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Apple stem grooving virus is associated with leaf yellow mottle mosaic disease on Citrus grandis cv. Huangjinmiyou in China 被引量:1
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作者 XUAN Zhi-you ZHANG Song +7 位作者 LI Ping YANG Fang-yun CHEN Hong-ming LIU Ke-hong ZHOU Yan LI Zhong-an ZHOU Chang-yong CAO Meng-ji 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第7期2031-2041,共11页
Although it is usually latent on citrus, apple, and pear, apple stem grooving virus(ASGV) poses a great risk to many sensitive cultivars. Since severe leaf yellow mottle mosaic(LYMM) symptoms have been observed on Hua... Although it is usually latent on citrus, apple, and pear, apple stem grooving virus(ASGV) poses a great risk to many sensitive cultivars. Since severe leaf yellow mottle mosaic(LYMM) symptoms have been observed on Huangjinmiyou(HJY) pummelos(Citrus grandis cv. Huangjinmiyou), a commercial variety that is widely cultivated in South China, high throughput sequencing(HTS) was used to find potential pathogens and only three divergent ASGV variants were identified. The three ASGV variants shared 81.03–82.34% genome-wide pairwise identities with each other, and were separately closest to other ASGV variants from different hosts and/or geographical regions, as indicated by viral phylogenies. However, these new variants may have developed from viral interstrain interactions, based on the results of recombination analysis. A large-scale survey using reverse transcription-PCR(RT-PCR) protocols designed for the three ASGV variants revealed a high incidence(92.7–100%) of ASGV in symptomatic HJY trees from 11 major citrusproducing regions in China. None of ASGV were detected in asymptomatic trees. Temperature treatments applied to the symptomatic HJY plants showed that ASGV is sensitive to high temperatures(30–35°C), at which not only the plants recovered, but also the viruses were not detected by RT-PCR, while at low temperatures(20–24°C), both the symptoms and viruses remained detectable. These data show that ASGV is associated with the LYMM disease prevalent on HJY in China, and this is the significant basis especially of taking appropriate measures timely to manage the disease. 展开更多
关键词 CITRUS PUMMELO apple stem grooving virus genome sequence THERMOTHERAPY
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3种苹果病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立
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作者 李紫腾 潘媛 +4 位作者 马子文 胡同乐 王树桐 曹克强 王亚南 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期84-92,共9页
苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)对果树的生长发育危害严重,而且复合侵染几率较高,为快速、灵敏和高效的检测3种病... 苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)对果树的生长发育危害严重,而且复合侵染几率较高,为快速、灵敏和高效的检测3种病毒,本研究根据ASPV、ASGV和ApNMV基因组保守序列设计特异引物建立了3种病毒高灵敏度的实时荧光定量PCR检测体系(Real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)。结果表明:引物ASGV-qF/qR-1、ASPV-qF/R-2和ApNMV-qF/R-3有较高的特异性,最适宜的退火温度分别为60℃、58℃和58℃,ASGV、ASPV和ApNMV 3种病毒的RT-qPCR体系比常规RT-2 PCR检测体系灵敏度高100倍,最低检出限分别为82.6、1.49×10^(2)和13.3 copies/μL。检测体系的Ct值的变异系数均小于5%,组间的变异系数在5%以内。河北农业大学果园中经RT-PCR确定带毒的88棵苹果树RT-qPCR检出率为100%,表明建立的RT-qPCR方法的可靠性和稳定性高,适用于田间果树3种病毒的检测,为苹果病毒的准确诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 荧光定量RT-PCR检测体系
