艾叶1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-焦磷酸还原酶基因的克隆及蛋白的结构性质分析

目的:克隆艾叶1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-焦磷酸还原酶基因开放读码框(Ar HDR),分析其编码蛋白ArHDR的性质和结构。方法:采用逆转录PCR方法扩增ArHDR,纯化后与p MD19-T载体连接构建了重组质粒再转化至大肠杆菌中,获得的阳性克隆经菌液PCR及测序鉴定,序列与转录组测序得到的Unigene一致。利用系统的生物信息学软件对ArHDR的性质与结构进行了分析。结果:获得了艾叶ArHDR,长度为1 365 bp,编码454个氨基酸;生物信息学分析表明Ar HDR属于稳定蛋白,与黄花蒿HDR亲缘关系最近;ArHDR的三级结构富含α螺旋与β折叠,呈"苜蓿叶"形,3个保守的半胱氨酸位于中心,构成了锚定铁硫的酶的催化中心。结论:该研究体外成功克隆了ArHDR,分析了ArHDR的性质与结构,为增加艾叶萜类化合物合成提供理论依据。