JTE-522-induced apoptosis in human gastric adenocarinoma cell line AGS cells by caspase activation accompanying cytochrome C release,membrane translocation of Bax and loss of mitochondrial membrane potential

瞄准：在 JTE-522-induced apoptosis 调查 mitochondrial 小径的角色并且调查在细胞色素 C 版本， caspase 活动和 mitochondrial 膜潜力(Deltapsim ) 的损失之间的关系。方法：房间文化，数的房间， ELISA 试金， TUNEL，流动 cytometry，西方的污点和 fluorometric 试金被采用在 AGS 房间和相关分子的机制在房间增长和 apoptosis 上调查 JTE-522 的效果。结果：JTE-522 禁止了 AGS 细胞的生长并且导致了 apoptosis。Caspases 8 并且 9 在从 procaspase 和 caspase 活动由劈开产品的外观判定了劈开特定的 fluorogenic 底层的 apoptosis 期间被激活。阐明是否 caspases 的激活 8 和 9 为 apoptosis 正式就职被要求，我们在 apoptosis 上检验了 caspase 特定的禁止者的效果。结果证明 caspase 禁止者显著地禁止了 JTE-522 导致的 apoptosis。另外，与 Rhodamin 123 的举起的减少伴随的细胞色素 C 的 Bax 和 cytosolic 版本的膜 translocation，在 apoptosis 的一个早阶段被检测。而且， Bax translocation，细胞色素 C 版本，和 caspase 9 激活被 Z-VAD.fmk 和 Z-IETD-CHO 堵住。结论：现在的数据显示在 caspases 的激活之间的一个关键协会 8， 9，细胞色素 C 版本， Bax 的膜 translocation， Deltapsim 的损失和在 AGS 房间的 JTE-522-induced apoptosis。

Altered expression of nuclear matrix proteins in etoposide induced apoptosis in HL-60 cells

The events of cell death and the expression of nuclear matrix protein (NMP) have been investigated in a promyelocytic leukemic cell line HL-60 induced with etoposide. By means of TUNEL assay, the nuclei displayed a characteristic morphology change, and the amount of apoptotic cells increased early and reached maximun about 39% after treatment with etoposide for 2 h. Nucleosomal DNA fragmentation was observed after treatment for 4 h. The morphological change of HL-60 cells, thus, occurred earlier than the appearance of DNA ladder. Total nuclear matrix proteins were analyzed by 2-dimensional gel electrophoresis. Differential expression of 59 nuclear matrix proteins was found in 4 h etoposide treated cells. Western blotting was then performed on three nuclear matrix acssociated proteins, PML, HSC70 and NuMA. The expression of the suppressor PML protein and heat shock protein HSC70 were significantly upregulated after etoposide treatment, while NuMA, a nuclear mitotic apparatus protein, was down regulated. These results demonstrate that significant biochemical alterations in nuclear matrix proteins take place during the apoptotic process.

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。

肿瘤坏死因子受体及其信号转导蛋白TRAF2在喉癌中的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)和其转导蛋白TRAF2的表达及其与喉鳞状细胞癌生物学行为的关系。方法:利用免疫组织化学及原位末端标记法,对33例喉鳞状细胞癌组织TNFR1、TNFR2和TRAF2的表达及其凋亡指数进行检测。结果:①33例喉鳞状细胞癌中,21例TNFR1表达阳性(63.6%),2例TNFR2表达阳性(6.1%),两者表达染色阳性部位主要集中在细胞膜上,表达程度与喉鳞癌的生物学行为无关(P>0.05);②33例喉鳞状细胞癌中,23例TRAF2表达阳性(69.7%),其表达部位主要位于细胞浆中。TRAF2的表达程度与喉鳞癌的病理分级有关(P<0.05),与其他的生物学行为无关(P>0.05);③TRAF2的表达与TNFR1的表达具有明显的正相关(r=0.637,P<0.01);④TNFR1、TRAF2表达阳性组织的细胞凋亡指数(3.12±1.47及2.85±1.19)显著低于TNFR1、TRAF2表达阴性组织(4.28±1.34及5.12±0.81)(P<0.05及P<0.01)。结论:TNFR1信号转导过程中募集TRAF2增强肿瘤细胞抗凋亡能力,与肿瘤的分化和恶性程度有一定关系,缺乏表达TNFR2可能对喉癌的发生发展有一定作用。

