空白对照组、模型组、辛伐他汀组(给予1.575 mg·kg^(-1)·d^(-1)辛伐他汀)和化瘀祛痰方(HYQTP)组(给予13.846 mg·kg^(-1)·d^(-1)化瘀祛痰方药物),每组8只。空白对照组大鼠给予正常饮食,模型组、辛伐他汀组和HYQTP组大鼠给予高脂饲料,建立高脂血症大鼠模型。8周后,辛伐他汀组和HYQTP组大鼠灌胃相应药物;空白对照组和模型组大鼠给予等体积生理盐水。全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平,HE染色观察各组大鼠肝组织病理形态表现,油红O染色观察各组大鼠肝组织脂质沉积情况,检测各组大鼠肝组织中TG水平,ELISA法检测各组大鼠肝组织中apoA-Ⅰ水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肝组织中apoA-Ⅰ、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)和CPT1A mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肝组织中高密度脂蛋白受体(SR-B1)、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)和CPT1A蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-c水平升高(P<0.05),HDL-c水平降低(P<0.05);肝组织中TG水平升高(P<0.05);肝细胞出现明显肿胀,体积增大;并且可见明显红色脂滴分布;肝组织中apoA-Ⅰ、SR-B1和CPT1A mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),p-AMPK/AMPK比值降低(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和HYQTP组大鼠血清TC、TG和LDL-c水平降低(P<0.05),HDL-c水平升高(P<0.05);肝组织中TG水平降低(P<0.05);肝细胞肿胀明显减轻,脂滴分布明显减少,肝组织中apoA-Ⅰ、SR-B1和CPT1A mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),p-AMPK/AMPK比值升高(P<0.05)。结论:健脾化瘀祛痰法能够改善高脂血症大鼠血脂异常,减轻肝脏损伤及脂质沉积,其作用机制可能与调控apoA-1/AMPK/CPT1A信号通路促进大鼠脂肪酸β氧化有关。

载脂蛋白A-Ⅰ在高密度脂蛋白生物合成中的作用研究进展

高密度脂蛋白(HDL)生物合成是一个有多种膜蛋白和胞质蛋白参与的复杂过程,载脂蛋白A-Ⅰ(apo A-Ⅰ)是HDL中最主要的结构和功能蛋白,它能活化卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(LCAT),贫脂apo A-Ⅰ也是巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)介导的胆固醇流出的重要接受体.因此,apo A-Ⅰ在HDL及胆固醇代谢中的作用至关重要,它赋予了HDL多种抗动脉粥样硬化活性.本文主要就HDL生物合成及apo A-Ⅰ在其中的作用作一综述,以期为揭示HDL的代谢机制提供新思路.

载脂蛋白A-Ⅰ抗动脉粥样硬化的研究进展

载脂蛋白A Ⅰ是HDL最主要的结构成分 ,是卵磷脂胆固醇酰基转移酶的主要激活剂。它决定了HDL的代谢和在血浆中的浓度。实验已经证明 ,载脂蛋白A Ⅰ具有抗动脉粥样硬化症的功能。在这里阐述了载脂蛋白A Ⅰ的结构和制备 ;载脂蛋白A Ⅰ和HDL的关系以及它在抗动脉粥样硬化方面的作用和可能的机理 :胆固醇的逆向转运。

高脂血症高密度脂蛋白亚类分布与Apo A-Ⅰ基因多态性的关系

目的:探讨高脂血症患者高密度脂蛋白(HDL)亚类分布与载脂蛋白A-Ⅰ(Apo A-Ⅰ)基因多态性的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)和双向电泳-免疫印迹检测法,分析比较118例高脂血症患者和109例血脂正常者的Apo A-Ⅰ基因型、HDL各亚类分布及相对含量。结果:Apo A-Ⅰ基因-78bp位点和+83bp位点的多态性分别以G/G和C/C基因型占优势,其中-78bp位点高脂血症组A等位基因的频率显著高于对照组(P<0·05)。高脂血症患者中,G/A突变受试者血清TG、Apo C-Ⅲ、preβ1-HDL及HDL3a水平显著高于,而HDL2a和HDL2b水平则显著低于G/G基因型者。结论:高脂血症Apo A-Ⅰ基因-78bp位点G/A突变与HDL亚类分布相关,G/A突变受试者血清HDL亚类颗粒呈减小的趋势,提示HDL成熟代谢可能受阻。

