99~Tc^m-HYNIC-Annexin V荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像研究

目的研究^(99)Tc^m-联肼尼克酰胺-膜联蛋白 V(HYNIC-Annexin V)的制备及其在荷瘤小鼠体内生物分布特性和活体显像。方法用双功能螯合剂法,以^(99)Tc^m 标记 Annexin V,经高效液相色谱仪分离纯化并检测产物的标记率、放化纯及稳定性。建立荷 S180肉瘤小鼠模型,于20～25g/只昆明种小白鼠右前腋皮下接种 S180肉瘤细胞1周。荷瘤小鼠在环磷酰胺腹膜内化疗72 h 后,尾静脉注射7.4 MBq(200μl)^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V,分别于5、30 min 和1、3、6 h 进行显像和体内生物分布测定。实验结果应用 SPSS 12.0统计软件进行分析。结果 ^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 的标记率达95%,放化纯为99%。荷瘤小鼠注射^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 后6 h 显像,可见肿瘤组织放射性浓聚明显异常。体内生物分布实验示,注射显像剂后6 h 肿瘤组织的放射性摄取最高[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)为1.59±0.44],与其他时相比较,差异有显著性(P<0.05)。^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 主要浓聚于肾、肺和肝,经肾脏排泄;其在血液中清除速度快,注射后30 min,血液放射性摄取[(1.59±0.50)%ID/g]较注射后5 min 时[(8.85±2.65)%ID/g]减少80%(P<0.05)。注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液(2.80±0.54)。结论 ^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 活体细胞凋亡显像可应用于荷瘤小鼠模型,其临床应用有待进一步研究。

^(99)Tc^m-Annexin V衍生物的制备及其生物分布和凋亡显像

目的探讨^(99)Tc^m 直接标记带有10个连续组氨酸的膜联蛋白 V(Annexin V)衍生物的可行性,研究其在健康小鼠体内的分布和肺癌裸鼠模型凋亡显像。方法直接标记法制备^(99)Tc^m-Annexin V 衍生物,并测产物放化纯、胶体含量及健康小鼠体内不同时间点(5,30 min 和1,2,4,6,12,24 h)的生物分布,DAS 2.0软件拟合计算药代动力学参数。建立荷 H460非小细胞肺癌裸鼠模型,分为紫杉醇诱导化疗组(5只)和未治疗对照组(5只)。紫杉醇诱导化疗后48 h,于裸鼠尾静脉注射^(99)Tc^m-Annexin V 衍生物18.5 MBq,2和4 h 时进行凋亡显像,勾画 ROI 并计算肿瘤与对侧正常组织(T/NT)放射性比值。结果放化纯达(98.01±1.67)%,3 h 后放化纯仍可达(95.45±1.34)%,胶体含量为(3.31±1.37)%。健康小鼠体内分布实验表明肾脏对该示踪剂摄取最高,肝、脾摄取较少。DAS 2.0软件拟合得到时间-放射性曲线符合二室模型特征,分布相半衰期(T_(1/2α))为(21.18±5.95)min,清除相半衰期(T_(1/2β))为(69.32±0.10)min。荷瘤鼠显像示,给药后2 h 即可获得清晰的图像,紫杉醇诱导化疗组2和4 h 的 T/NT 比值为3.85±1.10和4.63±0.97,明显高于对照组(1.60±0.29和1.71±0.43,P<0.01)。结论该Annexin V 衍生物易于^(99)Tc^m直接标记,方法简便,标记物在血液中清除迅速,肝、脾摄取少,易得到高清晰图像。

