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Molecular characterization of Apple necrotic mosaic virus identified in crabapple(Malus spp.) tree of China 被引量:6
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作者 HU Guo-jun DONG Ya-feng +2 位作者 ZHANG Zun-ping FAN Xu-dong REN Fang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期698-701,共4页
Apple necrotic mosaic virus(ApNMV) was identified in crabapple trees with mosaic symptoms from Zaozhuang, Shandong Province, China, by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) analysis. The complete nuc... Apple necrotic mosaic virus(ApNMV) was identified in crabapple trees with mosaic symptoms from Zaozhuang, Shandong Province, China, by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) analysis. The complete nucleotide sequences of one isolate from crabapple(ApNMV-Hai) and two isolates from apple(ApNMV-Hua and-Qu) were determined. The sizes of genomic RNA1, 2 and 3 of the three isolates differed from those of the previously reported isolate ApNMV-P126 from Japanese apple, especially RNA3. Compared with the nucleotide(nt) sequence of RNA3 in isolate P126, those in the Hai and Qu isolates were 7 and 33 nt shorter, respectively, and that of isolate Hua was 7 nt longer. Alignment analyses showed that these differences in size were mainly due to differences in the lengths of the 5′ untranslated region(UTR) and the UTR region between the ORFs encoding the movement protein and the coat protein. In the phylogenetic trees constructed using the full genomic sequences of RNA1, 2 and 3, the isolate Hai clustered into a group with the isolate Qu in the RNA1 tree, but formed an individual branch in the RNA2 and 3 trees. Three recombination events were identified in the nucleotide sequences of RNA1 and 2 among the isolates ApNMV-Hai,-Hua, and-Qu. This is the first report of the full genome sequence of ApNMV in crabapple. 展开更多
关键词 CRABapple mosaic SYMPTOM apple NECROTIC mosaic virus molecular characterization
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苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备
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作者 邢飞 王红清 李世访 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期63-69,共7页
苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规... 苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断. 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 酶联免疫吸附分析方法
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3种苹果病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立
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作者 李紫腾 潘媛 +4 位作者 马子文 胡同乐 王树桐 曹克强 王亚南 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期84-92,共9页
苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)对果树的生长发育危害严重,而且复合侵染几率较高,为快速、灵敏和高效的检测3种病... 苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)对果树的生长发育危害严重,而且复合侵染几率较高,为快速、灵敏和高效的检测3种病毒,本研究根据ASPV、ASGV和ApNMV基因组保守序列设计特异引物建立了3种病毒高灵敏度的实时荧光定量PCR检测体系(Real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)。结果表明:引物ASGV-qF/qR-1、ASPV-qF/R-2和ApNMV-qF/R-3有较高的特异性,最适宜的退火温度分别为60℃、58℃和58℃,ASGV、ASPV和ApNMV 3种病毒的RT-qPCR体系比常规RT-2 PCR检测体系灵敏度高100倍,最低检出限分别为82.6、1.49×10^(2)和13.3 copies/μL。检测体系的Ct值的变异系数均小于5%,组间的变异系数在5%以内。河北农业大学果园中经RT-PCR确定带毒的88棵苹果树RT-qPCR检出率为100%,表明建立的RT-qPCR方法的可靠性和稳定性高,适用于田间果树3种病毒的检测,为苹果病毒的准确诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 荧光定量RT-PCR检测体系
