丙泊酚通过调控自噬改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的 探讨丙泊酚通过调控自噬改善载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的作用及机制。方法 采用C57BL6为对照组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水);Apo E^(-/-)小鼠随机分成模型组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水)、丙泊酚组[n=5,腹腔注射丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)]、丙泊酚+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组[n=5,丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)+3-MA 30 mg/(kg·d)^(-1)]。对照组给予普通饲料,另3组给予高脂饲料,连续饲喂12周,造模第10周起给药,腹腔注射,1次/d。检测胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TAG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的水平。使用苏木精-伊红染色、油红O染色以及蛋白质印迹法评估动脉的组织学结构和重组自噬效应蛋白Beclin-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结果 与对照组比较,模型组主动脉粥样斑块面积、红染脂质、血清TC、TAG、LDL-C、HDL-C均明显增加,主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显升高(P<0.05);与模型组比较,丙泊酚组主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC和LDL-C均显著下降(P<0.05)。主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增加(P<0.05)。与丙泊酚组比较,丙泊酚+3-MA组的主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC、LDL-C均明显增加,主动脉内Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达均显著下降(P<0.05)。结论 丙泊酚表现出对Apo E^(-/-)小鼠AS的改善作用,其机制涉及激活自噬和调节脂质代谢。

高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

三七总皂苷对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及自噬的影响

目的:探讨三七总皂苷对载脂蛋白E基因敲除ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成的影响及其作用机制。方法:8只雄性C57BL/6J小鼠为对照组,32只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、三七总皂苷低剂量组(40 mg·kg^(-1))、三七总皂苷中剂量组(80 mg·kg^(-1))、三七总皂苷高剂量组(160 mg·kg^(-1)),每组各8只。对照组给予普通饲料喂养,其余各组采用高脂饲料喂养的同时进行药物干预,对照组、模型组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,共干预8周,观察小鼠体质量和精神状态。全自动生化仪检测小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的水平;油红O染色观察主动脉斑块分布情况;HE染色观察小鼠主动脉病理变化;Western Blot检测小鼠主动脉中Beclin1蛋白表达水平;免疫荧光法检测LC3的表达水平;透射电镜观察小鼠主动脉自噬体形成情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠体质量增加,血清TG、TC、LDL-C水平升高,主动脉内壁斑块增多,Beclin1、LC3蛋白表达水平升高,自噬体数量增多;与模型组比较,三七总皂苷可降低动脉粥样硬化小鼠体质量及血清中TG、TC、LDL-C水平,减少主动脉内壁斑块,降低Beclin1、LC3蛋白表达水平及自噬体数量,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:三七总皂苷可抑制ApoE^(-/-)小鼠AS斑块的形成,其作用机制可能与调控自噬水平相关。

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用

目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26．6 mg／(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg／(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53．2 mg／(kg·d),芎芍胶囊220 mg／(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26．6 mg／(kg·d),芎芍胶囊110 mg／(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13．3 mg／(kg·d),芎芍胶囊55 mg／(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3．3 mg／(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0．01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0．01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。

丹酚酸B对高脂高糖联合介导的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的观察丹酚酸B对高脂高糖联合介导的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及可能的发生机制。方法选取50只8周龄雌性载脂蛋白E基因敲除小鼠,腹腔注射链脲佐菌素200 mg/kg联合高脂饲料喂养12周,将血糖水平>11.1 mol/L的40只载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、丹酚酸B高剂量组、丹酚酸B中剂量组和洛伐他汀组,每组10只。其中丹酚酸B高剂量组灌服丹酚酸B 160 mg/(kg.d),丹酚酸B中剂量组灌服丹酚酸B 80 mg/(kg.d),洛伐他汀组灌服洛伐他汀2.3 mg/(kg.d),模型组灌服等量蒸馏水,连续灌胃8周。实验期满后,取小鼠血样测空腹血糖和血脂水平;取小鼠主动脉,分别制备主动脉冰冻切片和石蜡包埋切片,进行苏丹Ⅲ染色、MASSON染色和免疫荧光化学染色,观察斑块内脂质中心面积和纤维帽厚度及斑块糜烂发生率和斑块内新生血管数目。结果丹酚酸B高剂量组、洛伐他汀组与模型组比较空腹血糖和总胆固醇水平明显降低(P<0.05);丹酚酸B中剂量组、高剂量组及洛伐他汀组与模型组比较甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇水平明显升高(P<0.05)。丹酚酸B中剂量组、高剂量组与模型组比较脂质中心面积占斑块面积百分比、斑块内新生血管数目及斑块糜烂发生率明显降低(P<0.01),纤维帽平均厚度明显增高(P<0.01)。结论丹酚酸B能够提高糖尿病动脉粥样硬化斑块的稳定性,该作用可能是通过增加平均纤维帽厚度,降低斑块内脂质含量、斑块糜烂发生率和斑块内血管新生等方式来实现的。

