刺老苞根皮黄酮对抗骨性关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的影响研究

目的研究刺老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的逆转作用。方法选15只5月龄新西兰兔,采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板的Hulth骨性关节炎动物模型制作方法,分离培养软骨细胞,其中模型组分别加入10,20,30μg/ml刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量处理。从第9周开始,采用DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平,Griess法测定细胞培养上清中NO、SOD和GSH-Px含量,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子IL-1β、诱导型一氧化氮合酶iNOS、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果与模型组比较,刺老苞根皮黄酮各剂量组细胞内活性氧水平、NaNO2含量、IL-1β/GAPDH表达水平、iNOS/GAPDH表达水平、p53/GAPDH表达水平均有所降低,且差异均有统计学意义(P<0.01),而SOD、GSH-Px均有所升高,且差异均有统计学意义(P<0.01)。结论刺老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞的氧化损伤及炎性有逆转作用,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。

刺老苞总皂苷对抗大鼠泼尼松性骨质疏松的作用研究

目的:研究刺老苞总皂苷对泼尼松致大鼠骨质疏松的对抗作用。方法:将50只大鼠按随机数字表法分为正常对照组、泼尼松模型组和刺老苞总皂苷高、中、低(10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg)剂量组各10只。分别灌胃相应药物,每日1次,连续8周后取血清检测生化指标,对骨进行组织切片检查及长度、宽度和骨质的测量。结果:泼尼松模型组大鼠股骨质量、尺骨骨羟脯氨酸(Hyp)和骨钙含量比正常对照组明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多,血浆胆固醇(TG)含量上升,碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白(HDL)含量下降。刺老苞总皂苷组能有效提高骨的质量和骨质的含量,减少骨髓腔中脂肪的含量,升高碱性磷酸酶和高密度脂蛋白含量。结论:泼尼松可抑制大鼠的骨生长及引起骨丢失,刺老苞总皂苷可有良好的对抗作用。

刺老苞根皮醇提物对原代成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的:研究4种不同浓度刺老苞根皮醇提物对原代成骨细胞的增殖、分化及矿化的影响。方法:通过消化10只雄性新生SD乳鼠(SPF级)的颅盖骨,获得原代前成骨细胞体外培养、传代,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50μg/mL抗坏血酸诱导,碱性磷酸酶(ALP)染色和矿化结节染色鉴定原代成骨细胞,分别用低、中、高浓度(1、10、100μg/mL)刺老苞根皮醇提物(4种)对成骨细胞进行干预,培养4 d和14 d后分别进行ALP活性测定和茜素红染色面积测定。结果:与对照组比较4种刺老苞根皮醇提物均能提高成骨细胞生存率,增强ALP活性,增加矿化结节面积。结论:4种刺老苞根皮醇提物可通过促进成骨细胞增殖和分化,加快骨基质矿化过程。

刺老苞根皮黄酮类化合物对破骨细胞分化的影响

目的研究刺老苞根皮黄酮类化合物对体外破骨细胞分化的影响。方法建立由骨保护素配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共同细胞因子的小鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将不同浓度的刺老苞根皮黄酮类化合物作用于破骨细胞。受试细胞分为对照组、刺老苞根皮黄酮类化合物低剂量组(10-8mol/L)、中剂量组(10-7mol/L)和高剂量组(10-6mol/L),并设立空白对照组。7 d后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数;测量TRAP活性以及破骨细胞表面NF-κB活化受体(RANK)mRNA表达量。结果诱导培养的破骨细胞形态特征明显;刺老苞根皮黄酮类化合物中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相比有明显差异(P<0.05);刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组RANK mRNA表达量与对照组有明显差异(P<0.05),且呈量效关系。结论刺老苞根皮黄酮类化合物可抑制体外培养的破骨细胞分化。

超临界CO_2萃取棘茎楤木根皮挥发油的实验研究

目的探讨超临界CO2萃取棘茎楤木根皮挥发油的最佳条件。方法采用正交试验,考察萃取温度、压力、CO2流量等因素在不同水平下对棘茎楤木根皮挥发油萃取率的影响。结果萃取压力20MPa,温度45℃,CO2流量40kg·h-1和萃取时间80min,萃取率为4.48%。结论超临界CO2萃取的萃取率高,萃取时间短。

