益气养阴祛瘀方对干燥综合征颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响

目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(SS)患者颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响。方法制备不同剂量SD大鼠益气养阴祛瘀方含药血清,再分别给予以下处理:空白组(仅含RPMI1640培养液),空白血清组(10%空白血清+RPMI1640培养液),分别予含5%、10%、15%、20%不同浓度的含药血清+RPMI1640培养液组,共6组。培养细胞24 h后,分别以倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜观察细胞,Western blot检测细胞中AQP5及M3R蛋白表达水平。结果益气养阴祛瘀方含药血清作用后,激光共聚焦显微镜观察抗体标记细胞的荧光强度明显增强。Western blot检测AQP5与M3R的蛋白表达均有上调。含药血清组中的AQP5及M3R蛋白的表达明显高于空白血清组,且10%、15%含药血清组高于5%含药血清组(P<0.05),但与20%相差不大(P>0.05)。结论益气养阴祛瘀方可以上调颌下腺细胞中AQP5及M3R蛋白的表达,而且与之成一定的剂量依赖关系。

AQP5在结直肠癌中的表达及其与临床预后的关系

目的探讨水通道蛋白5(AQP5)的表达与结直肠癌临床病理及预后关系。方法收集术前未予任何治疗的临床病例资料齐全的原发性结直肠癌病例45例,采用免疫组化法检测AQP5的表达。比较AQP5表达与年龄、肿瘤大小、临床分期、肿瘤部位、淋巴结、病理类型之间的关系,并结合随访资料分析AQP5表达与否和预后的关系。结果45个肿瘤标本中,14例(31.1%)高表达AQP5,29例(64.4%)中度表达,2例(4.4%)无AQP5染色。癌旁和正常组织中AQP5表达率分别为3例(6.67%)和3例(6.67%)。AQP5的表达还与TNM分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.016)、远处转移(P=0.000)呈正相关。在年龄、性别、组织学分级和肿瘤大小中其表达没有统计学差异(P>0.05)。结论 AQP5可能被用作预测结直肠癌预后的良好指标。

急性肺损伤大鼠呼吸膜AQP1和AQP5的表达

目的确定水通道蛋白AQP1及AQP5是否在大鼠肺泡毛细血管膜(呼吸膜)表达,进而研究急性肺损伤(ALI)大鼠AQP1和AQP5的表达调节及激素干预的作用。方法采用亲和的抗人AQP1和AQP5抗体,应用免疫组化及免疫电镜的方法研究AQP1及AQP5在呼吸膜的分布。选用肺泡内灌注脂多糖(LPS)制作大鼠ALI动物模型,研究ALI时呼吸膜AQP1及AQP5的变化。结果免疫染色显示AQP1主要表达于正常肺组织的微血管内皮,而AQP5主要表达于肺泡I型上皮细胞。免疫组化分析进一步表明LPS灌注后4h^48h AQP1及AQP5在呼吸膜的表达均下降;AQP1蛋白于LPS灌注后24h及激素干预后有部分恢复(P<0.05),而AQP5无这种恢复现象。结论 ALI时AQP1及AQP5在呼吸膜的表达减少,提示ALI时AQP1和AQP5的下降表达可能与其液体转运的异常有关。

水通道蛋白AQP5在小鼠骨髓间充质干细胞中的免疫定位

水通道蛋白家族是由能够转运水和小的溶质分子透过细胞膜的膜蛋白分子构成。AQP5属于水选择性通道,其在机体组织内的表达非常广泛。间充质干细胞主要来源于骨髓和脂肪组织,能够诱导分化成间充质组织中的各类细胞。采用PCR、免疫印迹和免疫荧光技术分析了水通道蛋白AQP5在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达情况。结果表明:AQP5在RNA和蛋白质水平上都有表达,并且与CD90,CD44在小鼠骨髓间充质干细胞膜上共表达。