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云南昭通苹果产区苹果花叶病毒的鉴定 被引量:7
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作者 姬盼 王连春 +6 位作者 孔宝华 王凯 曹克强 马钧 杨馗 石安宪 马学林 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期180-185,共6页
研究通过电镜、免疫捕获RT-PCR的方法,对云南昭通表现花叶的苹果病样进行鉴定,电镜观察到直径为26~35 nm,无包膜二十面体的准等轴对称病毒颗粒,与苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)相似。根据苹果花叶病毒的外壳蛋白基因序列设计... 研究通过电镜、免疫捕获RT-PCR的方法,对云南昭通表现花叶的苹果病样进行鉴定,电镜观察到直径为26~35 nm,无包膜二十面体的准等轴对称病毒颗粒,与苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)相似。根据苹果花叶病毒的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,提取病毒病样品总RNA,进行扩增、克隆和测序。序列分析表明侵染云南昭通的苹果花叶病病原为ApMV。把本试验鉴定的苹果花叶病毒与已报道的31个苹果花叶病毒分离物进行序列比对和分析。所有的ApMV分离物可以划为3个亚组。其中,亚组Ⅰ、亚组Ⅱ中均有侵染苹果的ApMV分离物。亚组Ⅰ寄主分化较多,亚组Ⅱ多为苹果分离物,而梨分离物单独聚在亚组III。本研究的云南昭通ApMV分离物(ZT)与昆明斗南月季分离物(Kmi2),美国分离物(NCGR9026)、捷克共和国分离物4个分离物(Cz1,Cz2,Cz3,Cz5)、德国分离物(G1)聚为寄主分化较多的亚组Ⅰ,与昆明斗南月季分离物Kmi2的核苷酸序列同源性最高,相似性达到99.8%。本研究为研究云南ApMV分子变异、与寄主的互作和指导防控提供依据。 展开更多
关键词 苹果花叶病 鉴定 苹果花叶病毒(apmv)
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苹果坏死花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立 被引量:8
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作者 胡国君 张尊平 +5 位作者 范旭东 任芳 马勉娣 张秀英 鲁兴凯 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2021年第5期13-17,共5页
根据GenBank数据库已登录序列设计了12对苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检测引物,通过引物筛选和体系优化,建立了以ApN1-F3/R3为引物的ApNMV的TB Green染料法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR... 根据GenBank数据库已登录序列设计了12对苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检测引物,通过引物筛选和体系优化,建立了以ApN1-F3/R3为引物的ApNMV的TB Green染料法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测技术。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.3%,相关系数为0.997,灵敏度是常规PCR的100倍。采用q PCR方法对60份田间苹果样品进行检测,结果显示,常规PCR对ApNMV的检出率为51.7%,而qPCR的检出率为56.7%。该技术适用于田间样品的检测。 展开更多
关键词 苹果 苹果坏死花叶病毒 实时荧光定量PCR 常规PCR
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中国苹果花叶病病原研究现状分析 被引量:7
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作者 邢飞 王红清 李世访 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1953-1963,共11页
我国是世界上最大的苹果生产国,苹果花叶病是苹果栽培中最常见的病毒性病害,在我国各大苹果产区发生普遍。感病苹果叶片常表现花叶、坏死、沿脉形成不均匀分布的条纹等症状,栅栏组织细胞排列松散、叶绿体畸变、膜结构遭到破坏,最终影响... 我国是世界上最大的苹果生产国,苹果花叶病是苹果栽培中最常见的病毒性病害,在我国各大苹果产区发生普遍。感病苹果叶片常表现花叶、坏死、沿脉形成不均匀分布的条纹等症状,栅栏组织细胞排列松散、叶绿体畸变、膜结构遭到破坏,最终影响叶片光合能力和果实品质形成,严重威胁苹果产业的可持续健康发展。近年来的研究表明,从感花叶病苹果叶片中新鉴定的苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)与我国苹果表现花叶病的相关性较高,可能是引起我国苹果花叶病的主要病原。但也有研究指出,同属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus)的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)和李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)也被认为可能是引起我国苹果花叶病的重要病原。为此,笔者依据前人研究基础及本研究室前期研究结果,系统综述了ApNMV与我国苹果花叶病的关系及其研究进展,并分析了ApMV和PNRSV在我国表现苹果花叶病的苹果样品中的侵染状况,旨在进一步明确引起我国苹果花叶病的主要病原,为该病害的科学防控提供参考。 展开更多
关键词 苹果花叶病 苹果坏死花叶病毒 苹果花叶病毒 李属坏死环斑病毒
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微量植物组织直接RT-PCR反应检测4种植物病毒的方法建立与优化 被引量:2
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作者 李姣 任秋蓉 +2 位作者 古蕾 朱晓换 王亚男 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第1期111-117,共7页
建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有... 建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有效检测了葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3)、苹果茎沟病毒(ASGV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和黄瓜花叶病毒(CMV);消除了传统RT-PCR制备RNA模板复杂耗时的缺点. 展开更多