胶质瘤p53、p16、bcl-2、c-fos蛋白表达和细胞凋亡

目的:探讨p53、p16、bcl-2、c-fos基因在胶质瘤的表达水平和细胞凋亡与胶质瘤的发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学和原位末端标记(ISEL)技术,对不同组织学级别150例胶质瘤石蜡标本进行基因蛋白和细胞凋亡的检测。结果:150例胶质瘤中p53、p16、bcl-2、c-fos蛋白的阳性率分别为50.00%、38.67%、61.33%、46.67%;p53、p16、bcl-2蛋白表达差异在各组间均有统计学意义(P<0.005),c-fos蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);随胶质瘤级别升高,bcl-2蛋白表达水平增高,瘤细胞凋亡减少,但差异无显著性(P>0.05)。结论:p53、p16、bcl-2、c-fos基因的异常表达在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用。p53、p16、bcl-2、c-fos基因的协同作用促使细胞凋亡机制障碍,细胞增殖和凋亡失控。p53、p16、bcl-2、c-fos基因蛋白的检测对判断预后、指导临床基因治疗有重要意义。

生存素的表达与胃癌细胞凋亡和生物学行为的关系

背景:生存素是新近发现的凋亡蛋白抑制因子家族成员之一,其再表达于大多数人类肿瘤组织中,可能成为恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点。目的:探讨生存素的表达与胃癌细胞凋亡和生物学行为的关系。方法:分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测胃癌和癌旁组织中生存素mRNA和蛋白的表达;以原位末端标记(TUNEL)法检测胃癌细胞凋亡。结果:生存素mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在癌旁组织中不表达。其表达与肿瘤大小、部位、浸润深度和淋巴结转移无明显相关性,但与肿瘤分化程度相关。所有胃癌组织中均能检测到凋亡细胞,但生存素蛋白表达阳性者的凋亡指数(AI)显著低于表达阴性者(2.5%±2.2%对5.2%±2.7%,P<0.05)。结论:生存素在胃癌组织中表达上调,其表达与胃癌分化程度相关,并可抑制胃癌细胞凋亡,可作为评价胃癌分化程度和估计预后的参考指标。

核因子κB抑制剂与多烯紫杉醇联合治疗未分化甲状腺癌的体内研究

目的：研究核因子κB（NF-κB）抑制剂DHMEQ和多烯紫杉醇联合治疗未分化甲状腺癌（ATC）的效果。方法：将裸鼠随机分为多烯紫杉醇组、DHMEQ组、联合用药组和对照组,每组6只,于两髋外侧皮下分别接种细胞数目为5×106的ATC细胞系FRO,在2周时间内将药物进行腹腔内注射,多烯紫杉醇用量为每天5mg/kg（第5和12天腹腔内注射）,DHMEQ用量为每天6mg/kg（第5~18天腹腔内注射）,动物实验的整个观察周期为32d。在第19天从不同治疗组中抽取1只裸鼠处死,取下瘤体做TUNEL凋亡染色。结果：在接受不同方案治疗后,4组裸鼠的荷瘤体积均随着接种天数的增加而增加,不同处理因素、不同处理时间及交互作用差异具有统计学意义（F处理=54.05,F时间=300.18,F交互=70.06,均P〈0.01）。染色结果显示联合用药较单独用药的染色阳性凋亡细胞数多。4组细胞凋亡指数差异有统计学意义,多烯紫杉醇组和DHMEQ组的凋亡指数皆高于对照组,联合用药组的凋亡指数高于多烯紫杉醇组和DHMEQ组,差别均有统计学意义（均P〈0.01）。结论：联合应用NF-κB抑制剂和多烯紫杉醇治疗ATC肿瘤可以更有效地抑制瘤体的增长,获得协同治疗的效果。

新城疫病毒对体外培养人膀胱癌EJ细胞凋亡作用机制研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)对体外肿瘤细胞的抑制作用机制。方法以人膀胱癌EJ细胞株为靶细胞,观察NDV对人膀胱癌EJ细胞的作用。结果NDV病毒能作用于体外培养膀胱癌细胞,光镜下细胞的贴壁率和生存率显著下降,电镜下可见到凋亡典型形态结构,TUNEL方法检测膀胱癌细胞有大量凋亡,新城疫病毒作用膀胱癌细胞24h凋亡细胞阳性指数(AI)为9.9%,48h凋亡细胞阳性指数(AI)为17.8%。免疫组化检测膀胱癌细胞有p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1表达增加而原癌基因bcl-2的表达降低从而诱导膀胱癌细胞凋亡。结论NDV病毒是一种有效抗肿瘤细胞的病毒,在体外具有明显的抑制肿瘤细胞作用。

