APOL1基因变异的检测及其与高血压肾病的初步关联研究

目的:建立载脂蛋白L1(APOL1)基因变异的检测方法,初步观察APOL1基因变异与高血压肾病(HRD)的关联性。方法:检索确认APOL1基因序列,设计第2~7外显子的7对引物。提取人外周血样本基因组DNA,行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖电泳鉴定、纯化,行全基因测序。检测10例HRD患者APOL1基因,进行非同义突变的功能评价,分析其与HRD的关联性。结果:成功扩增了APOL1基因第2~7外显子,测序证实含目标外显子序列。10例HRD患者中发现APOL1基因变异2例,这些变异可能具有致病性。结论:成功建立了APOL1基因的全基因测序方法。HRD患者存在APOL1基因变异,需积累病例进一步证实两者关联性。

人类免疫缺陷病毒感染合并肾脏病载脂蛋白L1基因突变检测

目的检测我国人类免疫缺陷病毒(HIV)感染合并或未合并肾损害个体进行载脂蛋白L1(apolipoprotein-L1,APOL1)基因突变。方法分析6例HIV感染合并肾脏病患者临床特点,并收集外周血DNA,进行APOL1调控区、编码区基因测序,与4例HIV感染非肾脏病患者、60例地域匹配正常对照、千人基因组测序,进行突变基因频率比较。结果 6例患者均有不同程度血尿、蛋白尿、血白蛋白降低,2例患者血肌酐升高,2例患者有血脂紊乱,1例患者合并乙肝感染,1例患者合并丙肝感染。全血DNA测序显示1例患者携带APOL1基因DNA调控区A-565G杂合子突变;6例患者均携带APOL1基因DNA编码区G496A(Glu166Lys)、C702A(同义突变)、G732A(Met244Lle)、G812A(Arg271Lys)、G1008A(同义突变)突变。与4例HIV感染非肾脏病患者、60例地域匹配正常对照、千人基因组测序相比,未发现新的突变,且突变基因频率分布差异无统计学意义。结论未发现非洲裔美国人HIV相关肾病常见的APOL1基因G1/G2突变,并且APOL1基因调控区、编码区未发现其他特殊变异,提示我国HIV相关肾病可能存在其他危险因素。

APOL1基因多态性与非糖尿病肾病相关性的研究进展

人类基因组测序和基因变异公共数据库的发展使肾内科医师可以重新审视常见的肾脏疾病。非糖尿病肾病在非裔血统人群中盛行,通过混合连锁不平衡绘图鉴定出位于染色体22q12.3区域载脂蛋白L1(APOL1)基因变异与非洲高流行率的非糖尿病肾病具有相关性。埃塞俄比亚地区APOL1基因变异的缺失与肾脏疾病低流行率的一致性,进一步支持了APOL1基因变异是肾脏疾病易患性致病突变的推测。但是,这些变异相关的细胞损伤的生物学机制仍有待探究,并且也不能排除其他未被发现的突变导致肾脏疾病的可能性。

慢性丙型肝炎患者载脂蛋白L1基因突变检测

目的探讨慢性丙型肝炎患者载脂蛋白(apoprotein,Ape)L1基因突变的检测情况并分析其相关性。方法选择慢性丙型肝炎患者78例作为HCV组,选择同期健康人78例作为健康组,调查2组入选者的肝功能与一般资料,检测2组血液ApeL1基因突变情况并进行相关性分析。结果HCV组的ALT、AST等显著高于健康组(P<0.05),HCV组HCV RNA水平为(8.24±0.551)gIU·mL^(-1)。HCV组中ApeL1基因突变率为16.7%,显著高于健康组的1.3%(P<0.05)。在HCV组13例ApeL1基因突变患者中,其中-51G>A 7例,-26A>G 3例,310G>A 2例,895G>T 1例;健康组中1例基因突变为310G>A。在HCV组中,Pearson相关分析显示,ApeL1基因突变与HCV RNA、ALT与AST水平都呈现相关性(P<0.05)。结论慢性丙型肝炎患者ApeL1基因突变比较常见,多为-51G>A突变,与患者的肝功能与HCV RNA水平显著相关。

生存素对3T3-L1脂肪细胞中载脂蛋白E表达和分泌的影响

目的:探讨生存素(Survivin)对3T3-L1脂肪细胞中载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)表达和分泌的影响。方法:构建Survivin过表达慢病毒载体及其对照载体,分别感染3T3-L1前脂肪细胞并进行分化培养。在分化第8天对细胞进行转录组分析。采用实时定量PCR检测3T3-L1脂肪细胞中ApoE mRNA的表达,蛋白质印迹法检测胞内及分泌的APOE蛋白表达水平。结果:建立了稳定过表达Survivin的3T3-L1前脂肪细胞株,分化培养至第8天,过表达Survivin不影响脂肪细胞分化。转录组分析结果显示ApoE具有较高表达丰度,并且载脂蛋白家族中只有ApoE发生明显下调。Survivin过表达组细胞ApoE mRNA水平(t=9.676,P<0.01)以及蛋白水平(t=4.183,P<0.05)均显著低于对照组,并且细胞培养上清液中APOE分泌蛋白的表达水平同样显著低于对照组(t=5.683,P<0.01)。结论:Survivin在3T3-L1脂肪细胞中过表达时,能够在转录以及蛋白水平特异性下调3T3-L1脂肪细胞ApoE的表达。

APOL1基因变异相关性局灶节段性肾小球硬化研究进展

局灶节段性肾小球硬化(FSGS)病因多样、发病机制不明,治疗效果及预后差异很大。近年研究发现,基因多态性是FSGS预后差异大的重要原因之一。载脂蛋白L1(APOL1)基因变异相关性FSGS是近年研究热点,且在我国发现了APOL1基因变异相关性FSGS新的突变位点,文章对APOL1基因变异相关性FSGS研究进展进行综述。