UPLC测定不同牛大力样品中刺桐碱的含量

目的:优化牛大力中刺桐碱的提取方法,并建立测定牛大力中刺桐碱含量的超高效液相色谱(UPLC)方法,从而比较不同牛大力中刺桐碱的含量。方法:采用单因素和正交实验优化牛大力中刺桐碱的提取,含量测定采用Agilent XDB-C_(18)(1.8μm,2.1×100 mm)色谱柱,乙腈水溶液梯度洗脱,检测波长278 nm,流速0.3 mL/min,柱温30℃。结果:确定牛大力中刺桐碱80℃水浴回流提取的最佳条件为料液比为1∶15 g/mL,提取时间为1.5 h,乙醇浓度为70%;建立的刺桐碱含量测定方法快速、准确、稳定、可靠。结论:22个不同的牛大力样品中刺桐碱含量差别较大,与品种、生长环境和生长年限等因素有关。

牛大力水提物对斑马鱼抗氧化和免疫能力的影响

为探究牛大力(Millettia speciosa Champ.,MSP)水提物对斑马鱼(Danio rerio)抗氧化和免疫能力的影响,本研究在斑马鱼养殖水体中加入4个不同水平(5、15、25和35 mg/L)的MSP水提物分别饲养,14 d后分析斑马鱼肠道、肝脏的抗氧化能力和免疫指标,并使用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行攻毒试验,统计攻毒后各组斑马鱼的死亡率。结果表明,MSP水提物25 mg/L组斑马鱼肠道和肝脏的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、溶菌酶(Lysozyme,LZM)的活性和总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)均显著高于空白对照组,同时丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量明显降低;与免疫相关的防御素(Defensins)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα)、核转录因子κB(Nuclear factorκB)、白细胞介素-1(Interleukin-1)、溶菌酶和补体(Complement)等基因(分别简写为defbl1、tnf-α、nfκb、il-1β、lyz、c3a)的相对表达量也显著高于空白对照组(P<0.05)。嗜水气单胞菌感染结果显示,试验组的存活率均高于空白对照组,其中35 mg/L组免疫保护率达到最高,为28.6%。由此可知MSP水提物可以有效提高斑马鱼的抗氧化和免疫能力,增强其机体的免疫力。

牛大力总黄酮提取工艺优化及其抗氧化活性研究

采用超声波辅助法提取牛大力总黄酮。在单因素试验的基础上,通过响应面法优化总黄酮的提取工艺,并评价其抗氧化活性。结果表明:最佳提取工艺为乙醇体积分数59%、液料比53∶1 (mL/g)、提取时间50 min、提取温度67℃,在此条件下总黄酮提取量为3.357 mg/g。牛大力总黄酮对ABTS、OH自由基的IC_(50)分别为16、88μg/mL,具有较强的抗氧化活性。

响应面法优化牛大力总黄酮提取工艺研究

[目的]对牛大力中总黄酮的提取工艺进行优化,建立其含量测定方法。[方法]此研究以市售广西牛大力饮片为对象,在单因素实验基础上,筛选出影响牛大力总黄酮提取量较显著的液料比、超声时间和乙醇浓度三个因素,采用Box-Behnken软件设计响应面试验优化牛大力中总黄酮提取工艺条件。[结果]结果表明,牛大力总黄酮提取的最优工艺条件为液料比43.04∶1(mL/g),超声时间37.05 min,乙醇浓度36.89%,预测总黄酮提取量为39.3286mg/g。[结论]此提取工艺的研究可为牛大力的开发利用提供参考。

牛大力中总甾醇的提取条件优化、含量测定及抗氧化性研究

【目的】对牛大力中总甾醇的提取工艺进行优化,建立其含量测定方法,并对其抗氧化性进行初步探究,为进一步开发牛大力价值提供参考。【方法】采用超声提取-分光光度计法,通过正交试验获得牛大力中总甾醇的最佳提取工艺参数和含量测定条件;通过自由基清除试验初步探究其抗氧化性。【结果】结果显示,料液比1∶80、乙醇浓度80%、超声温度50℃、超声功率450 W、超声时间90 min、超声次数2次,测定波长546 nm、5%香草醛-冰醋酸溶液用量0.4 mL、高氯酸用量0.8 mL、水浴温度80℃、水浴时间30 min时,牛大力中总甾醇的提取效果最佳,测定方法的方法学考察结果良好,对DPPH·和ABTS·清除率均达到95%以上。【结论】构建的牛大力总甾醇提取、测定方法简便快捷、提取率高、稳定准确、灵敏度高,可为牛大力价值挖掘、质量控制和天然抗氧化剂开发提供借鉴。

牛大力水提物对斑马鱼药物性肝纤维化损伤的保护作用

目的:探讨牛大力水提物对斑马鱼药物性肝纤维化损伤的作用及其机制。方法:以3月龄野生型AB品系斑马鱼为研究对象,用二乙基亚硝胺(DEN)刺激4周构建斑马鱼药物性肝纤维化模型,后用高、中、低浓度牛大力水提物进行干预。取肝组织做病理HE染色、天狼星红苦味酸染色、I型胶原蛋白(Collagen I)免疫组化染色,检测斑马鱼肝脏匀浆中α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与模型组比较,牛大力水提物各给药组斑马鱼肝脏纤维化程度、病理损伤、胶原纤维沉积均有不同程度的减轻,其中以牛大力高浓度组(100 mg/L)效果最为显著;牛大力高浓度组斑马鱼肝脏中Collagen-1、细胞凋亡相关基因α-SMA、TNF-α、Bax的表达均明显下降,差异均有统计学意义(P <0.01)。结论:牛大力水提物对药物性肝纤维化损伤的保护作用是通过抑制肝细胞凋亡、减少胶原纤维沉积实现的。

