辽东楤木叶总皂苷提取工艺研究

以总皂苷提取率、两种质量标志性皂苷成分的提取率为指标探索辽东楤木叶药材中皂苷的提取工艺。分别考察药材浸泡达饱和的时间、回流提取时乙醇溶液用量、提取时间、提取次数以及乙醇溶液浓度对辽东楤木叶皂苷提取率的影响,并采用正交实验法对辽东楤木叶总皂苷的提取工艺进行优化。结果表明,药材经乙醇水溶液浸泡3h以上达到吸收饱和;加8倍量的70%乙醇水溶液回流提取3次,每次2.5h,所得的辽东楤木叶总皂苷提取率及两种指标性皂苷提取率均较高。

辽东楤木总皂苷联合酵母硒对C57小鼠的降血糖作用

[目的]探究辽东楤木总皂苷联合酵母硒对2型糖尿病小鼠血糖的影响,为研制治疗糖尿病的新药物提供参考。[方法]选用60只C57小鼠,10只为对照组(A组),其余采用30 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病模型作为试验组。建模成功后随机分成B、C、D、E、F组,即模型组、二甲双胍组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+1.5 mg/kg)组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+1.0 mg/kg)组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+0.5 mg/kg)组,每组各10只,连续治疗4周,采用血糖仪、全自动糖化血红蛋白分析仪、全自动生化分析仪对C57小鼠尾静脉血液中空腹血糖、糖化血红蛋白、血脂、口服葡萄糖耐量进行检测。[结果]与B组相比,各试验组均有不同程度的变化,C组、D组优于其他各组,且二组之间差异不显著。D组FBG降低了4.86 mmol/L,HbA1c水平下降了3.87%,TC、TG和LDL水平分别下降了1.18、0.02、1.72 mmol/L,而HDL显著升高0.42 mmol/L。口服糖耐量检测2 h恢复至餐前水平。[结论]120 mg/kg辽东楤木总皂苷联合1.5 mg/kg酵母硒降血糖效果最佳。

不同采收期辽东楤木叶的功能成分及其抗氧化活性

为给辽东楤木(Aralia elata)适时采收提供理论依据,以栽培型辽东楤木为试验材料,分析了辽东楤木叶在不同采收时期(S1时期,2023年4月10日;S2时期,2023年4月30日;S3时期,2023年5月20日;S4时期,2023年6月9日)的生物量、光合色素含量、总酚和总黄酮含量、抗氧化能力。同时,建立了高效液相色谱(HPLC)的检测方法,测定辽东楤木皂苷A、辽东楤木皂苷V、辽东楤木皂苷X的含量,并且基于高效液相色谱-质谱代谢组学技术,对比分析了不同采收期辽东楤木在次生代谢产物上的差异。结果表明:(1)辽东楤木叶鲜质量、干质量、光合色素含量均随着生长而增加,在S4时期达到最大值(;2)总酚和总黄酮含量在S1时期达到最大值(1.36 mg·g^(-1)、29.38 mg·g^(-1));(3)S1时期DPPH自由基清除能力最强(IC_(50)为0.262 g·L^(-1)),S2时期ABTS自由基清除能力最强(IC_(50)为0.511 g·L^(-1));(4)辽东楤木皂苷A的含量在S4时期达到最大值,为12.90 mg·g^(-1),辽东楤木皂苷V和辽东楤木皂苷X在S2时期的含量显著高于其他时期,分别为1.53、3.30 mg·g^(-1);(5)共鉴定了24种酚类代谢物,4个时期的酚类化合物总量分别为64.84、119.31、101.95、89.32 mg·g^(-1),其中C6C1骨架化合物(原儿茶酸、龙胆酸),C6C3C6骨架化合物(芦丁),C6C3骨架化合物(咖啡酸)在S2时期显著积累。综上所述,综合考虑功能成分含量、抗氧化活性和食用性认为,S2时期为最适宜的采收时间。

去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一。方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧6 h复氧3 h心肌细胞损伤模型,并于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为2.5,1.0和0.1 mg.L-1的DCⅣa。检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量,丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。MTT法检测心肌细胞存活率。结果DCⅣa(2.5,1.0 mg.L-1)显著减少缺氧及复氧后LDH和CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,提高心肌细胞存活率。结论DCⅣa为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一,可减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞具有直接的保护作用。

