载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E（ApoE）拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为ApoE拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。ApoE拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/（kg·d）背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0-35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。ApoE拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。ApoE拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义（P=0.72）。ApoE拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期（第35 d）均明显低于EAE组（均P〈0.05）。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;ApoE拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组（均P〈0.05）。ApoE拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组（均P〈0.05）,其中ApoE拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异（均P〉0.05）。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组（均P〈0.05）。而ApoE拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 ApoE拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。

反式载脂蛋白A1模拟肽R-D4F对内皮祖细胞黏附及迁移功能的影响

目的探讨反式载脂蛋白A1模拟肽R-D4F对人内皮祖细胞黏附及迁移功能的影响。方法取新鲜人脐静脉血,采用密度梯法从中分离、诱导培养人内皮祖细胞,并使用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1染料进行双荧光染色以及流式细胞术进行鉴定。分别给于牛血清白蛋白、顺式D-4F(50μg/ml)及R-D4F(5~50μg/ml)处理后,采用黏附能力测定实验及Transwell小室观察内皮祖细胞黏附及迁移能力的变化。结果与牛血清白蛋白对照组相比,D-4F显著增强内皮祖细胞的黏附及迁移功能。相似的是,R-D4F呈剂量依赖性地增强内皮祖细胞的黏附与迁移。结论 R-D4F具有与D-4F相似的生物学作用,可促进人内皮祖细胞的黏附及迁移。

模拟肽L-4F对动脉粥样硬化小鼠的保护作用及机制

目的：观察载脂蛋白A-1（ApoA-1）模拟肽L-4F（L-4F）与辛伐他汀比较对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化及胆固醇流出率的影响，并探讨其可能的机制。方法：研究对象为8周龄雄性ApoE-/-小鼠，分为3组：①动脉粥样硬化组：以单纯高脂饮食；②辛伐他汀组：高脂饮食基础上予辛伐他汀治疗；③L-4F组：高脂饮食基础上予L-4F治疗。在实验第16周末取标本。用自动生化仪测定小鼠血脂水平，利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清ApoA-1浓度；油红O染色分析主动脉粥样斑块面积；同时用液闪计数仪检测胆固醇流出率；并采用反转录聚合酶链反应（RT～PCR）和免疫印迹标记法（Westernblot）分析肝脏三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCAl）、B族I型清道夫受体（SR—BI）和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白GI（ABCGl）mRNA和蛋白表达水平。结果：16周末血脂变化：与动脉粥样硬化组比较，辛伐他汀组血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低，高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）水平明显升高（P〈0．05～0．01）；而L-4F组较动脉粥样硬化组的ApoA-1水平明显升高（P〈O．05），差异均有统计学意义。胆固醇流出率：L-4F组与辛伐他汀组、动脉粥样硬化组比较胆固醇流出率均增高（P〈0．001），而辛伐他汀组与动脉粥样硬化组相比胆固醇流出率也增高（P〈0．001），差异均有统计学意义。主动脉粥样斑块面积：与动脉粥样硬化组相比，辛伐他汀组、L-4F组斑块面积均明显减少，差异均有统计学意义（P〈0．001）。肝脏3种蛋白的表达：辛伐他汀组较动脉粥样硬化组ABCAl、ABCGl蛋白表达增加（P〈0．001），L-4F组较动脉粥样硬化组ABCAl、SR—BI和ABCGl蛋白表达增加（P〈0．001），差异均有统计学意义。结论：L-4F可能通过上调肝脏ABCAl、SR—BI和ABCGl的mRNA和蛋白表达，促进巨噬细胞胆固醇流出，有效发挥抗动脉粥样硬化作用。