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云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异 被引量:7
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作者 姬盼 王连春 +3 位作者 孔宝华 李晓鹏 曹克强 马钧 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期397-403,共7页
【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携... 【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%~93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%~98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(asgv) CP外壳蛋白 克隆 序列分析
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5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
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作者 胡国君 范旭东 +4 位作者 李军 任芳 孙喜陈 张尊平 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第10期79-83,88,共6页
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNM... 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。 展开更多
关键词 苹果 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果坏死花叶病毒 苹果锈果类病毒 多重PCR
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苹果茎沟病毒侵染对嘎拉苹果果实品质的影响 被引量:2
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作者 贾晓君 胡国君 +3 位作者 张尊平 范旭东 任芳 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第3期18-22,共5页
为了明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)侵染对苹果果实品质的影响,以单一接种ASGV的嘎拉苹果盆栽树为材料,测定果实单果重、纵横径、硬度、维生素C、可溶性固形物、糖酸组分、花色苷组分以及香气物质含量等。结果表明,... 为了明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)侵染对苹果果实品质的影响,以单一接种ASGV的嘎拉苹果盆栽树为材料,测定果实单果重、纵横径、硬度、维生素C、可溶性固形物、糖酸组分、花色苷组分以及香气物质含量等。结果表明,与健康植株相比,感染ASGV植株的果实纵横径无明显变化,单果重、果实硬度、可溶性固形物含量和可溶性糖含量显著降低,有机酸含量增加,香气组分占比发生改变,果皮中4种花色苷的含量均显著降低。 展开更多
关键词 苹果 苹果茎沟病毒 侵染 果实品质
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通辽市塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒的检测及变异分析
6
作者 张悦东 孙平平 +4 位作者 李小燕 杨荣 王宝侠 张磊 李正男 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期978-987,共10页
【目的】明确通辽地区塞外红苹果(Maluspumila‘Saiwaihong’)中苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和苹果茎沟病毒(ASGV)3种苹果潜隐病毒的普遍率和遗传多样性。【方法】从通辽市开鲁县8个乡镇随机采集了96份塞外红苹果枝条... 【目的】明确通辽地区塞外红苹果(Maluspumila‘Saiwaihong’)中苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和苹果茎沟病毒(ASGV)3种苹果潜隐病毒的普遍率和遗传多样性。【方法】从通辽市开鲁县8个乡镇随机采集了96份塞外红苹果枝条,采用RT-PCR法对样品进行3种苹果潜隐病毒检测。对检测为阳性的样品进行病毒基因克隆、测序,并进行序列一致性分析和系统发育分析。【结果】检测结果表明,被检测的塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒均有不同程度的发生,并且存在2种或3种病毒的复合侵染。基于CP基因对病毒一致性和变异情况进行分析,结果表明,来源于塞外红苹果的29个ACLSV分离物的核苷酸序列一致性为78.1%~99.9%,与其他15个已知的ACLSV分离物的一致性为69.1%~93.6%;来源于塞外红苹果的12个ASPV分离物的核苷酸序列一致性为83.6%~99.7%,与其他15个已知的ASPV分离物的一致性为75.4%~91.5%;来源于塞外红苹果的21个ASGV分离物的核苷酸序列一致性为96.4%~100.0%,与其他已知的40个ASGV分离物的一致性为89.9%~98.9%。系统发育分析结果表明,44个ACLSV分离物聚集在7个主支,其中29个塞外红苹果的ACLSV分离物分别位于JB组、Balatonl组、B6组和一个独立分支;27个ASPV分离物聚集为6支,其中12个塞外红苹果的ASPV分离物分别位于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ组;61个ASGV分离物聚集为8个支,其中塞外红苹果的21个ASGV分离物聚集在一起,形成独立分支。【结论】ACLSV、ASGV、ASPV均能侵染塞外红苹果,并且发生率较高。与其他来源的病毒相比,塞外红苹果的3种病毒分离物,各种内各分离物彼此之间的序列一致性较好并且进化关系较近。研究结果为塞外红苹果产业绿色、健康、持续发展提供基本理论依据。 展开更多
关键词 塞外红苹果 RT-PCR 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 苹果茎沟病毒
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利用高通量测序检测新疆野苹果上的病毒
7
作者 米美璇 张志想 +2 位作者 李世访 战斌慧 麦合木提江·米吉提 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期247-252,共6页
