基于5-HT探讨电针刺激天枢、足三里对IBS-D大鼠的影响

目的观察电针刺激天枢、足三里对腹泻型肠易激综合征(diarrheal irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠血清5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量及对结肠5-羟色胺受体3A型(5-hydroxytryptamine 3A receptor,5-HT3AR)蛋白表达量的影响,探讨“同经异腑合募配穴”指导下,电针刺激天枢、足三里治疗IBS-D大鼠的作用机制,为电针的临床应用提供实验依据。方法将24只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、阿洛司琼组及电针组,每组6只。除空白组外,其余3组大鼠采用慢性束缚、避水应激及灌服番泻叶煎剂相结合的方法建立IBS-D大鼠模型。造模成功后,对电针组予以电针刺激双侧天枢、足三里,15 min/次;空白组、模型组和电针组均给予1 mL/100 g体质量生理盐水灌胃;阿洛司琼组给予1 mg/mL浓度的阿洛司琼溶液按1 mL/100 g体质量灌胃;4组均治疗1次/d,连续治疗14 d。观察大鼠一般情况;通过腹壁回撤反射(abdominal wall retraction reflex,AWR)实验进行内脏敏感性评估;记录大鼠体质量增长率的变化;计算大鼠粪便含水量;HE染色观察结肠组织形态;ELISA法检测血浆中的5-HT含量;Western blot检测目的蛋白5-HT3AR相对表达量。结果(1)大鼠一般情况:与模型组比较,电针组大鼠精神良好,活动正常,大便干湿适中,为成形粪粒。(2)体质量增长率:与治疗前比较,治疗后空白组、模型组、阿洛司琼组及电针组体质量增长率显著降低(P<0.001);与空白组比较,模型组与阿洛司琼组体质量增长率降低(P<0.01,P<0.05);与模型组、阿洛司琼组比较,电针组体质量增长率升高(P<0.05)。(3)粪便含水量:与治疗前比较,电针组粪便含水量显著降低(P<0.01);与空白组比较,模型组、阿洛司琼组粪便含水量高(P<0.001,P<0.05);与模型组、阿洛司琼组比较,电针组的粪便含水量降低(P<0.01,P<0.05)。(4)肠道容量阈值:与空白组比较,模型组肠道容量阈值显著降低(P<0.001);与模型组比较,阿洛司琼组与电针组肠道容量阈值升高(P<0.05)。(5)组织HE染色:与模型组比较,阿洛司琼组黏膜上皮完整,坏死范围明显减小;电针组黏膜上皮完整,吸收细胞呈柱状,黏膜皱壁中可见淋巴细胞和少量中性粒细胞等炎细胞浸润。与阿洛司琼组比较,电针组上皮完整,无坏死炎性损伤程度轻。(6)5-HT通路检测:与空白组比较,模型组血清中5-HT的含量上升(P<0.05);与模型组比较,电针组血清中5-HT含量下降(P<0.05)。(7)结肠5-HT3AR蛋白表达:与空白组比较,模型组结肠的5-HT3AR蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,阿洛司琼组和电针组结肠的5-HT3AR蛋白表达均显著降低(P<0.001);与阿洛司琼组比较,电针组结肠5-HT3AR蛋白表达显著降低(P<0.001)。结论在“同经异腑合募配穴”指导下,电针刺激天枢、足三里对IBS-D大鼠有显著的治疗效果,其作用机制可能通过降低血清5-HT含量及结肠5-HT3AR蛋白表达,恢复肠道运动和内脏感觉功能,从而缓解IBS-D的临床症状。

种植体周围炎炎性组织差异表达基因的筛选及验证

背景:种植体周围炎严重影响着口腔种植修复的成功,目前仍然没有有效的治愈方法,其发病机制也尚未阐明。目的:寻找种植体周围炎发生相关的核心差异表达基因,并进行实验验证。方法:利用生物信息技术从GEO数据库中筛选种植体周围炎牙龈和健康牙龈的差异表达基因,并对差异基因进行富集分析。利用String数据库构建蛋白互作网络,并使用cytoscape软件筛选关键基因,采用RT-PCR和免疫组化检测对关键基因C3AR1表达进行验证。采用RT-PCR法检测RAW264.7细胞破骨向分化后C3AR1 mRNA的表达水平。结果与结论:①将GSE33774数据集中种植体周围炎牙龈和健康牙龈的基因数据行差异分析,得到有意义的上调基因33个,下调基因17个,共50个差异表达基因;GO和KEGG结果显示差异表达基因主要富集在免疫受体活性、C-C趋化因子受体活性功能,以及破骨细胞分化相关信号通路上;②共筛选出C3AR1、CD14、TLR4、CCR1、CYBB和FCGR2A 6个关键基因,RT-PCR、免疫组化实验结果证实,C3AR1在种植体周围炎组织中表达上调,且C3AR1在巨噬细胞破骨向分化后表达上调;③结果显示,C3AR1在种植体周围炎中高表达,可能是种植体周围炎骨质破坏的关键基因。