牛大力多糖提取工艺的优化

目的优化牛大力多糖的提取工艺。方法在单因素试验基础上,以料液比、提取温度、提取时间、提取次数为试验因素,各因素分别设计3个水平,采用L 9(34)正交设计,以牛大力多糖提取率为考察指标,优化牛大力多糖的水提工艺,再以醇沉静置时间为影响因素优化醇沉工艺。结果最佳提取工艺条件为:料液比1∶20,提取温度100℃,提取时间1h,提取2次,提取液浓缩至一定体积后加80%乙醇,置4℃冰箱中醇沉5h。结论优化后的提取工艺操作简便、快捷,可用于提取牛大力多糖。

牛大力标准提取物制备工艺研究

目的优化牛大力标准提取物制备工艺。方法采用正交试验L 18(36)设计优化牛大力标准提取物制备工艺,采用高效液相色谱法测定提取物中芒柄花素含量。结果最佳制备工艺为细粉,20倍量90%乙醇80℃加热回流提取2次,1次1.5 h,测得芒柄花素含量为284μg·g-1。结论所建立的方法简便、高效、稳定,可作为牛大力标准提取物的提取方法推广运用。

牛大力黄酮类成分提取条件的优化

为了优化牛大力黄酮类成分的提取条件,本文以浸膏得率、芒柄花素的含量为考察指标,对粒度、料液比、提取溶剂浓度、温度、次数、时间进行单因素考察试验。结果显示,最佳制备工艺为细粉、20倍量80%乙醇、80℃加热回流提取2次,1.5 h/次。由此得出,此方法简便、高效、稳定,可作为牛大力黄酮类成分的提取方法进行推广运用。

响应面法优化牛大力茎总黄酮提取工艺

以牛大力茎为研究对象,采用超声辅助乙醇法提取总黄酮。通过单因素实验考察了乙醇体积分数、液料比、提取时间、提取温度对牛大力茎总黄酮提取量的影响,并在此基础上,采用响应面法进一步优化总黄酮提取工艺。结果表明,在乙醇体积分数为70%、液料比为41∶1(mL∶g)、提取时间为42 min、提取温度为62℃的最优条件下,牛大力茎总黄酮提取量为16.06 mg·g^(-1),与预测值(16.23 mg·g^(-1))接近。该优化提取工艺操作简单,提取量高,为牛大力茎的利用及产品研发提供了依据。

超声辅助提取牛大力中总生物碱的工艺及抗氧化活性研究

选取药食两用植物牛大力,超声辅助提取,探究其总生物碱的工艺,并分析总生物碱的抗氧化活性。以总生物碱提取率为指标,通过单因素和正交试验确定最佳工艺条件为:料液比1 g:100 mL,提取液pH值为1,超声功率300 W,超声时间20 min。在此条件下,总生物碱提取率为2.894 mg/g;所提取得到的总生物碱对DPPH·、·OH、ABTS^(+)·3种自由基均有较强的清除能力,IC_(50)分别为63.89、39.75、94.48μg/mL,且总生物碱对三价铁的还原能力与浓度成正相关,结果表明总生物碱提取物具有良好的抗氧化活性。该研究结果将为牛大力中总生物碱进一步在食品中作为潜在的天然抗氧化剂提供理论依据。

美丽崖豆藤细胞培养及其多糖质量分数分析

采用不同激素诱导美丽崖豆藤(Millettia speciosa Champ.)无菌苗下胚轴、叶片和茎尖产生愈伤组织,对适宜的愈伤组织进行了液体培养,并对培养物与美丽崖豆藤干燥根(牛大力)切片的多糖质量分数进行了比较.结果表明:美丽崖豆藤无菌苗下胚轴、叶片和茎尖在不同的培养基上均形成愈伤组织,无器官分化发生;下胚轴在含1 mg/L 2,4-D培养基上形成的乳白色、易碎愈伤组织在液体培养基MS+1mg/L 2,4-D+0.75 g/L酵母提取物+0.75 g/L水解酪蛋白中增殖速度很快,能以悬浮细胞形式增殖9代,之后培养物中开始出现较大的愈伤组织块;悬浮细胞及后期形成的愈伤组织团块多糖质量分数分别为2.01%和2.07%,高于牛大力切片多糖的1.04%,且差异极显著(P<0.01).表明美丽崖豆藤细胞培养可作为提取美丽崖豆藤多糖的重要途径.

牛大力总酚酸提取工艺优化、定量分析及抗氧化活性研究

以牛大力为原料,优化牛大力总酚酸提取工艺并建立含量测定方法。通过正交试验优化,确定最优提取工艺:料液比1︰60 g/mL、乙醇体积分数50%、超声功率400 W、超声温度60℃、超声时间60 min、超声次数2次。通过单因素试验优化,确定最优测定条件:测定波长720 nm、福林酚用量1 mL、反应放置时间0 min、碳酸钠溶液用量1 mL、水浴温度60℃、水浴时间20 min。没食子酸线性范围为0.001~0.012 mg/mL (r=0.999 9),平均回收率为99.1%,SRSD为1.43%。抗氧化试验发现牛大力总酚酸具有良好的抗氧化性。该试验可为牛大力深加工产品的开发提供借鉴。