水通道蛋白AQP1和AQP5在腮腺黏液表皮样癌中表达的研究

目的:探究AQP1及AQP5在腮腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及分布。方法:采用免疫组织化学方法检测35例腮腺黏液表皮样癌(高分化18例,中分化10例,低分化7例)和20例正常腮腺组织AQP1和AQP5的表达及分布。结果:AQP1和AQP5在腮腺黏液表皮样癌中主要定位于组织的血管内皮细胞、腮腺腺泡上皮中,在腮腺正常组织中主要位于腮腺腺泡上皮。在癌中的表达量明显高于正常组织,差异显著性分别为P<0.01和P<0.05。分化程度不同的黏液表皮样癌组之间AQP1和AQP5表达相比差异也有显著性(P<0.01)。AQP1和AQP5的表达与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:AQP1和AQP5在腮腺黏液表皮样癌中均有表达,并可能与促进肿瘤血管的生成有关,与腮腺黏液表皮样癌的发生、发展和预后有明显的关系。

不同造模周期下云南春燥环境小鼠模型的比较研究

目的:探究不同造模周期对小鼠模型的影响,进一步阐释感燥时长与燥证发病的联系,优化造模周期的选择,全面、合理地评价云南春燥动物模型。方法:复制云南春燥环境的内、外因素作用于实验小鼠,并观测不同实验周期小鼠黏蛋白5ac(mucin 5ac,MUC5ac)、水通道蛋白-5(AQP5)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的变化。结果:7d组模型小鼠MUC5ac浓度较同周期组正常小鼠降低(P>0.05),14d组模型小鼠MUC5ac浓度降低(P<0.05),21d组模型小鼠MUC5ac浓度降低(P>0.05);7d组模型小鼠AQP5浓度升高(P>0.05),14d组模型小鼠AQP5浓度降低(P<0.05),21d组模型小鼠AQP5浓度降低(P>0.05);7d组模型小鼠IgA浓度降低(P<0.05),14d组模型小鼠IgA浓度显著降低(P<0.01),21d组模型小鼠IgA浓度升高(P>0.05);7d组模型小鼠IgG浓度明显升高(P<0.01),14d组模型小鼠IgG浓度显著升高(P<0.01),21d组模型小鼠血清IgG浓度升高(P<0.01)。结论:在不同造模周期下,小鼠MUC5ac、AQP5、IgG、IgA均出现了改变,以14d周期变化最为显著,初步认为14d可作为云南春燥小鼠模型的最佳造模周期。

祛风胜湿方对变应性鼻炎小鼠免疫球蛋白E及水通道蛋白5的影响

目的观察祛风胜湿方对变应性鼻炎小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)及水通道蛋白5(AQP5)的影响。方法以卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝基础致敏、局部以OVA激发复制变应性鼻炎小鼠模型,将其分为正常对照组、模型组、祛风胜湿方组、氯雷他定组。灌胃给药14天,观察各组对变应性鼻炎小鼠血清IgE、AQP5及鼻黏膜组织病理形态学的影响。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清IgE及AQP5均显著增高(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组的上述指标均显著降低(P<0.05)。结论祛风胜湿方作用机制可能与其抑制IgE及AQP5表达有关。本实验为揭示中医"风能胜湿"与"祛风止痒"理论提供了实验数据支持。

急性百草枯中毒大鼠肺损伤与水通道蛋白1和5表达的相关性研究

目的观察水通道蛋白1、5（AQP1、AQP5）表达与急性百草枯中毒大鼠肺损伤（ALI）的相关性，并探讨其作用机制。方法将实验大鼠分为百草枯中毒组（按第1、3、5天分亚组）及生理盐水对照组；中毒组（每亚组8只）腹腔注射百草枯，对照组（5只）在相同时间点给予等量的生理盐水腹腔注射；对比两组大鼠的肺组织病理学改变、肺湿重／干重比（W／D）及AQP1、AQP5的表达。结果光镜下见，百草枯中毒肺组织第1天与对照组比较，无明显改变；第3天肺毛细血管扩张、充血，肺泡腔内渗出、出血、肺泡呈代偿性肺气肿改变；第5天肺泡上皮细胞增生、肥大，肺泡腔及肺间质内中性粒细胞渗出，局部形成脓肿。肺W／D第1天与对照组比较差异无统计学意义；第3、5天明显高于对照组（P〈0．01）；第l、5天与第3天亚组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。中毒组血清及肺组织匀浆AQP1、AQP5定量与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；其中中毒第3天升高最明显；第1、3、5天组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。血清AQP1、肺组织匀浆AQP1及血清AQP5定量第1、3天均呈量效关系。结论AQP1、AQP5参与百草枯中毒ALI的形成，其表达与肺水肿程度相关。