关键词 微量植物组织直接RT-PCR反应 葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3) 苹果茎沟病毒(AS-GV) 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 黄瓜花叶病毒(CMV)
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5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
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作者 胡国君 范旭东 +4 位作者 李军 任芳 孙喜陈 张尊平 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第10期79-83,88,共6页
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNM... 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。 展开更多
关键词 苹果 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 苹果锈果类病毒 多重PCR
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苹果花叶病病原鉴定中遇到的问题及其可能的病原探究 被引量:10
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作者 梁鹏博 张志想 +3 位作者 刘斐 卢美光 李世访 王红清 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期332-339,共8页
【目的】探究苹果花叶病的病原。【方法】从北京、陕西(延安、渭南)、山东临沂共采集140份苹果叶片样品,其中表现花叶症状的111份,无症状的29份。选取一个带有苹果花叶病的样品和一个不带任何症状的样品进行s RNA(small RNA)高通量测序... 【目的】探究苹果花叶病的病原。【方法】从北京、陕西(延安、渭南)、山东临沂共采集140份苹果叶片样品,其中表现花叶症状的111份,无症状的29份。选取一个带有苹果花叶病的样品和一个不带任何症状的样品进行s RNA(small RNA)高通量测序分析。基于高通量测序分析和RT-PCR验证结果,对所有样品进行苹果花叶病毒、苹果茎沟病毒、苹果茎痘病毒、苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒5种病毒的RT-PCR检测。【结果】高通量测序分析、验证与田间调查均未发现苹果花叶病毒。其中高通量测序分析结果中:对带有花叶病样品所构建的s RNA文库中与李属坏死环斑病毒同源的s RNA份数(194份)多于健康样品文库中同源的s RNA的份数(4份)。田间调查结果显示:李属坏死环斑病毒在花叶病的样品中带毒率为90%,远高于不带症状样品的7%。【结论】因此,苹果花叶病毒可能不是引起苹果花叶病的唯一病毒病原,李属坏死环斑病毒可能会引起苹果花叶病。 展开更多
关键词 苹果花叶病 高通量测序 苹果花叶病毒 李属坏死环斑病毒
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苹果坏死花叶病毒烟台分离物的鉴定与序列分析 被引量:2
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作者 弟豆豆 宋来庆 +5 位作者 曹晓敏 胡慧 张硕 张学勇 姜中武 赵玲玲 《中国果树》 北大核心 2021年第9期42-47,51,I0002,共8页
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对在山东省烟台市采集的31份表现花叶症状的苹果幼叶进行了苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)和苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)检测。结果表明,ApNMV的检出率为87.1%,A... 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对在山东省烟台市采集的31份表现花叶症状的苹果幼叶进行了苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)和苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)检测。结果表明,ApNMV的检出率为87.1%,ApMV未检出,表明ApNMV与烟台地区苹果花叶病高度相关。从‘红将军’苹果和‘长富2号’苹果花叶样品中分别克隆出2条ApNMVRNA3基因组序列,GenBank登录号分别为MN911185和MN911186,这2条分离物核苷酸序列长度分别为1783 nt和1785 nt。序列比对结果显示,2条分离物核苷酸序列相似性为91.71%,与已报道的ApNMV RNA3核苷酸序列一致性为89.88%~96.64%。系统进化分析显示,不同来源的ApNMV亲缘关系较近,分离物之间没有表现出寄主特异性和地域分布规律。研究结果为该病的防治、流行规律的判断以及致病机理研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 苹果花叶病 苹果坏死花叶病毒 序列分析
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内蒙古呼和浩特地区苹果坏死花叶病毒的检测与遗传多样性研究 被引量:5
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作者 李正男 张磊 +3 位作者 耿帅鑫 马强 李小燕 孙平平 《中国果树》 北大核心 2020年第3期39-42,I0004,共5页
采用RT-PCR方法对从内蒙古呼和浩特地区采集的29份表现花叶症状的海红果(Malus micromalus Makino)叶片样品进行了苹果坏死花叶病毒(ApNMV)的检测,ApNMV的检出率为100%,说明ApNMV在呼和浩特地区表现花叶症状的海红果上普遍发生。分别克... 采用RT-PCR方法对从内蒙古呼和浩特地区采集的29份表现花叶症状的海红果(Malus micromalus Makino)叶片样品进行了苹果坏死花叶病毒(ApNMV)的检测,ApNMV的检出率为100%,说明ApNMV在呼和浩特地区表现花叶症状的海红果上普遍发生。分别克隆并测序了29份海红果样品中ApNMV的全长外壳蛋白(CP)基因,结果表明,29个ApNMV分离物CP基因间核苷酸序列一致性为94.1%~99.8%,与NCBI数据库中其他19个ApNMV分离物全长CP基因核苷酸一致性为86.1%~97.1%。利用ApNMV CP基因的全长序列构建了系统发育树,48个ApNMV分离物共分成5个组,本研究中的29个ApNMV分离物与2个日本分离物LC108995和NC040470聚集在一起,形成组Ⅰ;其余ApNMV分离物分别形成了组Ⅱ~组Ⅴ。 展开更多
关键词 海红果 苹果坏死花叶病毒 RT-PCR 外壳蛋白