用~99Tc^m-rh-Annexin V检测放疗或化疗后肿瘤细胞凋亡

目的验证^(99)Tc^m 直接法标记的重组入膜联蛋白 V(^(99)Tc^m-rh-Annexin V)用于早期评价放化疗后肿瘤组织细胞凋亡状态的可行性。方法将小鼠肝癌细胞(Hca-F25)接种于实验小鼠右腋下,8 d 后当肿瘤生长至直径约1 cm 时,将模型鼠分为 A(化疗组,13只)、B(放疗组,10只)、C(荷瘤对照组,12只)3组。其中 A、C 组按注射示踪剂后不同时间(1、4、6 h)各分为3个亚组(A1组3只,A2组4只,A3组6只;C1组3只,C2组4只,C3组5只);A 组接受环磷酰胺单次化疗(按体重150 mg/kg,腹腔内注射),C 组腹腔内注射同等量生理盐水,20 h 后 A、C 组鼠尾静脉注射^(99)Tc^m-rh-Annexin V 3.7MBq(0.5 μg)/只。B 组按不同吸收剂量(2、5、10 Gy)分为3个亚组(B1组4只,B2组3只,B3组3只),放疗后1 h 注射与 A、C 组相同剂量示踪剂,6 h 后显像。小鼠模型显像后即刻处死,取组织(肿瘤、血、肌肉)称重后,测量放射性计数,并计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及肿瘤(T)/肌肉(M)、T/血液(B)放射性比值,应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。结果 A、B 组小鼠肿瘤组织中凋亡细胞百分率[(11.16±3.83)%、(17.40±5.20)%]均明显高于 C 组[(2.11±1.51)%,F=56.414、94.748,P<0.001];A2、A3及 B 组肿瘤组织%ID/g 均明显高于 C2及 C3组(F 值分别为14.307、7.074、28.672,P 均<0.05),且与凋亡细胞百分率呈明显正相关(A2、A3组:r=0.813,P=0.002;B组:r=0.780,P=0.004),而 C 组肿瘤组织%ID/g 与凋亡细胞百分率无相关性(r=-0.238,P=0.229)。结论接受放疗或化疗后,小鼠肝癌组织对^(99)Tc^m-rh-Annexin V 的摄取明显增加,且其摄取程度与肿瘤组织内凋亡细胞量呈明显正相关;应用^(99)Tc^m-rh-Annexin V 显像可较准确地反映治疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状态。

放射性AnnexinⅤ活体细胞凋亡显像在肿瘤研究中的应用及进展

肿瘤治疗的目的之一是诱导肿瘤细胞凋亡。在细胞凋亡早期 ,由于磷脂酰丝氨酸暴露在细胞表面 ,导致与其有高特异性结合的放射性AnnexinⅤ的摄取增加。放射性核素标记AnnexinⅤ体内凋亡显像具有无创、可早期预警和能够定位、定性的特点 ,将在肿瘤科学研究和临床诊治中发挥重要作用 ,可监测肿瘤治疗疗效 ,评价肿瘤患者预后 ,指导治疗方案 ;

^(18)F-SFB-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的:诱导细胞凋亡是肿瘤化疗的机制之一,分子影像能在活体内无创、动态地检测细胞凋亡,有助于药物筛选和疗效分析。本研究旨在探讨N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯偶联的氟-18-膜联蛋白B1(18F-SFB-AnnexinB1)显像剂早期评价化疗诱导细胞凋亡的可行性。方法:以SFB作为中间体将18F标记到AnnexinB1上。了解18F-SFB-Annexin B1在健康小鼠体内的生物分布特性。建立Walker-256荷瘤小鼠模型,随机分为两组,化疗组腹腔注射环磷酰胺(CTX 200 mg/kg,n=3),对照组注射等体积无菌0.9%的氯化钠溶液(n=3)。24 h后静脉注射18F-SFB-Annexin B1,分别于注射后1、2、3、4 h进行PET/CT显像。比较肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(T/M)与原位缺口末端标记(TUNEL)染色法测定凋亡指数(AI)的关系。结果:18F-SFBAnnexin B1放化纯度>95%,生物分布显示肾脏放射性最高,其次为肝、脾和心肌,显像剂在体内清除速率快。化疗组与对照组各时间点T/M比值分别为4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12、4.81±0.17和2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41、2.33±0.47,差异有统计学意义(F分别为23.790、16.913、14.046、77.517,P均<0.05)。TUNEL染色AI分别为(21.00±0.04)%和(8.58±0.01)%,差异有统计学意义(F=21.539,P<0.05),且T/M值与AI间有很好的相关性(r=0.91,P<0.05)。结论:18F-SFB-AnnexinB1能早期反映化疗诱导的细胞凋亡,有望用于活体细胞凋亡分子显像和早期疗效判断。

