期刊文献+

二次检索

题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
猪胸膜肺炎放线杆菌江西分离株ApxIVA基因PCR扩增及基因分析 被引量:4
1
作者 刘琬婧 陶明江 +6 位作者 郑教雀 孙明 张祥华 邓舜州 王萍 何后军 邬向东 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期378-382,394,共6页
猪胸膜肺炎是引起保育到育肥阶段猪生产性能下降的一种重要传染病,该病的发生往往与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等病毒混合感染,引起猪群大批死亡,严重危害养猪生产。该病的病原为胸膜肺炎放线菌(APP),为促进江西省养猪业的发展,控制猪胸... 猪胸膜肺炎是引起保育到育肥阶段猪生产性能下降的一种重要传染病,该病的发生往往与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等病毒混合感染,引起猪群大批死亡,严重危害养猪生产。该病的病原为胸膜肺炎放线菌(APP),为促进江西省养猪业的发展,控制猪胸膜肺炎的流行,项目组从病原入手进行研究,前期已经分离到多株APP,并已经初步鉴定血清型。试验针对其毒素ApxIVA基因进行研究,参考NCBI上登录号为AX002405的ApxIVA毒素基因,设计目的基因大小为1 284 bp的特异性引物1对,并在上下游引物内加入酶切位点EcoRⅠ与SalⅠ进行毒素基因克隆。结果表明江西源APP应用PCR方法扩增ApxIVA基因,产物插入克隆载体,测序后与NCBI发表的APP ApxIVA基因序列对比分析,同源在98%以上,表明成功克隆到APP的ApxIVA基因。通过与10个国内外APP基因序列对比,发现本菌株与CP000569、FJ848575、FJ848573、GQ332268同源性较高,其中FJ848575、FJ848573、GQ332268均为中国分离株,CP000569为加拿大分离株。 展开更多
关键词 APP apxiva基因 PCR扩增
下载PDF
猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化
2
作者 石琴 逯忠新 +3 位作者 贺英 赵萍 储岳峰 高鹏程 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期246-249,256,共5页
以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转... 以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 apxiva 表达 蛋白纯化
下载PDF
胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立 被引量:13
3
作者 黄红亮 周锐 +3 位作者 陈美玲 刘建杰 徐晓娟 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期294-299,共6页
参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,... 参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA_ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA_ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA_ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 APXIV 克隆与表达 ELISA 鉴别诊断
下载PDF
猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIVA基因特异片段的克隆和表达 被引量:7
4
作者 彭永刚 刘思国 +3 位作者 王牟平 宫强 王春来 沈国顺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期103-106,共4页
以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25_4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18_T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX_6P_1中,构建成重组表达质粒pGEX_apxI... 以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25_4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18_T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX_6P_1中,构建成重组表达质粒pGEX_apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS_PAGE电泳。结果表明,25_4株apxIVAgene与基因库中标准7型apxIVAgene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符。apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 分泌蛋白 载体 克隆 表达 apxⅣA
下载PDF
Identification and Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in Infected and Subclinically Infected Pigs by Multiplex PCR Based on the Genes ApxIVA and OmlA 被引量:8
5
作者 XIAO Guo-sheng CAO San-jie DUAN Li-li WEN Xin-tian MA Xiao-ping CHEN Hua-mei 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第2期146-154,共9页
PCRs based on different genes of Actinobacillus pleuropneumoniae have been developed for detecting and identifying A. pleuropneumoniae. Some of them could amplify positive fragments from the phylogenetically closely r... PCRs based on different genes of Actinobacillus pleuropneumoniae have been developed for detecting and identifying A. pleuropneumoniae. Some of them could amplify positive fragments from the phylogenetically closely related species bacteria. To improve veracity and specificity of PCR, a species-specific multiplex PCR assay was developed to identify and detect A. pleuropneumoniae, based on the 3'-terminus of the species-specific apxlVA gene and the already existing species-specific primers in the omlA gene. Both 346-bp and 950-bp fragments could be simultaneously amplified from all A. pleuropneumoniae reference strains and isolates, and the species specificity of the assay was evaluated with a collection of ten strains representing eight different species bacteria including species normally found in the respiratory tracts of swine. All of these strains turned out negative in the multiplex PCR. All sequences of products of multiplex PCR randomly sampled were also correct. The sensitivity of the multiplex PCR was determined to be 10 pg of A. pleuropneumoniae DNA. The multiplex PCR and bacterial isolation were compared to determine their sensitivities by using experimentally infected pigs and clinical disease pigs. The multiplex PCR was more sensitive than bacterial isolation. The multiplex PCR was also evaluated on mixed bacterial cultures from clinical healthy pigs. 26/100 (26%) of the subclinically infected pigs were detected from clinical healthy pigs. The results indicate that the multiplex PCR assay is a sensitive, highly specific, and effective diagnostic tool for identification and detection of A. pleuropneumoniae. 展开更多
关键词 multiplex PCR Actinobacillus pleuropneumoniae pig bacteria apxiva and omlA genes
下载PDF
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP诊断方法的建立及耐药性调查 被引量:2
6
作者 余波 杨莉 +3 位作者 史开志 任荣清 徐景峨 杨粤黔 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第22期165-167,共3页
为建立快速诊断猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的方法和耐药情况,根据Gen Bank中的APP apx IVA基因,设计合成2对引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)扩增条件的优化,建立了APP LAMP诊断方法,同时对分离到的APP进行耐药性分析。结果显示,... 为建立快速诊断猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的方法和耐药情况,根据Gen Bank中的APP apx IVA基因,设计合成2对引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)扩增条件的优化,建立了APP LAMP诊断方法,同时对分离到的APP进行耐药性分析。结果显示,建立的LAMP诊断方法最低核酸检测量为2 pg/μL,对猪源大肠杆菌、猪源沙门氏菌、猪源支原体、副猪嗜血杆菌、猪源多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性,扩增反应30 min内完成,结果肉眼可见。分离得到的31株APP,耐药性较强。结果表明,建立的方法可满足基层现场快速检测需要,对分离得到的31株APP耐药性分析表明,APP耐药性较严重。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎放线杆菌 apxiva基因 环介导等温扩增 耐药性分析
下载PDF
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP方法的建立 被引量:8
7
作者 刘亚娟 聂福平 +9 位作者 杨俊 王昱 石宝石 保雨 叶自霞 王国民 李贤良 李应国 肖进文 刘力 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期200-205,共6页
为建立快速检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的鉴别方法,衣研究根据APP ApxIVA基因的保守区设计6条环介导等温扩增(LAMP)引物,利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c实时浊度仪对反应体系和条件进行优化,建立了APP的LAMP... 为建立快速检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的鉴别方法,衣研究根据APP ApxIVA基因的保守区设计6条环介导等温扩增(LAMP)引物,利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c实时浊度仪对反应体系和条件进行优化,建立了APP的LAMP方法。结果显示:该方法在64℃下反应15rainDNA即可出现扩增,扩增后2~3min内即可判定结果,最低检测限为0.307ng/L,具有良好的重复性及稳定性,与其他病原菌无交叉反应,同时,试验结果可实现肉眼可视化观察。采用建立的LAMP方法与SN/T14472011标准公布的方法同时对36份临床疑似APP样品进行检测分析,结果显示:APP阳性10份,阴性26份,两种方法的符合率为100%。本研究建立的方法为防止猪传染性胸膜肺炎的传播提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 环介导等温扩增技术(LAMP) apxiva基因
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部