DAPK1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

背景与目的:死亡相关蛋白激酶(DAPK1)是凋亡的正性调节因子之一,在肿瘤的发生发展中具有重要作用。本研究通过检测甲状腺乳头状癌组织和相应的癌旁组织中DAPK1 mRNA表达及细胞凋亡情况,探讨DAPK1与细胞凋亡的关系及其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用。方法:本研究采用45例由癌及癌旁组织组成的配对甲状腺癌乳头状标本,其中癌旁组织的病理类型分别为:正常甲状腺、结节性甲状腺肿、滤泡状腺瘤,各15例,每例取癌及癌旁组织各一份,分别行连续切片。用原位杂交法检测DAPK1 mRNA表达;用原位末端标记(TUNEL)法检测相应组织中细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)。结果:甲状腺乳头状癌组织中的DAPK1 mRNA阳性表达率和AI分别为37.78%(17/45),(0.74±0.30)%;癌旁组织中为71.11%(32/45),(1.39±0.29)%。两者在癌旁组织中的表达均显著高于癌组织(P<0.01)。癌组织中DAPK1 mRNA呈阳性表达者,其AI为(0.94±0.22)%;表达阴性者,其AI为(0.62±0.28)%,两者间差异有非常显著性(P<0.001)。在连续切片上,DAPK1mRNA阳性细胞的分布区域与凋亡阳性细胞的分布相似。淋巴结癌转移阳性的癌组织DAPK1 mRNA阳性表达率低于淋巴结转移阴性的病例(17.65%vs 50%,P<0.05)。DAPK1的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、周围浸润情况无关(P>0.05)。结论:DAPK1有肿瘤抑制作用,其表达低下或缺失可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程。检测DAPK1表达水平可作为判断甲状腺乳头状癌转移和预后的参考指标。

细胞凋亡在胆囊肿瘤发生发展中的作用

为探讨细胞凋亡在胆囊肿瘤形成中的作用，我们用原位末端标记法对24例胆囊癌和16例胆囊腺瘤中的凋亡细胞进行测定。结果显示：胆囊腺瘤中的细胞凋亡数低于原发性胆囊癌（P<O．01），高分化及Nevin分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期腺癌中的凋亡细胞数低于低分化及Nevin分期IV、V期者（P＜0．05）。因此作者认为细胞凋亡在胆囊癌发病中起重要作用，可以作为预测胆囊癌病程和预后的指标。

原位末端标记检测食管癌凋亡的临床病理学意义

目的:通过对食管癌组织中细胞凋亡的原位观察,评价其临床病理学意义.方法:采用原位末端标记法检测30例食管癌石腊组织切片.结果:在确诊的30例食管癌病人中,凋亡发生率为93.3%,凋亡指数为10.07±13.11,凋亡指数高低与肿瘤病理分级及淋巴结转移明显相关(P<0.01).结论:在食管癌组织中,细胞凋亡是一种自发现象,其发生情况各有不同,可作为评价预后及指导综合治疗的研究指标之一.

肺鳞状细胞癌中死亡相关蛋白激酶的表达

目的 检测肺鳞状细胞癌中死亡相关蛋白激酶 (DAP K)mRNA表达及细胞凋亡 ,探讨DAP K与细胞凋亡的关系及其在肺鳞状细胞癌发生、发展中的作用。方法 用原位分子杂交法检测 6 0例肺鳞状细胞癌、9例癌旁肺组织DAP KmRNA表达 ;用原位末端标记TUNEL法检测相应组织中细胞凋亡 ,计算凋亡指数 (AI)。结果 肺鳞状细胞癌的DAP KmRNA阳性表达率为 4 6 7% ,癌旁肺组织为 6 7 7% ,其阳性率高于肿瘤组织 (P <0 0 1 )。在肺鳞状细胞癌中 ,高分化癌DAP KmRNA阳性率为 70 % ,低分化癌为 2 3 3% ,高分化癌的DAP KmRNA阳性率高于低分化癌 (P <0 0 1 )。肺鳞状细胞癌的细胞AI为(0 6 72 8± 0 4 2 6 1 ) % ,癌旁肺组织中支气管肺泡上皮细胞AI为 (1 0 2 89± 0 2 4 33) % ,癌旁肺组织的AI高于肿瘤组织 (P<0 0 1 )。在肺鳞状细胞癌中 ,高分化癌的AI为 (0 5 82 3± 0 1 92 2 ) % ,低分化癌为 (0 4 4 6 0± 0 1 92 5 ) % ,高分化癌的AI高于低分化癌 (P <0 0 1 )。DAP KmRNA呈阳性表达的肺癌 ,其AI为 (0 5 31 7± 0 2 0 97) % ;DAP KmRNA呈阴性者 ,其AI为 (0 4 872± 0 1 91 8) % ,两组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。在连续切片上 ,DAP KmRNA阳性细胞的分布区域与凋亡阳性细胞的分布相似。DAP KmRNA呈阳性表达?