金冠苹果成熟胚离体诱导四倍体的研究

以自然授粉的‘金冠’苹果种子为材料,研究了秋水仙素处理成熟胚离体诱导四倍体技术和嵌合体分离方法。结果表明:将完整胚在0.5%秋水仙素+1%二甲基亚砜的混合溶液中暗处理48h,然后接种在MS+TDZ 1.0 mg·L^(-1)+IBA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+琼脂6g·L^(-1)的再生培养基中,变异率高达10.6%。与二倍体相比,四倍体试管苗生长缓慢,节间变短,叶片增大,叶形指数趋小化,气孔密度降低,保卫细胞增大。经压片法鉴定茎尖染色体数和流式细胞仪分析DNA含量,表明多数变异植株为同质四倍体。利用叶片离体再生器官技术,从诱导获得的嵌合体植株中分离出同质突变体。

苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素与２％二甲基亚砜的复合溶液处理苹果栽培品种嗄拉和千秋的试管苗离体叶片。结果表明，以０．５％秋水仙素溶液处理４天的效果最佳，诱变频率达５６１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上均发生了明显变异，与对照相比，变异株茎矮、粗壮、节间短，叶色浓厚，单位面积气孔数目减少，气孔体积增大，染色体数目加倍，２ｎ＝４ｘ＝６８（对照为２ｎ＝２ｘ＝３４），核仁数目增加。梢端组织学切片证实，获得的同质四倍体频率为８６％。

苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素溶液处理苹果的栽培品种嘎拉试管苗的离体叶片，发现以０．５％的秋水仙素溶液处理４ｄ效果最佳，诱变频率达５６．１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上均发生了明显变异。与对照株比较，变异株茎矮、粗壮、节间短、叶片厚、叶色浓绿；叶背面的气孔体积增大，单位面积气孔数目减少、茸毛数量增加；染色体数目加倍，２ｎ＝４ｘ＝６８（对照２ｎ＝２ｘ＝３４），细胞核核仁数目增加。梢端组织学切片证明，变异株中同质突变体的频率达７３％。

秋水仙素处理离体叶片获得皇家嘎拉苹果四倍体植株

采用皇家嘎拉苹果（Malus domestica Borkh．）离体新梢叶片作为外植体，研究了不同浓度的秋水仙素长时间处理（5 d）诱导四倍体的效率。结果表明，以不定芽再生培养基附加25 mg／L秋水仙素效果最好，最高在36．7％的叶片外植体上获得了四倍体植株。高浓度（75～200 mg／L）秋水仙素处理严重抑制组织的再生。采用流式细胞技术测定出诱变植株的细胞核DNA含量比对照高出一倍，确定了植株为四倍体。四倍体植株不仅在遗传上而且在外观形态上也明显区别于二倍体。四倍体植株已移栽于大田，并进行了嫁接育苗和大树高接。