软脉灵口服液对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响

目的观察软脉灵口服液对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响,探讨其稳定斑块的机制。方法 30只6～8周龄ApoE基因敲除小鼠,饲以高脂饲料12周后,随机分为模型组、软脉灵组、辛伐他汀组,另以6只正常C57BL/6J小鼠作为对照组。分别给药12周后,小鼠眼眶静脉采血测定胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),HE染色观察小鼠主动脉病理形态学变化,免疫组化法测定以CD105标记的斑块内微血管密度(MVD)及小鼠主动脉CD105表达。结果与模型组比较,软脉灵组、辛伐他汀组TC、LDL-C、TG显著降低,而HDL-C显著升高(P<0.01);且病理损伤程度减轻,MVD降低,CD105蛋白表达显著降低(P<0.01)。软脉灵组与辛伐他汀组比较,上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论软脉灵口服液可能通过降低斑块内CD105蛋白表达,抑制血管新生,达到稳定动脉粥样硬化斑块目的。

化瘀祛痰方通过调节ApoE^(-/-)小鼠胆固醇代谢相关基因表达抗动脉粥样硬化

目的观察化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠粥样斑块以及胆固醇代谢相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化(As)作用及可能的机制。方法 10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照组,30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组[20 g/(kg·d)]和辛伐他汀组[0.005 g/(kg·d)]。全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),HE染色观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度,油红O染色观察主动脉脂质沉积,RT-PCR和Western blot检测肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)及主动脉CD36 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞CD36蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高;HDLC水平显著降低,主动脉管腔中形成较大粥样斑块,管壁形成大量脂质沉积,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著下调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著上调。通过药物干预,与模型组相比,化瘀祛痰组和辛伐他汀组小鼠TC、TG、LDLC水平显著下降,HDLC显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著上调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著下调。结论化瘀祛痰方可抑制ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血脂及胆固醇代谢相关基因LDLR、LCAT及CD36的表达有关。

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 ：通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/血清核因子-κ B（NF-κ B）/视黄醇结合蛋白（RBP4）信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 ：将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A（30 mg/kg）,空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 ：与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高（P〈0.05）,HDL-C水平显著降低（P〈0.05）;主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高（P〈0.05）。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低（P〈0.05）,HDL-C水平显著升高（P〈0.05）;主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低（P〈0.05）。结论 ：丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。

硫化氢供体对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的调节作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体对Apo E基因敲除小鼠(Apo E-/-)动脉粥样硬化的调节作用。方法6wk龄正常C57BL/6J和Apo E-/-小鼠分为正常对照组、ApoE-/-组和Apo E-/-+硫氢化钠(NaHS)组,每组各8只,普通饮食饲养至16wk龄。分别观察各组小鼠血清中总胆固醇(TCHO)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量及主动脉根部斑块面积的变化;用硫电极法测定血清中H2S的含量。结果与对照组相比,Apo E-/-小鼠血清中TCHO[(12.59±3.11vs2.32±0.40)μmol·L-1]和LDL-C[(1.33±0.43vs0.13±0.03)μmol·L-1]水平明显升高,而HDL-C水平[(0.45±0.13vs1.49±0.21)μmol·L-1]明显降低,血清中H2S的含量[(44.64±4.52)μmol·L-1]较对照组[(57.69±7.03)μmol·L-1]明显下降,主动脉根部明显出现斑块[(139316.6±30362.93vs0)μm2];给予NaHS后,Apo E-/-小鼠血清中TCHO、LDL-C和HDL-C水平无明显变化,而血清中H2S的含量明显升高[(52.21±7.24vs44.64±4.52)μmol·L-1],主动脉根部动脉粥样硬化斑块明显缩小[(85927.84±1922.73vs139316.6±30362.93)μm2]。结论新型气体信号分子H2S可以延缓动脉粥样硬化的进程,缩小动脉粥样硬化斑块形成。