β3AR通路活化诱导FGF21表达促进白色脂肪组织棕色化

目的通过活化β3AR-PKA通路,探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对白色脂肪组织(WAT)棕色化的影响。方法C57BL/6小鼠分别采用标准小鼠饲料(16只)及45%千卡脂肪高脂饲料(16只)喂养。12周后,标准饲料喂养小鼠随机分为2组:对照组(NC组)注射0.9%氯化钠溶液,注射CL316,243组(CL组)注射CL316,243(1 mg/kg);高脂饲料喂养小鼠随机分为2组:高脂饮食组(HFD组)注射0.9%氯化钠溶液,高脂饮食注射CL316,243组(HFD+CL组)注射CL316,243(1 mg/kg)。14周后,Western blot检测WAT蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白(FGF21、PGC-1α及UCP1)表达;观察肝脏及脂肪组织病理学变化。培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导成熟后分为3组:NC组,DMEM培养液;CL组,培养液+10μmol/L CL316,243;SU+CL组,培养液+50μmol/L SU5402+10μmol/L CL316,243。48 h后,检测蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白表达,免疫荧光检测线粒体表达。结果与NC组比较,CL组PKA水平及棕色化相关蛋白升高;与CL组比较,HFD+CL组PKA水平及棕色化相关蛋白降低;而HFD+CL组相关蛋白表达高于HFD组。体外实验,与NC组比较,CL组及CL+SU组PKA水平显著升高;CL+SU组较CL组棕色化相关蛋白表达降低;免疫荧光结果显示,与NC组比较,CL组线粒体表达增多;而SU+CL组线粒体表达较CL组减少。结论活化β3AR-PKA通路可增加WAT中FGF21分泌,进而上调PGC-1α及UCP1表达,促进WAT棕色化。

MOF(Fe)材料用于光-芬顿催化降解酸性大红3R废水

利用水热法制备了新型金属有机骨架MOF(Fe)作为光-芬顿催化剂,通过XRD、TEM、FITR和BET对催化剂进行表征。利用光-芬顿体系下对酸性大红3R(AR3R)的催化降解效果来评价MOF(Fe)的催化活性,考察了AR3R初始质量浓度、pH、MOF(Fe)的质量以及H2O2的用量对AR3R催化降解性能的影响。结果表明,在可见光下,AR3R初始质量浓度为200 mg/L、pH为3.0、H2O2的用量为0.4 mL、MOF(Fe)的质量为0.20 g时,经过45 min反应后AR3R降解率为100%。通过捕获剂实验确定·OH、·O2和h+在反应体系中均起着重要作用。重复利用实验表明,MOF(Fe)具有较高的稳定性。

热变形奥氏体Ar_3温度的计算模型

以超组元（Ｓｕｐｅｒｅｌｅｍｅｎｔ）模型、Ｃａｈｎ的相变动力学理论和Ｓｃｈｅｉｌ的叠加法则为基础，计算了Ｆｅ－ΣＸｉ－Ｃ（Ｘｉ＝Ｍｎ，Ｓｉ，Ｎｉ，Ｍｏ等）多组元低合金钢热变形奥氏体在连续冷却过程中γ→α相变的实际开始温度Ａｒ３，并分析了化学成分、γ相热变形和冷却速度对Ａｒ３温度的影响。

对称性对原子团簇Ar_3低激发能谱的影响

采用少体物理方法，计算了惰性元素三原子团簇Ａｒ３的低激发能谱，分析了量子力学对称性对Ａｒ３的几何结构和内部运动的影响，给出了Ａｒ３低激发能谱的几条转动带。

Ar_3H^+中多体势能拆分的从头计算分析

使用从头算的方法计算了Ar3H+的稳定构型及红外振动基频,并与Ar2H+的稳定结构及红外振动频率作了对比,讨论了二者之间的联系与差别.对Ar3H+一个特殊构型下的势能线作了扫描,在此势能线下将Ar3H+的四体势能拆解为两体,半三体及三体势能的加和,初步探讨了高阶势能分解为低阶势能的最佳途径.