龙牙楤木皂苷Ⅳ调控SOCS3/STAT3通路对骨质疏松大鼠骨重建的影响

目的:探讨龙牙楤木皂苷Ⅳ对骨质疏松大鼠骨重建的影响及相关机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、龙牙楤木皂苷Ⅳ低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg^(-1))及龙牙楤木皂苷Ⅳ+信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路抑制组(100 mg·kg^(-1)+3.75 mg·kg^(-1)),每组8只。除假手术组外,其余各组大鼠构建骨质疏松大鼠模型。造模后第30天开始,龙牙楤木皂苷Ⅳ各剂量组灌胃给药,假手术组和模型组大鼠给与等体积生理盐水,1次/d,持续8周;STAT3通路抑制组大鼠在灌胃给与龙牙楤木皂苷Ⅳ的同时腹腔注射Stattic(其余组大鼠腹腔注射等量生理盐水),每2 d注射1次,持续8周。测定大鼠血清及骨组织中Runt相关转录子-2(Runx2)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(AKP)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平,检测股骨骨密度(BMD),观察股骨组织病理变化,检测骨组织中细胞因子信号负调控因子3(SOCS3)、p-STAT3/STAT3蛋白水平。结果:与模型组相比,龙牙楤木皂苷Ⅳ低、中、高剂量组大鼠血清Runx2、BMP2、AKP水平,骨组织中Runx2、BMP2、AKP、p-STAT3/STAT3蛋白水平及股骨BMD值显著升高(P<0.05),血清RANKL水平及骨组织中RANKL、SOCS3蛋白水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05),股骨组织病理变化得到改善。与龙牙楤木皂苷Ⅳ中、高剂量组相比,龙牙楤木皂苷Ⅳ+STAT3通路抑制组大鼠以上各指标差异有统计学意义(P<0.05),股骨组织病理变化加重。结论:龙牙楤木皂苷Ⅳ可抑制SOCS3表达,激活STAT3通路,抑制骨吸收并促进骨形成,改善骨质疏松大鼠骨重建情况。

龙牙楤木总皂苷通过调控AMPK/Nrf2信号抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究龙牙楤木总皂苷对AMPK/Nrf2信号通路的影响。方法:将人心肌细胞AC16进行体外培养,分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、铁离子螯合剂对照组,铁离子螯合剂组、龙牙楤木总皂苷低(0.02μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷中(0.1μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷高(0.5μg/mL)浓度组,丹参滴丸(50μg/mL)阳性对照组,AMPK抑制剂Compound C(5μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组,Nrf2抑制剂ML385(2μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组。MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内Fe^(2+)、ROS水平;免疫荧光法检测脂质过氧化物及GPX4、ACSL4蛋白表达;qRT-PCR检测GPX4、ACSL4 mRNA表达,Western Blot检测GPX4、ACSL4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达;结果:与空白对照组比较,模型组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著降低,Fe^(2+)含量、ROS和脂质过氧化水平、ACSL4 mRNA表达显著升高,p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,铁离子螯合剂组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著升高,Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4 mRNA表达显著降低(P<0.01);龙牙楤木总皂苷各组和丹参滴丸组细胞存活率及GPX4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著升高,心肌细胞中Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与龙牙楤木总皂苷组比较,Compound C+龙牙楤木总皂苷组和ML385+龙牙楤木总皂苷组细胞存活率显著降低,Fe^(2+)含量显著升高,Nrf2蛋白表达显著降低,Compound C+龙牙楤木总皂苷组ROS和脂质过氧化水平显著升高,p-AMPK蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:龙牙楤木总皂苷可通过激活AMPK/Nrf2信号通路,抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

辽宁楤木嫩叶中三萜皂苷的分离与结构鉴定

目的:对辽宁楤木Aralia elata(Miq.)Seem.嫩叶中的三萜皂苷类成分进行分离与鉴定。方法:通过乙醇回流提取,运用硅胶、AB-8型大孔吸附树脂、ODS柱、制备HPLC进行分离纯化,利用NMR和MS谱进行化合物的结构鉴定。结果:从辽宁楤木嫩叶中分离得到15个化合物,分别鉴定为:常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(1)、楤木皂苷A(2)、刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(3)、齐墩果酸-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、anchusosid 2(6)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、竹节参皂苷Ⅳa(9)、randianin(10)、macranthoside A(11)、常春藤苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(13)、常春藤皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(14)、刺囊酸-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(15)。结论:其中,化合物4、8、11、13、14为首次从该属植物中分离得到。

辽东楤木药理作用研究进展

中国传统药材辽东楤木[Aralia elata(Miq.)Seem.]又称龙牙楤木,具有“补气安神,强精滋肾,祛风活血”的功效,用于治疗神经衰弱、阳虚气弱、肾气不足、脾阳虚衰之水湿停滞、消渴、跌打损伤等症。楤木皂苷类化合物是其发挥药理作用的主要物质基础。辽东楤木具有广泛的现代药理学作用,主要包括通过调控离子稳态及抑制炎症发挥抗心肌缺血和缓解继发性心肌缺血再灌注损伤的作用;通过抑制肿瘤细胞增殖促进肿瘤细胞凋亡及增强机体免疫来发挥抗肿瘤作用;通过调控机体糖脂代谢发挥降血糖、调血脂药理作用;以及保肝护肝、神经保护和抗炎、镇痛作用。未来,辽东楤木药理作用机制的深入研究将有利于促进其开发及利用。本文综述了国内外近二十年来对辽东楤木的相关研究,并提出了针对辽东楤木的药理研究新思路,旨在为同行提供参考。