甘草酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质代谢及动脉粥样硬化斑块的影响

目的探讨甘草酸对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化(As)斑块的影响及可能机制。方法雌性Apo E-/-小鼠18只,随机分为对照组和甘草酸组,高脂喂养12周中,甘草酸组给予甘草酸[100 mg/(kg·d)]灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每4周监测小鼠体重并采取小鼠禁食后眼球后静脉血,酶法测量血脂、血糖水平及血清中对氧磷酶1(PON1)活性,小鼠安乐死后取主动脉窦部作冰冻切片油红O染色、胸腹主动脉段作剖面分析脂质斑块面积。实时荧光PCR检测肝组织中基因表达水平,Western blot检测肝组织中相关蛋白的表达水平。结果高脂喂养中小鼠体重增加、血脂紊乱加重。与对照组比较,甘草酸组小鼠体重增幅、血浆甘油三酯及血糖水平均无显著差异,但血清总胆固醇水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,甘草酸降低主动脉窦及主动脉胸腹部斑块面积可达22%及21%(P<0.01和P<0.05)。实时荧光PCR结果显示甘草酸能显著上调肝脏脂质转运相关的B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平;其次,甘草酸可促进小鼠肝脏抗氧化酶PON1表达而升高血清中PON1活性(P<0.01),并显著提高肝细胞内甲硫氨酸亚砜还原酶A(Msr A)的表达水平显示其抗氧化能力。结论甘草酸能有效阻抑Apo E-/-小鼠As的发展,其机制可能涉及对肝脏胆固醇代谢调节及抗氧化功能的改善。

RELMɑ/FIZZ1信号通路对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响

目的探讨类抵抗素分子ɑ或炎症区域分子1(RELMɑ/FIZZ1)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性及血管新生的影响及其信号通路。方法 8周龄C57BL/6J ApoE基因敲除鼠20只,喂食高脂饲料12周后随机分为模型组及RELMɑ/FIZZ1组,另选10只C57BL/6J野生型小鼠作为对照组;RELMɑ/FIZZ1组于尾部血管注射重组RELMɑ/FIZZ1干预2周后结束实验。取小鼠主动脉制备石蜡包埋切片,进行HE染色,利用图像软件定量测量斑块面积、血管横截面积及校正斑块面积,采用免疫组织化学染色测定主动脉血管壁RELMɑ/FIZZ1及CD34阳性反应强度。提取主动脉RNA,采用全基因表达谱筛选出显著表达差异的基因和发生变化的细胞通路。结果与对照组相比,模型组动脉粥样硬化明显,斑块面积增加,粥样硬化斑块内RELMɑ/FIZZ1表达明显。RELMɑ/FIZZ1刺激后RELMɑ/FIZZ1及CD34阳性反应强度增强,校正斑块面积比模型组显著性增加(31.58%±6.65%比24.16%±3.59%,P<0.01),明显刺激血管新生(P<0.05)。相对于对照组,RELMɑ/FIZZ1组有显著性上调基因391个,下调基因465个;活性显著性上调信号通路12条,活性显著性下调信号通路10条,共计22条。结论 RELMɑ/FIZZ1刺激血管新生,造成粥样斑块不稳定,其机制与Atg9a、Gng8等基因显著性表达及细胞肌动蛋白骨架调节通路、缝隙连接信号通路的激活密切相关。