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河北苹果坏死花叶病毒的发生及近全基因组序列的测定与分析
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作者 董震杨 李紫腾 +3 位作者 胡同乐 王树桐 王亚南 曹克强 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期72-79,共8页
为明确苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus, ApNMV)在河北的发生及其基因组特性,本试验利用RT-PCR技术对河北保定两地ApNMV发病情况进行检测,然后通过高通量测序技术对带毒样本进行序列测定和分析。结果表明,河北农大果园‘... 为明确苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus, ApNMV)在河北的发生及其基因组特性,本试验利用RT-PCR技术对河北保定两地ApNMV发病情况进行检测,然后通过高通量测序技术对带毒样本进行序列测定和分析。结果表明,河北农大果园‘红珍珠’‘锦锈红’‘信侬红’3个品种及保定唐县苹果实验基地富士品种ApNMV检出率分别为9.09%、18.18%、100%和65%。ApNMV阳性果树高通量测序结果显示,果树为ApNMV、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV)和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus, ASPV)复合侵染,ApNMV河北分离物(ApNMV-HB)的近全基因组序列包含RNA1~RNA3序列,GenBank登录号分别为OP019626、OP019627和OP019628。RNA1编码120 kD的甲基转移酶/NTP-binding解旋酶(MET/HEL),RNA2编码97 kD的RNA聚合酶(POL),RNA3编码运动蛋白(Movement protein, MP)和外壳蛋白(Coatprotein,CP),4个基因核苷酸和氨基酸序列与代表性分离物相似性分别为89.44%~97.02%、92.14%~98.67%。系统发育关系分析表明,以ApNMV RNA1、RNA2、RNA3(CP和MP)编码的氨基酸为基础构建系统发育树,ApNMV-HB分别与AM95、AM125、XJ、ZZ亲缘关系最近。本研究首次揭示了ApNMV河北分离物的近全基因组序列,丰富了该病毒的基因组序列信息,明确了该分离物与其它分离物的系统发育关系,为进一步了解该病毒的系统发育及遗传进化提供参考。 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒 高通量测序 基因组特性 系统进化
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苹果花叶病毒的RT-PCR检测及其在我国苹果产区的分布 被引量:7
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作者 冀志蕊 赵绪生 +3 位作者 王树桐 胡同乐 王亚南 曹克强 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期443-448,共6页
为了开发苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)田间样本RT-PCR检测方法和揭示我国ApMV的发生情况,以田间染病苹果组织为材料,对ApMV RT-PCR检测体系中总RNA提取方法、反应体系及程序进行了选择和优化,并利用优化的检测方法对我国苹果... 为了开发苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)田间样本RT-PCR检测方法和揭示我国ApMV的发生情况,以田间染病苹果组织为材料,对ApMV RT-PCR检测体系中总RNA提取方法、反应体系及程序进行了选择和优化,并利用优化的检测方法对我国苹果主产区13个省的23个市(县)ApMV发生情况进行了检测。以RNA提取改良法提取的田间样本总RNA为模板,RT-PCR优化体系的灵敏度达到能够检测15μg田间样本组织中的ApMV,且在果树整个生长发育时期能够检测1年生枝条树皮组织的带毒情况;ApMV在我国普遍发生,13个省的23个市(县)均检测到了ApMV,采集的327个样本带毒率为80.1%,其中未显花叶症状样本205个,ApMV阳性率为68.3%;在23个地区中,只有河北张家口、河南三门峡和陕西白水样本带毒率低于50%。 展开更多
关键词 苹果花叶病毒 RNA提取 RT-PCR 分布
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基于宏病毒组测序技术的苹果病毒病鉴定与分析 被引量:4
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作者 夏炎 黄松 +8 位作者 武雪莉 刘一琪 王苗苗 宋春晖 白团辉 宋尚伟 庞宏光 焦健 郑先波 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1415-1428,共14页
采用宏病毒组测序技术(Virome Sequencing Technology)对河南地区染病苹果树进行病毒检测与分析,从建库测序的苹果叶片中共检测出13种病毒,其中有5种苹果病毒:苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(apple stem p... 采用宏病毒组测序技术(Virome Sequencing Technology)对河南地区染病苹果树进行病毒检测与分析,从建库测序的苹果叶片中共检测出13种病毒,其中有5种苹果病毒:苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)、苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leafspotvirus,ACLSV)、苹果坏死花叶病毒(applenecroticmosaicvirus,Ap NMV)和苹果绿皱缩相关病毒(apple green crinkle associated virus,AGCa V)。对病毒检测结果中的5种苹果病毒进行RT-PCR验证,扩增后均获得目的条带,与宏病毒组测序检测结果一致,表明宏病毒组测序检测结果精准可靠。根据测序结果设计特异性引物对ASPV全长进行扩增,得到1条长度为9246 nt的ASPV-HN分离物基因组,与NCBI数据库中已报道的19个ASPV分离物的基因组核苷酸序列一致性为75.48%~79.85%;宏病毒组测序拼接所得的两条长度均为6475 nt的ASGV基因组全长基因ASGV-HN1和ASGV-HN2,与NCBI数据库中已报道的18个ASGV分离物的基因组核苷酸序列一致性为79.98%~98.08%。对53份河南不同产区的苹果叶片样品进行苹果花叶病毒(apple mosaic virus,Ap MV)和Ap NMV的检测,结果显示花叶病症样品中均检测出Ap NMV,未检测到Ap MV,表明Ap NMV可能是引起河南地区苹果花叶病的主要病原。 展开更多
关键词 苹果 病毒病 宏病毒组测序技术 RT-PCR 检测 苹果花叶病
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