新疆野苹果Malus sieversii(Ledeb.)Roem.是苹果的祖先,也是重要的育种遗传资源,常用作砧木。近年来,新疆野苹果的分布面积骤减,对其的保护越来越重要。本研究采用高通量测序技术,对采自新疆伊犁天山野果林的26份样本进行病毒检测,检测... 新疆野苹果Malus sieversii(Ledeb.)Roem.是苹果的祖先,也是重要的育种遗传资源,常用作砧木。近年来,新疆野苹果的分布面积骤减,对其的保护越来越重要。本研究采用高通量测序技术,对采自新疆伊犁天山野果林的26份样本进行病毒检测,检测到苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)和苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)。通过RT-PCR检测所有样品(127份),检测到ACLSV、ASPV和苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV),检出率分别为22%、19.7%和11%。结合RACE PCR技术扩增得到ASGV新疆野苹果分离物基因组全长序列,暂时命名为ASGV-XJ。去除3′末端poly(A)后的长度为6506 bp,有两个彼此重叠的开放阅读框(open reading frame,ORF),ORF1(47-6364 nt)编码一个241 kD的多聚蛋白,包含甲基转移酶(methyltransferase)、木瓜蛋白酶(papain-like-protease)、解旋酶(nucleotide triphosphate-binding helicase)、RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase)和C端的外壳蛋白(coat protein,CP)等;ORF2(4798-5760 nt)编码一个36 kD的运动蛋白(movement protein,MP)。系统发育分析表明,分离物间没有表现出寄主专一性和地理分布规律。上述结果对新疆野苹果的保护工作有重要的参考意义。 展开更多
关键词 新疆野苹果 高通量测序 苹果茎沟病毒
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苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的鉴定提纯和酶联法检测 被引量:29
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作者 王小凤 李秋波 +3 位作者 王荣 洪霓 王国平 刘福昌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期137-144,共8页
苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观... 苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观察,W-55和W-29病毒颗粒长度分别为800 nm 和650nm。用 CLSV W-55分离物制备的兔抗血清效价为1/3200,用 SGV PV-71(ATCC)分离物制备小鼠腹水抗体效价为1/800,均用间接 ELISA 法测定。对感染 CLSV 和 SGV 的昆诺藜、苹果叶和花瓣检测结果表明,P/N 值具有显著性。本工作为苹果无毒苗木的生产提供了快速、灵敏的病毒检测手段。 展开更多
关键词 茎沟病毒 苹果 褪绿叶斑病毒
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实时荧光RT-PCR一步法检测苹果茎沟病毒 被引量:23
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作者 郭立新 向本春 +3 位作者 陈红运 段维军 陈洪俊 朱水芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期57-61,共5页
根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值... 根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(asgv) 实时荧光RT-PCR 检测 TAQMAN-MGB探针
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苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备 被引量:5
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作者 宋艳苏 郑银英 +2 位作者 李丽娜 王国平 洪霓 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期752-756,共5页
构建了来源于梨的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)分离物P-4-1-69和P-L2的原核表达载体pET-P-4-1-69和pET-P-L2,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol.L-1 IPTG下诱导表达。SDS-PAGE和用商业化ASGV抗体对诱导表达产物进行Weste... 构建了来源于梨的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)分离物P-4-1-69和P-L2的原核表达载体pET-P-4-1-69和pET-P-L2,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol.L-1 IPTG下诱导表达。SDS-PAGE和用商业化ASGV抗体对诱导表达产物进行Western Blot分析结果表明,2个分离物的外壳蛋白基因(cp基因)在大肠杆菌中成功地进行了高效表达,重组外壳蛋白的大小约为31 ku。分别用含分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的胶条免疫大耳白兔,制备了抗ASGV重组外壳蛋白的抗血清。采用间接ELISA法用所制备的抗血清对回收的重组外壳蛋白进行检测,当抗分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的抗血清分别稀释512 000倍和64 000倍时,检测结果仍为阳性。Western Blot分析和组织免疫印迹检测(Tissue blotting immunoassay,TBIA)结果表明,纯化的抗体具有较强的特异性,可有效检测梨样品中的ASGV。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 CP基因 原核表达 抗血清
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苹果茎沟病毒研究进展 被引量:8