Compound48/80对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉套环诱导斑块的影响

目的采用肥大细胞脱颗粒剂———Compound 48/80作用于颈总动脉套环的载脂蛋白E基因敲除小鼠,以探讨肥大细胞脱颗粒对动脉粥样硬化斑块的影响及其可能作用机制。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂高胆固醇饲料喂养,行右颈总动脉套环术后分为实验组和对照组,分别腹腔注射Compound 48/80或D-hank’s。第4次注射后30 min,安乐死,取材。全自动生物化学分析仪测定血清中脂质含量,比色法测定血清中类胰蛋白酶活性,苏木素—伊红染色观察颈总动脉病理改变,甲苯胺蓝肥大细胞染色,免疫组织化学检测平滑肌肌动蛋白和巨噬细胞特异性抗原在斑块内的表达。结果Compound 48/80对血清脂质水平无明显影响。Compound 48/80明显刺激肥大细胞脱颗粒(80.6%±17.8%比13.5%±4.1%,P<0.01),升高血清中类胰蛋白酶活性(0.57±0.13 u/L比0.36±0.10 u/L,P<0.05)。套环能加速颈总动脉斑块形成(未套环侧颈总动脉斑块面积均为0,套环侧颈总动脉均有斑块形成),Compound 48/80增大套环侧颈总动脉斑块最大横截面积(58 500±7 500μm2比8 600±2 800μm2,P<0.01),并使管腔最大狭窄程度加重(81%±15%比41%±12%,P<0.05)。Compound 48/80使颈总动脉斑块内α平滑肌肌动蛋白表达量增加(1 219±364 iu比522±137 iu,P<0.05)和巨噬细胞特异性抗原表达量增加(426±133 iu比169±38 iu,P<0.05)。结论套环能加速载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉斑块形成。Compound 48/80使套环侧颈总动脉斑块最大横截面积和颈总动脉最大狭窄程度增加,其机制可能与其刺激肥大细胞脱颗粒促使平滑肌细胞增殖和巨噬细胞聚集有关。

红景天甙对间歇性低压低氧诱导的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察红景天甙对间歇性低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及其可能机制。方法 30只8周龄健康雄性ApoE-/-小鼠随机分为常压常氧组、间歇性低压低氧组、低压低氧+红景天甙组,其中间歇性低压低氧组和低压低氧+红景天甙组被放置在模拟海拔5000 m低压低氧舱内每天8h,每组给予相同的普通饮食喂养,低压低氧+红景天甙组灌服红景天甙30 mg/(kg·d),而常压常氧组和间歇性低压低氧组灌服等量蒸馏水,连续灌胃12周后取小鼠血样测空腹血糖和血脂,取小鼠主动脉根部,HE染色观察动脉粥样硬化斑块的大小,Masson染色观察斑块内胶原含量,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白的表达。结果三组空腹血糖和血脂水平无统计学差异(P>0.05);与常压常氧组比较,间歇性低压低氧组动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0.01),胶原含量明显减少(P<0.01);与间歇性低压低氧组比较,低压低氧+红景天甙组斑块面积、MMP-2和MMP-9蛋白水平明显降低(P<0.01),而斑块内胶原含量、TIMP-2蛋白水平明显增加(P<0.01)。结论红景天甙能抑制间歇性低压低氧诱导的动脉粥样硬化斑块形成,并提高斑块的稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量有关。

