凋亡相关蛋白Apr-2的克隆、测序及初步表达

目的 :从HL 6 0细胞凋亡模型中克隆凋亡相关蛋白Apr 2编码区基因 ,并对其进行表达 ,为进一步研究Apr 2的结构功能及多克隆抗体的制备奠定基础 .方法 :建立HL 6 0细胞凋亡模型 ,提取HL 6 0凋亡细胞总RNA ,以RT PCR方法获取Apr 2cDNA编码区全序列 ,将其与PGEM TEasy载体连接 ,转化E .coliDH5α ,构建重组克隆载体PGEM TEasy/apr 2 ,测序正确后 ,将目的片段亚克隆入PGEX 4T 2原核表达载体 ,并转化大肠杆菌 ,IPTG诱导重组蛋白质表达 ,分析蛋白质在细菌中的表达分布 ,进行凝胶自动扫描分析 .结果 :序列分析表明 ,与GenBank中已登录的Apr 2cDNA编码区序列比较 ,完全一致 .表达的融合蛋白占菌体总蛋白质的 4 0 %以上 ,主要以包涵体的形式存在 .结论 :成功的获得了细胞凋亡模型HL 6 0中Apr 2cDNA编码区的克隆及其融合蛋白表达产物 .

枯草杆菌Ki－2－132高表达遗传工程系统的研究

利用芽孢杆菌多效调控基因ｈｐｒ、ｄｅｑＱａ、ｄｅｇＲ、ｄｅｇＵ／５３２（Ｈｙ）等和枯草杆菌Ｋｉ－２－１３２自身的积生孢、感受态相关基因的协调作用，构建了系列的高表达遗传工程宿主。这些宿主对于ＡＰｒＥ都实现了较高水平的表达。其中，由ｈｐｒ和ｃｏｍ、ｓｐｏ等配合的宿主表达ＡｐｒＥ的能力比野生型宿主提高了１００—２００倍。