嗜水气单胞菌AraC家族转录调控因子AetY的功能

为研究嗜水气单胞菌中国流行菌株NJ-35的AraC家族转录调控因子AetY(U876_01475)的功能,本实验采用同源重组技术构建了该基因的缺失株ΔaetY及互补株CΔaetY,并对野生株、缺失株及互补株生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的耐药性和对斑马鱼的致病力进行检测。结果显示,与野生株相比,ΔaetY生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的最小抑菌浓度(MIC)均显著降低,对斑马鱼致病力明显降低,半数致死量(LD_(50))增加400余倍。CΔaetY各项指标均恢复至野生株水平。本研究首次针对嗜水气单胞菌AraC家族成员进行了基因功能分析,为进一步探究该菌的致病机理提供参考。

转录调控因子Lmo2672对LM环境适应性和应激的调控作用

【目的】本文为了解AraC家族转录调控因子Lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)环境适应性和应激的影响。【方法】利用温控型质粒pKSV7构建LM-Δlmo2672缺失株,比较母源株LM EGD-e和缺失株LM-Δlmo2672在不同应激环境中生长情况的差异,并利用qRT-PCR方法分析转录调控因子Lmo2672缺失对应激调控基因及氧化应激相关基因转录水平的影响。【结果】与LM EGD-e相比,LM-Δlmo2672在37、42℃及含5%NaCl、0.3%胆酸盐、5 mM H2O2、1%Triton X-100的培养基中生长速度均显著降低(P<0.05);且环境适应性及应激相关基因(prfA、lexA、fri、perR、kat、sod)转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】提示lmo2672基因在LM环境适应性和应激中发挥重要的调控作用。

lmo2672基因缺失对LM在不同环境下生物被膜形成的影响

旨在了解AraC家族转录调控因子lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)生物被膜(BF)形成的影响。根据同源重组技术构建LM-△lmo2672基因缺失株,利用结晶紫染色法比较LM EGD-e和LM-△lmo2672在不同温度、渗透压、H 2O 2和胆酸盐环境中BF形成量的差异;通过qRT-PCR分析上述不同应激环境中BF相关基因相对转录水平的变化。研究结果证实:与LM EGD-e相比,LM-△lmo2672在4℃,30℃,5%NaCl,8%NaCl,5 mmol/L H 2O 2和0.3%胆酸盐培养环境中BF形成量显著降低;在37℃LM-△lmo2672 BF形成能力极显著降低;在不同应激环境中,LM-△lmo2672 BF形成相关基因的表达量均出现不同程度下降。研究结果表明,lmo2672基因在LM BF形成过程中发挥重要作用。