^(153)Sm-Annexin V凋亡显像的实验研究

目的:探讨放射性核素153Sm标记Annexin V凋亡显像的可行性。方法:采用环二乙三胺五醋酸(DTPA)法进行153Sm-Annexin V制备,并进行物理、化学及生物学检测。应用153Sm-Annexin V进行体外细胞培养及荷瘤小鼠动物凋亡显像实验。结果:经环DTPA法制备的153Sm-Annexin V无色透明,pH为7.4,比活度100μg/10 mCi/2 mL;放化纯RCP>90%,标记率为88.6%;无菌,无热原,LD50>333μg/kg体质量,血浆半衰期13 min;体外细胞培养及荷瘤小鼠动物凋亡显像实验均阳性。结论:153Sm-Annex in V作为放射性核素凋亡显像剂,标记率高,半衰期相对较长,利于进行连续追踪监测、捕捉细胞凋亡活动的高峰期,进而确立最佳凋亡显像时间窗,有广泛的临床应用前景。

^(99)Tc^m-AnnexinV用于体内细胞凋亡显像的研究进展

细胞凋亡早期,磷脂酰丝氨酸从细胞膜脂双层的内层迁移至外层,利用99Tcm标记的AnnexinV对细胞凋亡暴露在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸进行体内显像,可检测早期细胞凋亡。

^(99)Tc^m标记annexinV进行体内凋亡显像的研究

细胞凋亡早期 ,磷脂酰丝氨酸 (PS)从细胞膜脂双层的内层迁移至外层。根据磷脂结合蛋白 V(annexin V )高度亲和 PS的特性 ,利用 99Tcm标记的 annexin V可以进行体内凋亡细胞的显像。

单次化疗后荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像研究

目的探讨活体肿瘤细胞凋亡监测作为评价肿瘤对化疗反应的一种新方法的可行性.方法细胞凋亡分子探针99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ经化学和放射化学合成获得.20～25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下组织接种S-180肉瘤,建立荷肿瘤小鼠模型.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗8 h、24 h、48 h、72 h后,分别尾静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ,1 h后进行单光子发射型计算机断层显像(SPECT)和体内生物分布测定,并与对照组进行比较.根据化疗后显像的最佳时间,给荷瘤小鼠尾静脉注射99Tcm-DTPA-HSA,测定体内各组织器官的血流分布情况.所有体内生物分布的实验结果应用SPSS 10.0统计学软件进行统计学分析.结果荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h进行SPECT显像时,肿瘤的显像效果最明显,且体内生物分布测定显示在化疗后72 h的肿瘤组织的放射性摄取值(1.87±0.58)最高,是对照组(1.18±0.128)的1.58倍(二者比较,P<0.05),与显像结果具有一致性.肿瘤/肌肉(T/M)放射性摄取率之比为5.83±0.799,肿瘤/血液(T/B)为1.03±0.258,与对照组比较均为P<0.05.化疗组和对照组的肿瘤组织对99Tcm-DTPA-HSA的摄取无明显差异(P>0.05).结论在进行单次环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h,荷瘤小鼠的肿瘤组织对 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的摄取显著增加,细胞凋亡体内显像作为一种评价肿瘤对化疗反应的无创性的监测方法是有效、可行的.

幼龄兔缺氧缺血性脑损伤的细胞凋亡显像研究

目的探讨^(99)Tc^m-联肼尼克酰胺-膜联蛋白 V(HYNIC-Annexin V)在幼龄兔缺氧缺血性脑损伤(HIBD)细胞凋亡显像中的价值。方法制作幼龄兔假手术组、HIBD 4 h 组、HIBD 40 h 组模型,对各组动物行注药后60 min 平面脑显像和脑组织石蜡切片观察,对 HIBD 40 h 组还进行注药后5,30,120 min 显像;用 ROI 技术计算各组动物脑患侧与健侧放射性计数比值(T/NT);假手术组和HIBD 4 h 组还进行 MRI、弥散加权成像(DWI)。结果假手术组、HIBD 4 h 组和 HIBD 40 h 组注药后60 min T/NT 分别为0.94±0.14,1.32±0.11,1.81±0.07(F=82.385,P<0.01);HIBD 40 h 组不同时间(5,30,60,120 min)显像获得的 T/NT 分别为1.72±0.04,1.77±0.06,1.81±0.07,1.71±0.03(F=3.994,P>0.01)。切片观察假手术组脑组织未见凋亡细胞,HIBD 4 h 组与 HIBD 40 h 组患侧脑见凋亡细胞,后者较明显;HIBD 4 h 组 MRI、DWI 和表观弥散系数(ADC)图均未见异常。结论^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 显像可以早期发现神经细胞凋亡,在新生儿 HIBD 细胞凋亡的无创性诊断、抑制凋亡疗效评价和预后估计方面有重要的应用前景。

荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像的实验研究

目的研究细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ的制备及其在荷瘤小鼠体内的生物分布特性和活体显像。方法采用双功能螯合剂HYNIC法锝[99Tcm]标记AnnexinⅤ,经高效液相色谱仪分离纯化并检测标记产物。建立荷肿瘤小鼠模型,在20~25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下接种S-180肉瘤,生长1周。荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗72 h后,尾静脉注射99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ,分别于5 min3、0 min、1 h、3 h、6 h后进行SPECT显像和体内生物分布测定。实验结果应用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析。结果99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ的标记率达到95%,放射性化学纯度为99%。荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h显像可见:注射99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ后6 h肿瘤组织呈明显异常放射性浓聚灶。体内生物分布实验观察到,注射显像剂后6 h肿瘤组织的放射性摄取值(1.59±0.44)最高,与其他时相的肿瘤组织放射性摄取值比较P<0.05。99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ主要聚集在肾脏、肺脏和肝脏等,从肾脏排泄,其血流清除速度快,在注射后30 min,血液放射性摄取值(1.59±0.50)仅为5 min时(8.85±2.65)的20%(P<0.05)。注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液放射性摄取率比值(2.80±0.54)。结论99Tcm-HYNIC-Annexin V有望成为一种富有应用前景的活体细胞凋亡分子探针。

活体内探测细胞凋亡的影像学技术

针对细胞调亡过程的不同变化 ,可以应用影像学手段对活体内细胞凋亡进行成像。本文对目前活体内探测细胞凋亡的影像学技术进行了综述 ,主要包括放射性核素显像 ,磁共振波谱分析与磁共振成像 ,光学与生物发光成像技术 。

放射性核素标记Anx Ⅴ细胞凋亡分子成像在肿瘤化疗疗效评估中的价值

细胞凋亡是评价肿瘤化疗疗效的一个重要方面,在靶向凋亡的分子成像技术中,核素显像技术是目前最敏感的技术,以放射性核素标记AnxⅤ的凋亡显像技术应用较为广泛。就放射性核素标记AnxV凋亡成像的原理、示踪剂种类、标记法和生物分布特征、体内外研究及临床研究结果进行综述。

膜联蛋白在肿瘤凋亡显像中的研究进展

目前的影像学检查方法尚不能在肿瘤治疗早期即对疗效进行有效判断,而活体凋亡显像能在细胞水平对肿瘤组织的改变进行早期、无创、动态监测,从而准确判断肿瘤细胞对化疗药物的反应。磷脂酰丝氨酸(PS)由细胞膜内侧翻转到细胞膜表面是细胞凋亡早期最具特征性的改变之一,这使得PS成为细胞凋亡显像的有效靶点。放射性核素标记的膜联蛋白可选择性与翻转到细胞膜表面的PS结合,从而可在体内对早期疗效进行判断。由于在有效的抗肿瘤治疗开始24 h后即可观察到大量的肿瘤细胞发生凋亡,因此活体凋亡显像有助于为临床个体化治疗方案的制订提供指导性意见。本文在临床前研究和临床试验两方面对膜联蛋白凋亡显像在抗肿瘤治疗早期疗效评价中的机制、应用、局限性及未来发展前景作一综述。