耐力训练对ApoE^(-/-)致AS小鼠IL-18和IL-10表达的影响

目的:深入观察耐力训练对载脂蛋白E基因敲除(Apo E^(-/-))致动脉粥样硬化(AS)小鼠白介素18(IL-18)和白介素10(IL-10)的影响,探讨运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只:随机分为2组(n=10):AS模型组(AC组)和运动干预组(AE组),AE组进行跑台耐力训练;选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(CC组)。实验持续12周,取主动脉制作冰冻切片,分别用于观察主动脉AS斑块和病理变化以及主动脉IL-18、IL-10蛋白表达;采用ELISA法检测血清IL-18、IL-10水平。结果:112周高脂膳食致Apo E^(-/-)小鼠发生典型的AS病变,耐力训练使AS斑块面积显著减少(P<0.01),病变程度显著减轻。2与CC组比较,AC组、AE组小鼠血清IL-18和IL-10水平均显著升高(P<0.01),且AC组IL-18/IL-10比值显著升高(P<0.01)。AE组血清IL-18水平及IL-18/IL-10比值均显著低于AC组(P<0.01)。3与CC组比较,AC组、AE组小鼠主动脉IL-10和IL-18蛋白表达均显著升高(P<0.01),AE组IL-10表达显著高于AC组(P<0.05),IL-18表达显著低于AC组(P<0.05)。结论:耐力训练通过降低血液和主动脉IL-18及提高IL-10水平,增强了主动脉血管抗炎能力,从而发挥抗AS的作用。

鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将ApoE^(-/-)小鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、鸢尾素组,每组10只,分别给予普通饮食+生理盐水、高脂饮食+生理盐水、高脂饮食+鸢尾素,饲养至12周后处死,处死前测体重,用化学法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。采用HE染色和整体油红O染色分析主动脉粥样斑块面积大小,实时荧光定量(qRT-PCR)检测主动脉CD36、NF-κB p65的mRNA表达,Western blot检测主动脉CD36、NF-κB p65、SOD的蛋白表达。结果动脉粥样硬化模型组主动脉斑块面积明显高于正常对照组,内膜明显增厚,而鸢尾素组较动脉粥样硬化模型组斑块面积减少,内膜增厚程度下降。与正常对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平升高,NF-κB p65、CD36mRNA和蛋白表达增加,而血清SOD活性、HDLC水平减低(P<0.05)。与动脉粥样硬化模型组比较,鸢尾素组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平降低,NF-κB p65、CD36 mRNA和蛋白表达下调,而血清SOD活性、HDLC水平升高(P<0.05)。结论鸢尾素能减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的发生发展,这可能与其降低小鼠体重和血脂、抑制炎症反应、抗氧化应激有关。

葛根总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的探讨葛根总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠主动脉窦动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法将载脂蛋白E基因缺陷小鼠随机分为模型组、葛根总黄酮低剂量组、葛根总黄酮高剂量组及阿托伐他汀阳性药物组。常规生物化学法测定血清总胆固醇、甘油三酯及高密度脂蛋白胆固醇水平;采用主动脉根部连续石蜡切片、苏木素伊红染色观察组织形态学改变,测定载脂蛋白E基因缺陷小鼠主动脉窦动脉粥样硬化斑块大小、动脉粥样硬化斑块与管腔面积比。结果4组小鼠共检出斑块65个,4组虽都有典型的粥样斑块或/及纤维斑块等中晚期动脉粥样硬化病变形成,但组织学观察发现模型组部分斑块体积较大,汇合成片,管壁弥漫性增厚,管腔较狭窄,而葛根总黄酮治疗组及阿托伐他汀阳性药物组动脉粥样硬化斑块病变较局限,管腔狭窄程度较轻,并且葛根总黄酮高、低剂量组及阿托伐他汀阳性药物组斑块面积与管腔面积之比值显著低于模型组(分别为0.11%±0.04%、0.27%±0.04%和0.76%±0.33%,P<0.01),葛根总黄酮高剂量组斑块面积与管腔面积比值显著低于葛根总黄酮低剂量组(P<0.01)。结论葛根总黄酮一定程度抑制载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块进展,该作用可能与降低小鼠血脂作用无明显关系。