海水淹溺急性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白5表达变化的研究

目的观测海水淹溺急性肺损伤（Au）大鼠肺组织水通道蛋白5（AQP5）表达变化。方法100只健康雄性Wistar大鼠随机分为两组，即海水淹溺组和对照组。海水淹溺组用气管吸人海水法建立模型，对照组除不吸人海水外，其他处理同海水淹溺组。分别于致伤后0．5、1、2、4及8h时点，取大鼠颈动脉血做血气分析，观察动脉血氧分压（PaO2）的变化；光镜下观察肺组织病理变化情况；采用免疫组织化学法检测肺组织表达与分布；采用RT—PCR方法检测AQP5mRNA表达。结果成功复制了大鼠海水淹溺AU模型：海水淹溺组在吸人海水后血PaO2明显下降，海水淹溺组各时点血PaO2显著低于对应时点对照组（P〈0．01）。光镜下可见海水淹溺组各时点肺组织有毛细血管充血、肺间质、肺泡水肿和灶性出血；对照组未见明显病理变化。免疫组化显示，海水淹溺组肺问质的毛细血管内皮AQP5的阳性表达，积分光密度值显著高于对照组的表达（P〈0．05）；海水淹溺组大鼠肺组织AQP5mRNA表达也显著高于对照组（P〈0．01）。结论海水淹溺ALI时肺组织AQP5蛋白及mRNA表达增加，AQP5在ALI／ARDS海水的转运中可能起着重要作用。

水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响

目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。

原发性干燥综合征患者唇腺组织水通道蛋白5的表达及意义

目的·探讨原发性干燥综合征(primary Sjögren's syndrome,pSS)患者唇腺组织中水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)、血清白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)的表达水平与病情活动之间的关系。方法·收集39例pSS患者的病例资料,检测红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和免疫球蛋白G(immunoglobulin,IgG)等炎症指标。行唇腺活检,根据Chisholm唇腺病理进行分级,将所有标本分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4组。免疫组织化学法检测唇腺组织AQP5的表达,ELISA法检测血清IL-21、β2-MG水平。结果·随着唇腺组织淋巴细胞数目的增加,AQP5蛋白表达量减少。唇腺组织AQP5的表达与IL-21、β2-MG、ESR、IgG呈负相关(r=-0.924,P=0.000;r=-0.366,P=0.022;r=-0.611,P=0.000;r=-0.741,P=0.000)。随着唇腺组织淋巴细胞数目的增加,血清IL-21表达增加,4组间IL-21的表达差异有统计学意义。血清β2-MG在各组间未见明显差异。结论·pSS患者唇腺组织AQP5的表达与淋巴细胞浸润有关,且AQP5、IL-21、β2-MG与病情活动度存在相关性,可作为生物学标志物,用于临床病情的评估。

新橙皮苷二氢查尔酮对流感病毒诱导小鼠肺气血屏障损伤的保护作用

目的 探讨新橙皮苷二氢查尔酮（NHDC）对流感病毒诱导小鼠肺气血屏障损伤的保护作用.方法 建立流感病毒感染小鼠肺炎模型,给予NHDC灌胃治疗.计算小鼠肺指数、湿干比值、肺组织切片HE染色观察其病理形态变化,ELISA法检测感染后第6天血清中IL-6、LTB4和ICAM-1的含量.免疫组化法检测肺组织水通道蛋白5（AQP5）蛋白表达水平.结果 流感病毒感染小鼠肺指数和湿干比值明显升高、肺组织间质炎性细胞渗出,以中性粒细胞浸润为主,伴明显的肺泡充血、水肿,肺组织AQP5蛋白表达水平明显下降;而NHDC可明显逆转上述病理症状.结论 NHDC对流感病毒诱导的小鼠肺组织气血屏障损伤有明显的保护作用,其可能是通过上调AQP5蛋白表达而发挥作用.