刺老苞根皮干预大鼠骨折模型矿物元素含量变化

为探讨土家族药刺老苞根皮对大鼠骨折模型胫骨矿物元素的影响,将250只SD大鼠(雌雄各半)随机分成对照组、模型组和刺老苞根皮黄酮高、中、低(30、20、10 mg.kg-1)剂量组,每组10只,分别灌胃相应药物,每日1次,连续4周,用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定了给药第4天、第7天、第14天、第21天和第28天不同时间点大鼠胫骨中Ca、Mg、P、Mn、Cu、Se和Zn7种矿物元素的含量。结果表明,经灌喂刺老苞根皮黄酮的骨折模型大鼠胫骨中上述7种矿物元素含量均有不同程度的提高,呈现一定的剂量关系。为土家药利用刺老苞根皮治疗骨折不愈类疾病从微量元素的角度提供有用数据。

刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3TE-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究

目的：探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素（OPG）和核因子κB受体激活因子配体（RANKL）mRNA基因表达的影响。方法：体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含0 mol.L^-1、10^-8mol.L^-1、10^-7mol.L^-1、10^-6mol.L^-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析。结果：培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPG mRNA的表达,有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）,VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mR-NA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）,各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论：刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的。

刺老苞根皮黄酮类化合物对破骨细胞分化的影响

目的:研究刺老苞根皮黄酮类化合物对体外破骨细胞分化的影响。方法:建立由骨保护素配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共同细胞因子的小鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将不同浓度的刺老苞根皮黄酮类化合物作用于破骨细胞。受试细胞分为对照组、刺老苞根皮黄酮类化合物低剂量组(10-8mol·L-1)、刺老苞根皮黄酮类化合物中剂量组(10-7mol·L-1)和刺老苞根皮黄酮类化合物高剂量组(10-6mol.L-1),并设立空白对照组。7天后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数;测量抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性以及破骨细胞表面NF-κB活化受体(RANK)mRNA表达量。结果:诱导培养的破骨细胞形态特征明显;刺老苞根皮黄酮类化合物中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相比有明显统计学差异(P<0.05);刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组在(RANK)mRNA表达量上与对照组相比有明显统计学差异(P<0.05),且呈量效关系。结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可以抑制体外培养的破骨细胞分化。

刺老苞根皮黄酮对兔骨性关节炎软骨细胞增殖与凋亡影响的研究

目的:通过观察刺老苞根皮黄酮对新西兰兔骨性关节炎模型的软骨细胞增殖与凋亡基因表达的影响,初步探索其干预软骨细胞代谢的作用机制。方法:取5月龄新西兰兔骨性关节炎模型的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、TUNEL法、免疫组化法对细胞增殖、凋亡及细胞周期调控基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA的表达进行检测。结果:不同剂量组刺老苞根皮黄酮可显著促进软骨细胞体外增殖,并可通过减弱软骨细胞Bax、Caspase-3、p53mRNA的表达,增强Bcl-2mRNA的表达来减缓软骨细胞凋亡进程。结论:刺老苞根皮黄酮可有效调控兔骨性关节炎软骨细胞代谢,增强细胞活性,延缓凋亡,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。

刺老苞根皮黄酮对H2O2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善

在H2O2胁迫下,研究刺老苞根皮(Aralia echinocauIis)黄酮增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用.为此用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞根皮黄酮低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞根皮黄酮中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞根皮黄酮高剂量组(1×10-6mol/L).测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性.结果显示与模型组相比,刺老苞根皮黄酮组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均显著升高(P<0.01),而ROS含量、LPO含量则显著降低(P<0.01),并呈现一定的量效关系.可以认为H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞根皮黄酮可以预防或降低此类损伤对细胞的影响.

Micro-CT和骨力学测试观察刺老苞根皮对骨折大鼠的作用

目的应用骨力学和Micro-CT技术,探讨刺老苞根皮对3月龄大鼠胫骨骨折显微结构和骨力学的影响。方法 60只SPF级3月龄SD雌性大鼠,在胫骨上打孔造模后,随机分为正常模型组、刺老苞根皮低剂量组[0.9 g/(kg·d)]、刺老苞根皮中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、刺老苞根皮高剂量组[3.6 g/(kg·d)],每天一次,连续给药4 w。分别在给药14、21、28 d后,取右侧胫骨进行骨力学检测,取左侧胫骨进行Micro-CT扫描及三维重建。结果与模型组相比,从14 d到28 d,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组骨的结构力学参数(弹性挠度、弹性载荷、最大挠度、最大载荷)和生物力学参数(最大应力、最大应变、弹性应力、弹性应变)明显提高(P<0.05);BV/TV、Tb.Th、Tb.V在21、28 d时刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显升高(P<0.05或P<0.01);Tb.Sp、SMI在21、28 d时,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论刺老苞根皮可通过改善骨折部位骨微小结构,提高骨密度,促进骨组织结构完整性,从而提升骨的抗冲击和变形能力,使其韧性和可塑性增强,骨组织强度增加,提高胫骨骨力学性能,促进大鼠骨折修复。