通心络胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠冠状动脉粥样硬化的影响

目的:通过通心络胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠[ApoE(-/-)]冠状动脉斑块和心肌病理组织学的干预变化,探究其治疗冠心病(CHD)动脉粥样硬化(AS)的疗效机制。方法:将40只ApoE(-/-)小鼠作为实验组,建立冠状AS模型,随机分为模型组和辛伐他汀组等4组,后者分别给予辛伐他汀及高、中、低剂量的通心络胶囊进行干预8周;另选8只同系的小鼠作为正常对照组。通过观察各组小鼠冠状动脉斑块和心肌病理组织学等指标的变化,探讨通心络胶囊对ApoE(-/-)小鼠AS的调节作用和机制。结果:模型组小鼠冠状动脉病变主要位于心肌内的小分支、心肌细胞、心肌间质,均分为6.63±1.48;辛伐他汀组和通心络胶囊各剂量组冠状动脉及心肌病变较模型组均减轻,其中辛伐他汀组均分为2.62±2.25,通心络胶囊低剂量组均分为4.5±1.71,中剂量组均分为3.12±1.81,高剂量组均分为2.38±2.34。通心络胶囊低剂量组与模型组比较,P<0.05;通心络胶囊中、高剂量组与模型组比较,均为P<0.01;辛伐他汀组与模型组比较,P<0.01;通心络胶囊中、高剂量组与辛伐他汀组比较,P>0.05。结论:通心络胶囊对冠状AS的形成有一定的抑制作用,各剂量组作用强度依次为高、中、低剂量组,其中中、高剂量组与辛伐他汀组作用相当。

血管紧张素Ⅱ对载脂蛋白E敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ对载脂蛋白E敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠经高脂饮食饲养建立动脉粥样硬化模型,用血管紧张素Ⅱ干预。用免疫组织化学法观察粥样硬化斑块内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达,用RT-PCR及Western blotting检测主动脉内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达。结果血管紧张素Ⅱ干预组细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在动脉粥样硬化斑块内阳性表达较对照组明显增加;血管紧张素Ⅱ干预组主动脉内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子mRNA及蛋白表达较对照组明显增加。结论血管紧张素Ⅱ能诱导主动脉粥样硬化斑块内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达。

12月龄ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化

目的探讨12月龄ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化。方法12月龄雌雄各半动脉粥样硬化小鼠6只,选取主动脉根部、颈动脉、腹主动脉及肾动脉进行冰冻切片,油红染色,光学显微镜观察血管病理变化,采集图像。结果6例小鼠主动脉根部及肾动脉血管均可见油红染色,4例小鼠腹主动脉血管可见油红O染色,而6例小鼠颈动脉均不见油红O染色斑块。结论北京大学医学部实验动物部饲育的ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠是研究动脉粥样硬化的良好动物模型。

氯沙坦对载脂蛋白E基因缺陷小鼠氧化应激及动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂氯沙坦对载脂蛋白E基因缺陷小鼠氧化应激及主动脉粥样斑块中血管平滑肌细胞、巨噬细胞数量影响,探讨氯沙坦稳定斑块的作用及可能机制。方法27只8周龄雄性载脂蛋白E基因缺陷小鼠随机等分三组:对照组、氯沙坦低剂量组[5 mg/(kg.d)]及氯沙坦高剂量组[25 mg/(kg.d)],20周后处死动物。常规生物化学法测定血清一氧化氮含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛及血脂水平;采用HE染色法观察小鼠主动脉粥样硬化病变形成;免疫组织化学法分析粥样斑块中血管平滑肌细胞和巨噬细胞数量。结果三组间血脂水平无显著性差异;与对照组相比,氯沙坦低、高剂量组血清一氧化氮水平和超氧化物歧化酶活性均明显升高(P<0.01)、丙二醛水平显著减低(P<0.05和P<0.01),且氯沙坦低剂量和高剂量组间也有明显差异(P<0.01);氯沙坦干预后动脉粥样斑块纤维帽厚,脂质核心小;氯沙坦治疗组斑块中平滑肌细胞数量显著增加(P<0.01)、巨噬细胞数量明显降低(P<0.01),且氯沙坦高剂量组较低剂量组作用更明显(P<0.01)。结论氯沙坦在不影响血脂水平情况下,可通过减轻载脂蛋白E基因缺陷小鼠氧化应激,增加斑块中平滑肌细胞数量,降低巨噬细胞数量,可能起到稳定粥样斑块作用,且随剂量增加作用增强。