高表达C3aR的肥大细胞在糖尿病肾病患者肾组织中的分布及病理意义分析

选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点,及其与DN发生、发展的关系,利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定.结果表明:a.光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点,免疫荧光双套色染色的分析显示,C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性,与肥大细胞的情况一致,甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞.b.正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布,但数量很少;从DN早期组到DN中期组,再到DN晚期组,肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势;DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性.上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况,提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程,同时,DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现,提示C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用.

过敏毒素受体(C3aR)在db/db糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达及病理意义分析

利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法,同时从mRNA水平和蛋白质水平对过敏毒素受体(C3aR)在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(4周龄的db/db小鼠),C3aR与作为正常对照的db/m小鼠相比没有明显差异.随着肥胖的加剧,高血糖、蛋白尿的发生和发展,C3aR在db/db小鼠肾脏中的表达显著升高.b.免疫组化分析显示,C3aR广泛地表达于db/m和db/db小鼠肾脏的皮质和髓质,分布于肾脏的上皮细胞中(包括肾小管上皮细胞、肾小球中的脏层上皮细胞(足细胞)和壁层上皮细胞).从部位来看,皮髓交界处的肾小管中C3aR表达量明显要比其他部位的多.在肾小球,C3aR特异地存在于足细胞部位.在db/m小鼠,不同周龄小鼠肾脏中C3aR的表达量并没有明显变化,但在db/db小鼠,从8周龄开始,分布在db/db小鼠肾小管上皮细胞和小球足细胞中的C3aR均随小鼠周龄的增加而增加,至少在时间上,与小鼠糖尿病肾病的发生发展相关,其中尤以足细胞中和皮髓交界处肾小管上皮细胞中的变化最为明显.c.在糖尿病肾病小鼠中高表达C3aR的肾小管上皮细胞常有空泡变性的情况.上述工作印证了先前对2型糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱的分析结果,更加明确了C3aR与糖尿病肾病的相关性,同时揭示了C3aR在正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、分布和变化规律,有利于进一步揭示C3aR的功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用,探讨糖尿病肾病的分子机制。

C3aR——检测肾组织肥大细胞的敏感标志

目的:探讨过敏毒素受体C3aR高表达细胞在正常个体和各种肾脏病患者肾组织中的分布情况,对其细胞类型进行鉴定,并对C3aR能否作为肥大细胞特异性标记分子进行评估。方法:利用免疫组化的方法分析C3aR高表达细胞在正常供肾组织和包括2型糖尿病肾病(T2DN)、IgA肾病、急性间质性肾炎、慢性间质性肾炎、ANCA相关性血管炎、微小病变性肾病、膜性肾病、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)以及狼疮性肾炎在内的各种肾脏病患者肾组织中的分布情况;利用光镜、免疫电镜、免疫荧光双套色染色和甲苯胺蓝特殊染色等方法对肾组织中高表达C3aR的细胞类型进行鉴定;在此基础上,对C3aR作为肾组织肥大细胞特异性标记分子进行评估。结果:(1)C3aR高表达细胞在正常供肾组织和包括T2DN、IgA肾病、急性间质性肾炎、慢性间质性肾炎、ANCA相关性血管炎、微小病变性肾病、膜性肾病、FSGS以及狼疮性肾炎在内的各种肾脏病患者肾组织中均存在。(2)光镜和免疫电镜的形态学分析显示肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点;免疫荧光双套色染色的分析显示,这种细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白阳性,与肥大细胞的情况一致;甲苯胺蓝特殊染色进一步证实其为肥大细胞。(3)虽然C3aR也同时表达于小管上皮细胞等其他细胞,但其在肥大细胞中的表达水平远远高于其他细胞,这种表达水平差异足以区分肥大细胞与其他细胞。(4)与目前最常用的肥大细胞标记分子——肥大细胞类胰蛋白酶相比,C3aR作为肥大细胞的标记分子具有相似的检测灵敏度和更好的特异度。结论:C3aR在肾组织肥大细胞特异性地高表达,是肾组织肥大细胞的一个敏感标记分子,完全可代替类胰蛋白酶,以免疫组化的方法检测肾组织中的肥大细胞。