辽东楤木三萜皂苷PDR转运蛋白筛选与表达模式分析

植物多向耐药性(Pleiotropic drug resistance,PDR)蛋白属于三磷酸腺苷结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白ABCG亚族,在植物次生代谢产物转运特别是萜类物质跨膜转运中发挥重要作用。基于辽东楤木全基因组测序鉴定出21个PDR转运蛋白,且主要为细胞膜蛋白,该基因在12对染色体上均有分布,其中5号染色体上分布较多。共线性分析结果表明,部分PDR基因在进化过程中发生基因串联复制事件,并可能存在基因多拷贝扩增现象。基因结构分析结果表明,17个基因含有PDR基因特有结构域,且启动子上含有多种激素和非生物胁迫响应相关顺式作用元件。组织特异性表达模式分析结果表明,PDR基因主要在辽东楤木叶片中高表达。为筛选与辽东楤木三萜皂苷转运相关的PDR转运蛋白,对基因编码区序列、蛋白结构、跨膜螺旋等进行分析,初步筛选出7个结构完整的PDR转运蛋白。进一步通过系统进化分析、基因表达与皂苷含量的关联分析筛选出2个可能与楤木皂苷转运相关的PDR基因(AE02G00218和AE12G01725)。两个基因均受外源激素MeJA、SA和机械损伤诱导上调表达。以上研究为萜类物质转运相关蛋白鉴定与功能研究提供新思路和基因资源。

辽东楤木皂苷含量测定方法的研究

以辽东楤木为原料,探究辽东楤木总皂苷含量的测定方法,对硫酸-甲醇比色法、香草醛-浓硫酸比色法和香草醛-高氯酸比色法进行方法性能比较,实验证明硫酸-甲醇比色法操作简单,准确有效,可用于测定辽东楤木总皂苷含量,为后续辽东楤木的加工生产奠定了一定的理论基础。

龙牙楤木繁育技术与药理活性成分的研究进展

龙牙楤木是五加科楤木属多年生木本植物,在我国东北地区分布广泛,是一种药食兼用价值很高的经济植物。近年来,以林菜种植模式为代表的林下经济已经成为当代林业发展的一种重要形式,由于龙牙楤木具有较高的营养价值、药理活性等诸多优点,受到了广泛的重视,但对于其化学成分与药理活性等诸多问题还并不明确。与此同时,人们的过度采摘也严重破坏了龙牙楤木资源,高效的繁育栽培技术也显得尤为重要。为此,本研究综述龙牙楤木的繁育与栽培技术、化学成分和药理活性的相关研究进展,以期为龙牙楤木资源的开发与利用提供科学依据。龙牙楤木的繁殖方式可分为种子繁殖与无性繁殖2种;由于种子休眠程度较深,播种前一般需进行层积处理,赤霉素浸种与高低变温催芽会一定程度上提高龙牙楤木种子的发芽率;根段繁殖是龙牙楤木的主要繁殖方式,根段长度对发芽率与出苗率有显著影响,但根段儿粗细则与出苗无显著影响;龙牙楤木幼苗需在半荫蔽条件下生长,而成熟植株则需要全光照条件;龙牙楤木含有大量对人体有益的化学成分,研究最多的是皂苷类化合物与多糖,自首次从龙牙楤木根皮中分离得到皂苷以来,人们不断地从龙牙楤木各器官中分离得到新的皂苷,并发现根皮中皂苷含量最高;而对于其他化学成分如挥发油、维生素以及微量元素等关注较少,有待于深入研究;对于龙牙楤木药理活性的研究多以皂苷抗肿瘤活性为主,其抗肿瘤的主要作用机制是抑制肿瘤细胞分裂,增殖或诱导肿瘤细胞凋亡,不同类型的肿瘤,皂苷抗肿瘤机理也有所差异;此外,龙牙楤木植株内多糖以及蛋白等也具有一定的抗肿瘤活性,对于除皂苷外其他化学成分抗肿瘤机理的报道还相对较少,今后需要进一步研究。针对现有研究不足,今后研究中应关注如何利用分子生物学手段阐述龙牙楤木种子的休眠机理、龙牙楤木重要活性物质合成途径以及抗癌机制。另外,还需进一步利用代谢组学与指纹图谱技术更全面地对龙牙楤木资源进行评价与鉴定。