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对非酒精性脂肪肝病大鼠糖脂代谢的影响

目的:探讨载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠糖脂代谢的影响及其可能的机制。方法:50只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为空白组(n=13)和造模组(n=37),空白组大鼠给予普通饲料饲养,造模组大鼠给予高脂饲料喂养,连续喂养12周,每组随机取1只大鼠评估NAFLD模型是否成功。造模组剩余的36只大鼠随机分为模型组、阳性药物组和apoA-Ⅰ模拟肽组,每组12只,apoA-Ⅰ模拟肽组大鼠腹腔注射apoA-Ⅰ模拟肽,阳性药物组腹腔注射阿托伐他汀,模型组和空白组腹腔注射等量的生理盐水,1次/d,连续8周。检测大鼠肝功能、血糖和血脂水平,HE染色观察大鼠肝脏组织形态,ELISA法检测肝脏组织中SOD、GSH-Px、MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平。结果:与空白组比较,模型组、阳性药物组和apoA-Ⅰ模拟肽组大鼠血清ALT、AST、FBG、TC、TG和LDL-C水平升高(P<0.05),而HDL-C水平降低(P<0.05),肝脏组织中SOD和GSH-Px水平降低(P<0.05),而MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组和apoA-Ⅰ模拟肽组大鼠血清ALT、AST、FBG、TC、TG和LDL-C水平降低(P<0.05),而HDL-C水平升高(P<0.05),肝脏组织中SOD和GSH-Px水平升高(P<0.05),而MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05)。结论:apoA-Ⅰ模拟肽可减轻NAFLD模型大鼠肝损伤,改善糖脂代谢,其机制可能与减轻肝脏氧化应激和炎症反应有关。

糖尿病患者非高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A-Ⅰ比值与冠状动脉病变程度的相关性

目的 探讨非HDL-C（NHDL-C）/载脂蛋白A-Ⅰ （apoA-Ⅰ）比值与2型糖尿病患者冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 选择因劳力性胸痛而行冠状动脉造影的2型糖尿病患者373例,依据Gensini评分三分位分为3组,低分组＜8分（143例）;中分组8～28分（109例）;高分组＞28分（121例）,评价NHDL-C/apoA-Ⅰ比值与冠状动脉病变严重程度的相关性.结果 3组患者HDL-C、脂蛋白（a）、apoB、NHDL-C、NHDL-C/apoA-Ⅰ比值等比较,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;Pearson相关分析和Spearman相关分析均显示,2型糖尿病患者NHDL-C/apo-A-Ⅰ比值与Gensini评分呈正相关（r=0.146,P＜0.01;r=0.127,P＜0.05）.多元线性回归分析显示,2型糖尿病患者NHDL-C/apoA-Ⅰ比值与冠状动脉病变严重程度独立相关（偏相关回归系数=3.361,P＜0.05）.结论 NHDL-C/apoA-Ⅰ与2型糖尿病患者冠状动脉病变严重程度独立相关.

激动β_3肾上腺素能受体上调载脂蛋白A-Ⅰ促进泡沫细胞胆固醇流出的研究

目的通过激动或抑制HepG2细胞的β3肾上腺素能受体(β3-AR),探讨β3-AR调节胆固醇逆转运过程的可能机制。方法将培养的HepG2细胞随机分为对照组、β3-AR激动剂组(激动剂组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),ELISA法检测上清液载脂蛋白(apo)A-Ⅰ、apoA-Ⅱ及β3-AR水平;测定细胞内胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平,3 H标记的胆固醇测定胆固醇流出率,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和肝X受体α亚型(LXRα)的表达。结果与对照组比较,激动剂组apoA-Ⅰ、游离胆固醇、胆固醇流出率显著增加,胆固醇、胆固醇酯显著降低,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著增加;拮抗剂组胆固醇、胆固醇酯显著升高,apoA-Ⅰ、胆固醇流出率显著减少,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低。与激动剂组比较,拮抗剂组ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低(0.49±0.10 vs1.24±0.02,0.85±0.05 vs 1.32±0.05,0.38±0.01 vs 1.45±0.20,0.08±0.01 vs 0.76±0.02,P<0.01)。结论激动HepG2细胞的β3-AR,可上调apoA-Ⅰ表达,促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白的表达。

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的:观察载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107Bq/孔3H-胆固醇和含50μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育24h后,给予不同浓度的D-4F(0～100μg/mL)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA及蛋白表达。结果:D-4F呈浓度依赖及时间依赖性促进巨噬细胞内胆固醇流出,增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1mRNA和蛋白表达。8-Br-cAMP显著增加D-4F介导的胆固醇流出和ABCA1表达,而蛋白激酶A(PKA)抑制剂虽然对基础胆固醇流出及ABCA1表达几乎无作用,却可以抑制8-Br-cAMP对胆固醇流出和ABCA1表达的促进作用。结论:D-4F促进巨噬细胞胆固醇流出,cAMP释放及ABCA1表达,可能与激活cAMP-PKA-ABCA1通路有关。

层析聚焦分离人血清载脂蛋白A-Ⅰ和C-Ⅲ

用硫酸右旋糖酐沉淀法结合角头密度梯度超离心法,从混合人血清中提取出极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)。脱脂后用层析聚焦分离纯化其中的apoA-Ⅰ和apoC-Ⅲ,均呈现一条带,其分子量分别为28 183和9440 Dalton。等电点聚焦电泳鉴定apoA-Ⅰ有8种多态型。其主要多态型的等电点为5.66～5.87。apoC-Ⅲ的三种异构蛋白apoC-Ⅲ_0、C-Ⅲ_1和C-Ⅲ_2的等电点分别为5.06、4.88和4.72。层析聚焦方法简便,分离效果好,速度快,对于HDL和VLDL中主要载脂蛋白的分离、纯化有一定的应用价值。