Ti-3AR钛合金耐蚀性能研究

研究了新中强耐蚀钛合金Ti-3AR(Ti-Al-Mo-Ni)在室温,60C,沸腾条件下的20%—50%HNO_3、1.5%—30%H_2SO_4、1.5%—15%HCl中的耐蚀性,并从电化学角度对其耐蚀机理进行了分析。结论认为:Ti-3AR具有与Ti-12相当的良好耐蚀性能,这是由于新添加的合金元素Mo,Ni能程度不同地提高钛在H_2SO_4,HCl等介质中的腐蚀电位,并通过促进阳极钝化改善钛的腐蚀性能。

2型糖尿病与正常人群中β_3肾上腺素能受体基因Trp64Arg多态性表型特征

目的 研究中国人群 β3 肾上腺素能受体基因 Trp64 Arg错义突变频率 ,并了解该突变对 2型糖尿病临床特征的影响。方法 应用 PCR RFLP技术检测了相互间无一级亲属关系的 12 4例 2型糖尿病患者及 13 8例非糖尿病对照人群中 β3 肾上腺素能受体基因 Trp64 Arg错义突变 ;同时检查体重指数、腰臀比例、血压 ,测定血脂及 OGTT或馒头餐试验中 0分钟及 12 0分钟血糖及胰岛素。结果 非糖尿病人群中 Trp64 Arg等位基因频率为 0 17;突变频率在糖尿病与非糖尿病之间相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;突变与否间上述临床特征相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 该突变至少在其杂合子型可能不是中国人散发 2型糖尿病的主要决定因素 ;纯合子突变型可能导致 2型糖尿病早发 ,有待今后积累资料深入研究。

大气压Ar/NH_3同轴介质阻挡放电发射光谱诊断（英文）

采用光谱在线技术(OES)检测了大气压Ar/NH_3 DBD等离子体中的主要粒子为NH,N,N^+,N_2,Ar,H_α,OH。NH是NH_3分解的产物,激发态Ar~*和NH_3分子的潘宁碰撞生成激发态中性粒子NH(c^1Ⅱ)和NH(A^3Ⅱ)。674.5 nm处N原子谱线表明等离子体中产生了N活性原子,为大气压Ar/NH_3同轴介质阻挡放电等离子体合成ε-Fe_3N磁性颗粒提供了可能。研究了各主要粒子谱线强度随NH_3流量和外加电压峰峰值的变化规律,研究结果表明:NH_3流量相同时,随外加电压峰峰值升高,各粒子谱线强度均逐渐增强;外加电压峰峰值相同时,各谱线强度随NH_3流量增加先增强后减弱。外加电压峰峰值相同时,随NH_3流量增加,N活性原子谱线强度先增强后减弱,NH_3流量为20 mL·min^(-1)时,N活性原子谱线强度最强。NH_3流量相同时,随外加电压峰峰值升高,N活性原子谱线强度逐渐减小,主要是由于大气压Ar/NH_3DBD放电模式由多脉冲大气压辉光放电转变为丝状放电造成。多脉冲大气压辉光放电的微放电通道之间相互重叠,各个微放电之间相互影响,导致随外加电压峰峰值升高各谱线强度的增加速率较快。当外加电压峰峰值从4 600 V升高到6 400 V时,大气压Ar/NH_3 DBD的放电模式由单脉冲APGD转变为二脉冲APGD,属于均匀大气压介质阻挡放电,随外加电压峰峰值升高谱线强度的增加速率较快,利于合成e-Fe_3N磁性颗粒。

过表达C3AR1基因促进HL-60细胞迁移和侵袭

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流式细胞术探讨其可能的机制。结果:合适C3AR1的HL-60细胞在C3a和SDF-1的作用下,其细胞迁移及侵袭能力较转染空载体细胞明显增强。PCR array检测发现,包括CCL2在内的16个基因显著上调,而4个基因显著性下调,但与CXCR4基因的表达无关。结论:C3a和SDF-1促进过表达的C3AR1细胞迁移和侵袭,其机制与调控CCL2等相关基因有关。