水通道蛋白1，5与肺部疾病关系的研究进展

水通道（Aquaporins，AQPs），是一组与水分子通过生物膜脂质双分子层转运有关的膜蛋白，其分布及病理生理意义日益受到各国学者的关注。目前已在哺乳动物中发现13种AQP售，其中AQP1、AQP5是分布于下呼吸道的主要水通道蛋白。研究表明，AQP1、AQP5可清除肺组织多余的水分，在肺泡和肺问质以及肺毛细血管间的水跨膜转运中发挥重要生理作用，在不同年龄阶段肺组织AQP5表达水平不同，产生一系列生理性动态变化，并且在许多肺脏疾病如哮喘、肺水肿、急性呼吸窘迫综合征、肺肿瘤等病理过程中扮演重要角色，是肺损伤的重要标记物。本文就近年来有关AQP1及AQP5的分布、功能及与肺疾病关系方面的研究进展作一综述，为临床肺脏疾病的诊治及预防提供新的思路与措施。

水通道蛋白5在唾液腺分泌中的作用及其临床应用

水通道蛋白5(AQP5)是一种能特异性跨膜转运水的蛋白,能显著增加细胞膜水通透性,参与水的分泌与吸收,并保持细胞内外的水平衡,在人体的外分泌功能中具有关键作用。近年来的研究发现,唾液腺分泌与AQP5的表达与定位有着不可分割的关系,临床上将AQP5作为治疗唾液腺分泌障碍的作用靶点取得了可观的治疗效果。该文就AQP5的结构、功能及其在唾液腺分泌中的作用及临床应用作一综述。

电针预处理对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠炎性细胞因子及水通道蛋白5的影响

目的探讨电针足三里穴预处理对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠的干预作用及可能机制。方法将SD大鼠随机分为正常、ALI4h、ALI6h、针刺+ALI4h和针刺+ALI6h组,ALI4h、ALI6h组大鼠气管内用LPS(2mg/kg)分别滴注4h和6h以诱导ALI,后两组大鼠在针刺预处理双侧足三里穴1周后于气管内分别滴注LPS4h和6h。各组均取血、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,计算BALF中白细胞总数及肺湿/干比(W/D),HE染色观察肺组织形态,ELISA方法检测血浆中AQP_5、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和BALF中AQP_5水平,免疫组化方法观察肺组织AQP_5表达。结果与正常组比较,ALI4h组白细胞计数、W/D增高(P<0.05)、肺泡总面积和肺组织面积之比(A/t)降低(P<0.05)以及IL-1β、IL-10、TNF-α含量显著增高(P<0.001);ALI6h组IL-6和IL-10含量明显增高(P<0.01);ALI4h、ALI6h组AQP_5含量显著降低(P<0.001)、积分光密度(IOD)明显降低(P<0.01)。与ALI4h组比较,针刺+ALI4h组白细胞计数与W/D降低(P<0.05)、IL-1β与TNF-α含量降低(P<0.05)、血浆及BALF中AQP_5含量均升高(P<0.05),针刺+ALI6h组血浆AQP_5含量有升高(P<0.05)。结论电针足三里穴预处理对LPS诱导的ALI大鼠具有抗炎、降低肺水肿的保护作用,且在诱导4h时的ALI中更佳,其机制可能与电针下调炎性细胞因子和上调AQP_5的表达有关。

