花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定

通过提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h2.02基因,将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中,IPTG诱导表达、Western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生Ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的IgE结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原Ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.

花生过敏原Ara h2.02二级结构和B细胞抗原表位预测

为预测花生过敏原Arah2.02的二级结构和B细胞抗原表位,通过Genbank数据库搜索到Arah2.02基因,并推导出其相应的氨基酸序列,采用SOPMA和DNAStar软件预测该蛋白质的二级结构以及通过Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法和Karplus-Schulz法分别预测其抗原指数、亲水性、表面可及性、柔韧性等参数,并综合分析预测该蛋白的B细胞抗原表位。结果表明:在序列28～31、56～73、76～90、92、148、156～158、168～169区域最可能是Arah2.02蛋白的B细胞抗原表位的优势区域。该结果将为寻找Arah2.02的最佳优势表位提供支持,同时为该蛋白单克隆抗体的制备等研究提供理论依据。