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作者 郭立新 向本春 +2 位作者 朱水芳 陈文炳 缪婷玉 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期714-720,共7页
苹果茎沟病毒在仁果类果树上的感染较普遍,且一般不产生明显症状,给生产带来严重损失。对于该病毒病害,较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展和培育与栽培无病毒苗木。较为系统地综述了国内外苹果茎沟病毒的分布与危害、生物学特性... 苹果茎沟病毒在仁果类果树上的感染较普遍,且一般不产生明显症状,给生产带来严重损失。对于该病毒病害,较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展和培育与栽培无病毒苗木。较为系统地综述了国内外苹果茎沟病毒的分布与危害、生物学特性、基因组结构与序列分析及检测方法等方面的研究进展。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 基因组结构 序列 检测方法
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苹果茎沟病毒的提纯和检测 被引量:8
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作者 王小凤 黄谊 +1 位作者 王文慧 刘骏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期258-264,共7页
用生物学和血清学方法从苹果分离鉴定出苹果茎沟病毒G-2和TC-3分离物,采用皂土澄清、15%蔗糖垫超离心、10%~40%蔗糖梯度离心等步骤,获得提纯的病毒样品,紫外吸收比值A_(260/280)为1.15。13%SDS-PAGE法测定的病毒外壳蛋白分子量为31... 用生物学和血清学方法从苹果分离鉴定出苹果茎沟病毒G-2和TC-3分离物,采用皂土澄清、15%蔗糖垫超离心、10%~40%蔗糖梯度离心等步骤,获得提纯的病毒样品,紫外吸收比值A_(260/280)为1.15。13%SDS-PAGE法测定的病毒外壳蛋白分子量为31000。用提纯的苹果茎沟病毒G-2分离物制备的兔抗血清,PTA-ELISA测定的效价为1/64000,特异性强。用PAS-ELISA可成功地检测出苹果茎沟病毒,此外还试验了DAS-ELISA,并证明其检测苹果茎沟病毒的效果与PAS-ELISA一致。 展开更多
关键词 植物病毒 苹果茎沟病毒 提纯 检测 苹果病害
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苹果茎沟病毒的RT-PCR检测及其在我国苹果产区的分布 被引量:4
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作者 冀志蕊 赵绪生 +4 位作者 王树桐 胡同乐 杨军玉 王亚南 曹克强 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期58-64,共7页
为开发苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)田间样本RT-PCR检测方法以及揭示我国AS-GV的发生情况,本研究以染病的苹果组培苗为试材,对ASGV RT-PCR检测方法进行了优化并利用优化的检测体系对我国苹果产区ASGV的发生情况进行了... 为开发苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)田间样本RT-PCR检测方法以及揭示我国AS-GV的发生情况,本研究以染病的苹果组培苗为试材,对ASGV RT-PCR检测方法进行了优化并利用优化的检测体系对我国苹果产区ASGV的发生情况进行了检测。结果表明:引物ASGVS特异性最好,优化的RT-PCR检测体系能够在4,7和11月份检测果树树皮组织的带毒情况,灵敏度达到能够检测2.5×10-2μg新鲜样本,适于苹果ASGV田间样本检测。通过对我国苹果产区ASGV的检测发现,被检测的13个省(市/区)苹果上几乎都有ASGV发生,只有甘肃省泾川样本未检测到该病毒,采集的327个样本带毒率达73.7%。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 RT-PCR 体系优化 分布
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苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR反应体系的优化 被引量:6
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作者 郭立新 向本春 朱水芳 《北方园艺》 CAS 北大核心 2009年第3期8-11,共4页
以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,探讨苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR技术中反应体系的主要成分对... 以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,探讨苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR技术中反应体系的主要成分对扩增结果的影响。最终确定了RT-PCR反应体系的最佳条件为:25μL体系中,Mg2+浓度为3.5 mM,引物浓度为0.6μM,探针浓度为0.6μM,总RNA含量为20 ng。利用此反应体系进行扩增,△Rn值比未优化时高出一个数量级,表明该体系适合ASGV实时荧光RT-PCR检测分析。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(asgv) 实时荧光RT-PCR 优化
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3种苹果潜隐性病毒一步多重RT-PCR检测体系的优化 被引量:2
15
作者 陈红霞 邵建柱 +2 位作者 孙建设 乔雪华 曹晓凤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期51-57,共7页
为建立更为快速准确的苹果潜隐性病毒检测方法,以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的田间苹果成龄树为试材,设计合成了扩增目的片段为273bp(ASGV)、358bp(ACLSV)和432bp(ASPV)的3对特异性引物,并... 为建立更为快速准确的苹果潜隐性病毒检测方法,以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的田间苹果成龄树为试材,设计合成了扩增目的片段为273bp(ASGV)、358bp(ACLSV)和432bp(ASPV)的3对特异性引物,并对影响RT-PCR体系的主要参数进行试验优化。结果表明:建立的一步多重RT-PCR体系可以实现对3种主要潜隐性病毒的特异性检测;通过对田间多个样品的检测验证,表明该方法的准确性和灵敏度都很高,并缩短了单个样品的检测时间,极大地提高了工作效率。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 一步多重RT—PCR