IgA肾病患者肾组织肥大细胞的分布及意义

目的:了解不同亚型IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者肾组织中肥大细胞的分布及其与各种疾病指标的相关性,全面探讨肥大细胞在IgAN中的可能病理意义。方法:选取包括大量蛋白尿型、反复发作肉眼血尿型、高血压型、无症状尿检异常型、血管炎型在内的IgAN患者共110例,根据肾组织肥大细胞特异性高表达C3aR的特点,利用免疫组化的方法对所有患者的肾穿刺活检标本切片进行C3aR免疫组化染色,计数各切片C3aR强阳性细胞数,同时测量切片面积,计算各患者肾组织肥大细胞分布密度(同时选取正常供肾15例作为对照);在此基础上,利用统计学方法,进行肾组织肥大细胞密度与包括血、尿生化指标,肾小管间质相对面积和肾组织炎症细胞密度在内的各种病理指标进行相关性分析,探讨肥大细胞在IgAN中的病理意义。结果:(1)肥大细胞广泛存在于各亚型IgAN患者肾组织中;与正常对照相比,各亚型IgAN患者肾组织中的肥大细胞数均有明显的增加。(2)总的来看,肾组织中肥大细胞数与血肌酐和血CystatinC水平、尿视黄醇结合蛋白(RBP)和尿溶菌酶水平及间质炎症细胞数量,肾小管间质相对面积具显著相关性,而与尿C3、尿α2巨球蛋白(α2-MG)和24h尿蛋白水平及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平则无明显相关性。(3)不同亚型IgAN肾组织肥大细胞与各种病理指标的相关性有明显差异,其中,反复发作肉眼血尿型与其他亚型的差异性最明显。结论:肥大细胞很可能参与了包括大量蛋白尿型、反复发作肉眼血尿型、无症状尿检异常型、高血压型和血管炎型在内的各种亚型IgAN的病理过程。肥大细胞在不同亚型IgAN中的地位和作用机制也可能存在差异。

C3aR慢病毒表达载体的构建及在肾小管上皮细胞中的转染实验

目的前期研究发现C3aR在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中表达上调,但其在糖尿病肾病中的病理意义未知,且有关肾组织C3aR的确切生理和病理意义亦仍不清楚。文中通过构建C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的肾小管上皮细胞株,为探讨C3aR在肾组织小管上皮细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法根据人C3aR mRNA序列合成人C3aR基因,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP;经测序验证正确后,用构建的慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aR表达重组慢病毒;以C3aR表达重组慢病毒感染人肾小管上皮细胞系HK2,经药物筛选得到杀稻瘟菌素抗性细胞克隆;经荧光定量PCR分析和细胞免疫化学分析,鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株。结果 1对构建成的C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP进行全序列测序验证显示序列完全正确。2以构建的C3aR慢病毒表达载体和包装质粒(p LP1、p LP2和p LP/VSVG)共转染293T细胞,48 h后收集细胞培养上清,得到了滴度约为5×108个/m L的慢病毒液。3成功进行了C3aR重组慢病毒对HK2细胞的转染,得到了稳定转染了C3aR重组慢病毒的HK2细胞株HK2-C3aR;基于荧光定量PCR和细胞免疫化学染色的分析证实HK2-C3aR细胞株中C3aR表达水平较HK2非转染对照细胞高(2.33±0.45 vs 1.00±0.09,P<0.05)。结论成功构建了C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株,为进一步研究C3aR过表达在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。

胃痛消痞方对肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠胃肠动力及5-HT3aR表达影响的实验研究

目的探讨胃痛消痞方对肝郁脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃肠动力及5-羟色胺受体(5-HT3aR)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法选用改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法复制FD大鼠模型,阳性对照药选用莫沙必利片,中药干预以胃痛消痞方灌胃治疗。实验结束后,观察各组大鼠的一般状态,记录胃内残留率及小肠推进率,WB法观察胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白的变化。结果造模组大鼠一般状态差,胃内残留率增加,小肠推进率降低,胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白表达降低(P<0.05);胃痛消痞方组及西药组大鼠一般状态明显改善,胃内残留率降低,小肠推进率明显升高,胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白表达升高(P<0.05)。结论胃痛消痞方能促进FD大鼠胃肠动力,上调5-HT3aR蛋白表达,可能是其治疗FD的作用机制之一。