正交试验法优选棘茎木皂苷提取工艺及抗炎镇痛作用的实验研究

目的利用正交试验法优选棘茎楤木皂苷提取工艺及抗炎镇痛作用药理实验。方法利用简便常用的正交试验设计优化棘茎楤木根皮总皂苷提取工艺,并采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、醋酸致小鼠扭体反应实验等急性炎症动物模型及疼痛模型,观察棘茎楤木皂苷的抗炎镇痛作用。结果正交试验优选出棘茎楤木皂苷提取工艺为:10倍量95%的乙醇回流提取3次,每次0.5h;药理实验初步表明棘茎楤木皂苷具有抗炎镇痛作用。结论棘茎楤木皂苷含量较高,可以开发成治疗风湿疾病的医药中间体。

高效液相法测定楤木植物齐墩果酸含量

报道了用ＴＬＣ法定性和用ＨＰＬＣ法测定了木和棘茎木中以游离形式存在的齐墩果酸含量，其中含量较高的是木叶（１．５１９％），为扩大齐墩果酸的药源提供依据。本方法相对标准偏差为２．７５％，回收率９１．４％～９９．５％。

龙牙楤木皂苷Ⅳ对原代成骨细胞分化和矿化的影响

目的研究龙牙楤木皂苷Ⅳ(TarasaponinⅣ)对原代成骨细胞的分化及矿化的影响。方法通过消化SD乳鼠颅盖骨,获得原代前成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用MTT比色法检测TarasaponinⅣ(10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL)作用于前成骨细胞的适宜质量浓度范围;用低、中、高浓度(0.5、5、50μg/mL)TarasaponinⅣ对成骨细胞进行干预,培养4 d后,试剂盒法进行细胞上清中碱性磷酸酶(ALP)活性测定;培养14 d后,按茜素红S染色试剂说明对细胞进行钙化结节染色。结果与对照组比较,TarasaponinⅣ各浓度组均能明显提高前成骨细胞活性(P<0.05、0.01),0～60μg/mL内细胞生存率呈递增趋势。与对照组比较,TarasaponinⅣ低、中、高浓度组细胞上清ALP活性均显著下降(P<0.01),中、高浓度组细胞矿化结节数目显著增多(P<0.01),且均呈剂量相关性。结论 TarasaponinⅣ可以促进前成骨细胞生长,增强成骨细胞矿化过程。

刺老苞根皮总黄酮及微量元素含量的分析研究

采用紫外分光光度法测定了湖北恩施道地产土家族药刺老苞根皮中总黄酮的含量,在200～400 nm波长范围内扫描,最大吸收波长为λ=267.0 nm。原子吸收分光光度法测定了K,Na,Ca,Mg,Fe,Se,Ga,Ni,Mn,Cu和Zn 11种微量、常量元素的含量。结果显示刺老苞根皮中含有丰富的微量元素和较高的总黄酮,微量元素含量较高的是Ca,Mg,Se,Ga,Cu和Zn元素。实验结果为探讨刺老苞根皮中总黄酮含量与微量元素的关系及研究刺老苞根皮中微量元素与治疗骨伤类疾病的关系提供了有用的数据。

刺老苞根皮的4种单体化合物分离制备鉴定及其对原代破骨细胞的影响

目的文章对刺老苞根皮进行化学成分及其对原代破骨细胞影响研究。方法采用大孔吸附树脂、硅胶柱、ODS-C_(18)以及制备型HPLC等方法进行分离纯化,结合理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。体外培养原代破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色及骨吸收甲苯胺蓝染色进行鉴定。CCK-8细胞毒性检测法、TRAP阳性细胞数实验及Real-time PCR(RT-PCR)与Western blot法测定骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)的表达情况检测化合物对破骨细胞的影响。结果成功从刺老苞根皮70%乙醇提取物中分离鉴定了4个化合物,分别是:屏边三七皂苷R_(2)、楤木皂苷C、楤木皂苷A、竹节人参皂苷IVa。在0~50μg·mL^(-1)浓度范围可排除化合物对破骨细胞抑制的假阳性结果。与对照组相比,4个化合物低、中、高浓度(0.5μg·mL^(-1)、5μg·mL^(-1)、50μg·mL^(-1))组OPG mRNA与蛋白表达有所升高,RANKL mRNA与蛋白表达有所降低,破骨细胞数目均有所减少,数据有统计学差异意义(P<0.05或P<0.01)。结论从刺老苞根皮中分离得到的4个单体化合物对原代破骨细胞有一定的抑制活性,为刺老苞根皮治疗骨质疏松症的物质基础研究提供依据。