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苹果茎沟病毒RT-PCR检测技术 被引量:8
16
作者 李文慧 牛建新 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期105-107,共3页
用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳... 用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳蛋白基因源序列比较,其同源性高达93%。通过多次重复实验验证,该方法能很好地检测苹果茎沟病毒。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 逆转录-聚合酶链式反应 克隆 序列分析
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应用分析双链RNA技术诊断苹果潜隐性病毒病 被引量:5
17
作者 叶华智 伍光庆 冷怀琼 《四川农业大学学报》 CSCD 1991年第2期195-199,T001,共6页
本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或... 本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或花瓣用酚萃取,经CF-11纤维素层析纯化,再用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴乙锭或银盐染色分析ds RNA电泳图谱。经脱毒的苹果树叶片,未发现有病毒的ds RNA存在。文中还报导了使用这一技术诊断苹果潜隐性病毒的有关技术条件。 展开更多
关键词 苹果 潜隐病毒 病毒 诊断 双链RNA
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柑桔碎叶病毒研究 被引量:3
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作者 陈集双 周雪平 +1 位作者 李德葆 张天淼 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期173-180,共8页
用汁液摩擦接种方法对柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)进行了进一步的生物学鉴定.结果表明,该病毒除在豇豆上引起枯斑外,还侵染克里芙兰烟(Nicotianaclevilandii)产生系统斑驳和轻花叶,侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和... 用汁液摩擦接种方法对柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)进行了进一步的生物学鉴定.结果表明,该病毒除在豇豆上引起枯斑外,还侵染克里芙兰烟(Nicotianaclevilandii)产生系统斑驳和轻花叶,侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和苋色藜(C.amaranticolor)引起系统坏死和花叶,侵染鸡冠花(Celosia cristata)引起局部环斑.这些草本寄主均可作为CTLV的指示植物.在发病的柑桔叶汁液中,测得CTLV的稀释限点为10^(-5).经汁液摩擦接种,可以将CTLV从克里芙兰烟传播到木本指示植物柑桔和枳橙上.感病植物材料的组织超微结构观察结果表明:CTLV感染柑桔、枳橙、克里芙兰烟和昆诺藜均使其叶肉薄壁细胞的叶绿体出现淀粉沉积、叶绿体片层结构解体和消失;病毒在受感染的植株叶脉韧皮部细胞中紧密聚集,形成病毒结晶体;这种结构也出现在叶肉薄壁细胞中.这是关于该病毒组织病变的首次报道.用直接负染方法从感染CTLV的柑桔(枳橙)、克里芙兰烟和昆诺藜病叶中均能检查到线状病毒粒子,用改良的Deriick’s免疫电镜方法和琼脂双扩散方法测定均显示该病毒与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)有强阳性反应,用ASGV抗血清可以进行植物材料中CTLV的检测. 展开更多
关键词 柑桔碎叶病毒 寄主反应 组织病变
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苹果潜隐病毒的研究——Ⅱ.苹果茎沟槽病毒对苹果生理生化的影响 被引量:11
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作者 冷怀琼 袁永凯 徐瑞林 《四川农业大学学报》 CSCD 1991年第2期190-194,共5页
用金冠、富士二品种幼苗接种茎沟槽病毒(SGV)后,分期测定蛋白质、核酸、DNA、总氮、氨基酸、可溶性糖、铁和锌含量。结果表明:受SGV侵染的植株,核酸、蛋白质含量下降;DNA、总氮、游离氨基酸含量增加;铁含量增加,锌含量减少,可溶性糖含... 用金冠、富士二品种幼苗接种茎沟槽病毒(SGV)后,分期测定蛋白质、核酸、DNA、总氮、氨基酸、可溶性糖、铁和锌含量。结果表明:受SGV侵染的植株,核酸、蛋白质含量下降;DNA、总氮、游离氨基酸含量增加;铁含量增加,锌含量减少,可溶性糖含量增加。 展开更多
关键词 苹果 潜隐病毒 茎沟槽病毒 激素
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微量植物组织直接RT-PCR反应检测4种植物病毒的方法建立与优化 被引量:2
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作者 李姣 任秋蓉 +2 位作者 古蕾 朱晓换 王亚男 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第1期111-117,共7页
建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有... 建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有效检测了葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3)、苹果茎沟病毒(ASGV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和黄瓜花叶病毒(CMV);消除了传统RT-PCR制备RNA模板复杂耗时的缺点. 展开更多
关键词 微量植物组织直接RT-PCR反应 葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3) 苹果茎沟病毒(AS-GV) 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 黄瓜花叶病毒(CMV)
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