心衰过程中β_3 AR自身抗体的产生与T细胞亚群变化的相关研究

目的:分析心力衰竭大鼠外周血T细胞亚群变化与β3AR自身抗体产生的规律,并探讨其相关意义。方法:采用腹主动脉缩窄法制备大鼠心力衰竭模型,并设立伪手术对照组;定期采用ELISA技术检测大鼠血清中β3AR自身抗体含量,并应用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+、CD8+T细胞、CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例。结果:(1)心衰组大鼠在腹主动脉缩窄术处理后8周心功能明显下降,出现心肌重塑,心衰模型成功建立。(2)心衰组大鼠血清中β3AR自身抗体水平(OD值)在术后4周即升高,与同期伪手术对照组具有明显差异(P<0.05);该抗体在术后8周时达峰值,与同期伪手术对照组具有显著差异(P<0.01);至12周时,β3AR自身抗体水平有所下降但与同期伪手术对照组仍具有明显差异(P<0.05);术后16周时,该抗体水平与同期伪手术对照组无明显差异(P>0.05)。(3)腹主动脉缩窄术处理4周、8周时,心衰组大鼠外周血CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+T比值升高,CD4+CD25+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T比例降低,与同期伪手术对照组的差异均具有统计学意义(P<0.05);处理12周、16周时,心衰组大鼠外周血CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+T比值、CD4+CD25+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T比例与同期伪手术对照组无明显差异(P>0.05)。(4)β3AR自身抗体水平与CD4+T细胞含量呈正相关,与CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞含量呈负相关。结论:在心衰发病过程中产生了β3AR自身抗体并伴有明显的T细胞亚群失衡,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞可能对调控β3AR自身抗体的产生起重要作用。

白芍提取物对经前期综合征肝气郁证模型大鼠额叶5-HT_(3A/3B)R分布与蛋白表达的影响

目的:本研究就5-羟色胺3受体(5-HT3R)水平探讨白芍提取物(Radix Paeoniae Alba Extract,RPAE)干预经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS)肝气郁证抑郁情绪的分子作用机制。方法:复制PMS肝气郁证大鼠模型,用白芍提取物进行药物干预,采用免疫荧光技术和蛋白印迹技术(western blot)分别检测5-HT3AR和5-HT_(3B)R在大鼠脑内的分布和蛋白表达情况。结果 :5-HT_(3A)R和5-HT_(3B)R在各组大鼠额叶均有阳性表达;与正常组大鼠相比,模型组大鼠额叶5-HT3AR、5-HT_(3B)R蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组大鼠相比,白芍提取物组大鼠额叶5-HT_(3A)R蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:白芍提取物能够调控PMS抑郁症大鼠额叶5-HT_(3A) R和5-HT_(3B)R蛋白表达,这可能是其干预PMS肝气郁证抑郁情绪的作用机制之一。

C3aR过度活化与糖尿病肾病肾组织损伤的关系

C3aR是补体C3裂解产物C3a的受体.最近的一些研究提示C3aR通路可能参与了糖尿病肾病(DN)的病理过程,但有关C3aR通路在DN中的确切病理作用及有关机制远未清楚.需要特别指出的是,现有的有关C3aR参与DN肾组织损伤的证据主要来自一些动物模型的研究,临床上尚缺乏较为系统全面的对DN患者肾组织C3aR通路与肾组织损伤关系的观察分析.为此,本文首次以较大的样本量分析了不同病理时期DN患者肾组织C3aR和C3a的表达变化情况及其与DN患者肾组织损伤的相关性.在此基础上,进而利用体外细胞模型,对高糖环境下C3aR活化致肾小球足细胞损伤的作用及机制进行了探讨.结果显示:a.与正常对照组相比,DN患者肾组织C3a和C3aR的表达水平随DN的进展而升高,C3aR在DN患者肾组织中的表达上调主要见于肾小管上皮细胞和肾小球足细胞;b.DN患者肾组织C3aR和C3a水平与患者肾组织损伤程度,特别是小管和小管间质损伤程度、肾小球足细胞损伤程度具有显著相关性;c.外加C3a激活C3aR可使高糖环境中的足细胞的细胞骨架发生明显改变、足细胞标记分子表达下调、足细胞通透性增加.这些结果说明:a.DN患者肾组织中确实存在C3a/C3aR轴过度活化的现象;b.C3a/C3aR轴的过度活化很可能在DN患者肾组织损伤,特别是小管和小管间质损伤、肾小球足细胞损伤中具有重要作用;c.可能通过破坏成熟足细胞特有的细胞骨架,改变足细胞标记分子表达,增加足细胞的通透性,C3a/C3aR轴过度活化参与DN足细胞损伤过程.本文不仅为C3a/C3aR通路参与DN病理过程提供了新的必不可少的临床证据,也增加了对C3a/C3aR通路过度活化致DN患者肾组织损伤机制,特别是肾小球足细胞损伤机制的了解,这对于拓展对DN病理机制的认识,发展DN防治新思路,无疑都是有益的.