化湿润燥方对干燥综合征模型小鼠颌下腺结构和功能的影响

目的:探索化湿润燥方对干燥综合征(SS)模型NOD/Ltj小鼠颌下腺组织病理损伤和功能的影响,以及对颌下腺细胞水通道蛋白5(AQP5)表达的调节作用。方法:以NOD/Ltj小鼠构建SS动物模型,选取9周龄雌性NOD/Ltj小鼠随机分为模型组、化湿润燥方组(7.15 g·kg^(-1)·d^(-1))、硫酸羟氯喹(HCQ)组(1.30 g·kg^(-1)·d^(-1)),选取9周龄雌性BALB/c小鼠为正常组,每组6只。给药8周,记录各组小鼠饮水量、唾液流率,观察各组小鼠颌下腺病理染色结果并进行评分,采用免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AQP5蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠饮水量明显增加(P<0.05)、唾液流率明显减低(P<0.05)。与模型组比较,化湿润燥方组小鼠饮水量明显降低(P<0.05)、唾液流率明显增加(P<0.05);HCQ组小鼠唾液流率明显增加(P<0.05)。颌下腺组织病理结果显示,与正常组比较,模型组小鼠病理评分、淋巴细胞浸润灶数目、淋巴浸润灶面积百分比均明显增高(P<0.05)。与模型组比较,化湿润燥方组的病理评分、淋巴细胞浸润灶数目均明显降低(P<0.05),化湿润燥方组和HCQ组的淋巴浸润灶面积百分比明显降低(P<0.05)。IHC及Western blot结果显示,与空白组比较,模型组小鼠AQP5蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。与模型组和HCQ组比较,化湿润燥方组AQP5蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论:化湿润燥方可以改善SS模型小鼠颌下腺腺泡细胞的分泌功能和腺体结构损害,其作用机制可能与上调颌下腺细胞AQP5蛋白的表达水平有关。

当归对阴虚哮喘小鼠的平喘作用及肺组织中水通道蛋白5表达的影响

目的探讨当归对阴虚哮喘小鼠的平喘作用及对肺组织中水通道蛋白5(AQP5)表达的影响。方法通过注射卵清白蛋白(OVA)致敏、吸入OVA激发的方法复制哮喘小鼠模型,实验后期给予甲状腺素复制阴虚哮喘模型,观测哮喘发作及其程度、肺功能、肺液清除功能,血清白介素-13(IL-13)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平和肺组织中AQP5及其基因的表达。结果当归能抑制哮喘发作并缓解其症状,改善肺功能,促进肺组织AQP5及其基因的表达,降低血清IL-13与TNF-α的水平;当归与地塞米松配伍后,对改善肺功能、调节AQP5及其基因表达等有一定的协同作用。结论当归具有一定的平喘作用,调节AQP5及基因表达进而促进肺组织水代谢平衡是其作用机制之一。

寒饮蕴肺证大鼠病理模型的建立与评价

目的:基于“形寒寒饮则伤肺”理论建立寒饮蕴肺证大鼠病理模型,并从宏观功能学及微观分子学角度进行可靠性评价。方法:应用冷冻方法施加“形寒”、灌胃冰水方法施加“饮冷”及冷水浴施加“劳则气耗”等因素,复制寒饮蕴肺证大鼠病理模型。通过观察大鼠体质量及一般行为学、肺组织病理形态学变化,肺功能分析系统检测肺功能参数,ELISA法检测肺组织环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,免疫组化法检测水通道蛋白5(AQP5)、黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达,以对模型进行可靠性评价。结果:与对照组比较,模型组大鼠在宏观功能表现上,出现明显的寒饮蕴肺证症状及体征,体质量差值显著下降(P<0.01),肺功能各指标显著改变(P<0.01);在微观分子表达上,cAMP/cGMP比值显著减低(P<0.01),TNF-α表达显著升高(P<0.01),AQP5表达显著降低(P<0.01)。结论:该模型的致病因素、病理改变、实验室指标及临床特征方面均与临床典型的寒饮蕴肺证相似,通过该方法建立的寒饮蕴肺证大鼠病理模型是一种贴近自然发生疾病的病理模型,具有可行性与可靠性。