凋亡显像早期检测肿瘤化疗疗效的实验研究

目的开发含-DEVD-核心的正电子核素18F标记的Caspase3多肽活性显像药物,用于肿瘤化疗后细胞凋亡的显像研究。方法应用修改后的国产多功能模块采用"点击化学"合成18F-Pen-peptide,并经HPLC和质谱证实。荷A549肺癌小鼠经卡铂化疗(24 h、48 h、72 h)后,尾静脉注射18F-Penpeptide,注射60 min后处死检测生物学分布,定量测量肿瘤化疗后的细胞凋亡率;每组荷瘤小鼠各取2只用Micro PET/CT显像。结果 "点击化学"合成18F-Pen-peptide的效率为(21.0±4.5)﹪(n=6),放化纯>99﹪,质谱证实标记物分子量为1153.6。荷A549肿瘤卡铂化疗后24 h、48 h、72 h,肿瘤对放射性摄取率分别为(0.33±0.02)﹪ID/g、(0.26±0.01)﹪ID/g、(0.21±0.01)﹪ID/g;明显高于对照组肿瘤摄取的(0.08±0.01)﹪ID/g(P<0.01);肿瘤对放射性的摄取量与肿瘤的凋亡相一致(P<0.01);Micro PET显像表明,对照组肿瘤基本不摄取放射性,肿瘤/肌肉的摄取比为(1.32±0.01),而经卡铂化疗后的肿瘤明显摄取放射性,肿瘤/肌肉的摄取比为(3.46±0.02),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 18F-Pen-peptide是一个与Caspase3活性相关的显像剂,在监测肿瘤细胞凋亡方面有一定的临床潜在价值。

放射性核素凋亡显像检测细胞凋亡研究进展

放射性核素细胞凋亡显像具有直观、无创伤和实时在体观察细胞凋亡等特点,在脑及心肌细胞缺血再灌注损伤的观察、器官移植后排斥反应的检测、肿瘤放疗和化疗效果的评估和多巴胺能神经元早期凋亡的检测等方面具有较好的应用前景,但仍有许多问题有待于进一步探讨。

放射性核素钐153的应用进展

钐153是最常见的医用放射性同位素之一,因其具有治疗和显像的双重优势而被广泛应用于临床和科学研究。钐153发射的β射线具有射程短、能量高、射程外能量迅速衰减等特性,适用于恶性肿瘤及其他疾病的临床内照射治疗;其发射的γ射线能量适中,适合γ闪烁装置采集成像,同时,与多种化合物偶联后可进行不同功能的核素显像,适用于医学诊断和实验研究。对近期放射性核素钐153的相关医学文献进行简要综述,并探讨其潜在的临床应用价值。

凋亡分子影像研究进展

诱导细胞凋亡是各种抗肿瘤治疗的主要机制之一,凋亡分子影像能在活体内动态、无创检测抗肿瘤治疗所引起的细胞凋亡,有助于肿瘤治疗疗效的早期评判和预后分析。本文对目前细胞凋亡分子影像学技术最新研究进展进行综述,主要包括放射性核素显像、MRI、光学成像等。

放射性核素细胞凋亡显像

放射性核素细胞凋亡显像具有直观、无创伤和实时在体观察细胞凋亡等特点,对于脑、心肌细胞缺血再灌注损伤的观察,器官移植排斥反应的监测,肿瘤放疗和化疗效果的评估等方面的应用前景良好,但仍有许多问题有待于进一步探讨。

凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ对肿瘤模型化疗疗效早期评价的可行性

目的评价凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评估的可行性。方法人膜联蛋向Ⅴ（annexinⅤ）通过双功能螯合剂联肼尼克酰胺（HYNIC）进行^99mTc标记。在正常昆明小鼠右上肢接种Ehrlich腹水癌细胞，至肿瘤生长至1cm后，随机分为生理盐水处理组和环磷酰胺处理组（150mg／kg），并分别于处理后1h和24h时注射^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ，注射后30、60、180、360min进行双探头单光子发射计算机断层仪（SPECT）显像。图像分析采用感兴趣区（R01）技术，计算右上肢肿瘤部位与右下肢计数比值（肿瘤／下肢）。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织凋亡细胞。结果在不同处理时间，生理盐水处理组的肿瘤部位仅有少量娃像剂分布。环磷酰胺处理组存处理1h后，肿瘤部位显像剂分布少量增加；24h后，肿瘤部位显像剂分布明显增加，显影清晰。环磷酰胺处胛24h组的肿瘤／下肢比值（6．27±0．24）明显高于牛理盐水24h处理组（2．36±0．18）和环磷酰胺1h处胛组（4．00±0．38）。环磷酰胺处理24h后，TUNEL染色可见大请癌细胞凋亡。结论^99mTc—HYNIC—aflnexin Ⅴ是一种可以早期监测化疗药物治疗效果的核素捌亡显像剂，在化疗药物应用24h后就可以进行有效探测，并在注射显像剂后60min即可获得清晰的图像。