星点设计-效应面法优化龙芽楤木叶提取工艺

目的:星点设计-效应面法优化龙芽楤木叶的提取工艺。方法:以乙醇体积分数、提取时间、溶媒比为自变量,龙芽楤木叶总皂苷含量得率为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用效应面法选取较佳工艺,并进行预测分析。结果:确定最优提取工艺为20倍量70%乙醇,提取3次,每次2.5 h,提取预测值与理论值偏差为-2.41%,二项式拟合复相关系数r=0.9617。结论:星点设计-效应面法优化的龙芽楤木叶提取工艺,方法简便,精密度更高,可预测性较优。

辽东楤木芽的化学成分(III)

目的分离、鉴定辽东木(Aralia elata(Miq.)Seem.)芽提取物(总皂苷)中的化学成分。方法利用硅胶柱色谱,制备高效液相柱色谱进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果得到5个化合物,分别鉴定为Elatoside F(1)、Araloside G(2)、CongmunosideⅤ(3)、Congmuno-sideⅨ(4)、3O[βDglucopyranosyl(1→2)][βDglucopyranosyl(1→3)]αLarabinopyranosylhederagenin(5)。结论化合物5为一新天然产物。

超声波提取刺嫩芽中齐墩果酸类皂苷的工艺研究

以本溪产刺嫩芽为原料,通过单因素试验和正交试验研究了超声波提取刺嫩芽中总皂苷的提取工艺条件和参数。结果表明:刺嫩芽中含有丰富的齐墩果酸类皂苷,皂苷的最大吸收波长为291 nm。皂苷浓度为2～6μg/mL时吸收曲线呈现良好的线性关系。正交试验结果表明:影响超声波提取皂苷的因素从大到小排列依次是料液比、温度、超声波处理时间、乙醇体积分数。当乙醇体积分数为100%,温度为65℃,超声波时间为20 min,料液比1:20时刺嫩芽齐墩果酸类皂苷提取率最大为8.7%。

闪式提取法提取龙牙楤木中总皂苷的工艺研究

优选龙牙楤木总皂苷的最佳提取工艺。采用闪式提取法提取龙牙楤木总皂苷,运用正交实验法对影响总皂苷提取率的条件进行优化,采用比色法进行含量测定。确定最佳工艺为用70%乙醇,180V提取电压,提取90s。该工艺简单,迅速,提取率高,可用于龙牙楤木中总皂苷的提取。

龙牙楤木药理作用研究进展

目的总结龙牙楤木近年来的药理作用研究进展。方法围绕龙牙楤木的药理作用对近十年的文献报道进行系统的总结,并对其研究进展进行归纳分类。结果现代药理研究显示,龙牙楤木所含的皂苷类化合物、多糖等主要成分具有保护心血管、抗肿瘤、保肝、抗炎等多种药理作用,其作用机制多与离子通道、细胞凋亡、炎症因子等有关。结论龙牙楤木对多种疾病具有重要的药理作用且其作用靶点多样,今后应从细胞、分子水平进一步揭示其作用机制,为龙牙楤木作为药品的开发利用提供科学依据。

辽东楤木芽中的化学成分(I)

目的分离、鉴定辽东木 (Araliaelata(Miq )Seem )芽提取物 (总皂苷 )中的化学成分。方法利用硅胶柱色谱 ,制备高效液相柱色谱进行分离纯化 ,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果得到 5个化合物 ,分别鉴定为congmuyenosideA(1) ,congmuyenosideB(2 ) ,木皂苷Ⅶ(congmunosideⅦ ,3) ,3 O β D glucopyranosyl (1→ 3) α L arabinopyranosylechinocysticacid(4) ,腺苷 (adenosine,5 )。结论化合物 4和 5为首次从该属植物中分离。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定辽东楤木不同部位中5种皂苷类成分的含量

建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）用于测定辽东楤木不同部位中的楤木皂苷Ⅱ、楤木皂苷Ⅳ、楤木皂苷Ⅴ、楤木皂苷Ⅹ和楤木叶皂苷Ⅱ的含量,并比较了楤木不同部位中上述5种皂苷的含量差异。以Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）为分析柱,以乙腈和0.1%（体积分数）甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL/min。在电喷雾正离子多反应监测（MRM）模式下进行检测。结果表明该方法中楤木皂苷Ⅱ、楤木皂苷Ⅳ、楤木皂苷Ⅴ、楤木皂苷Ⅹ和楤木叶皂苷Ⅱ分别在0.17-108μg/L、0.53-329μg/L、0.77-480μg/L、0.77-480μg/L和0.82-510μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r^2）均大于0.999,提取回收率为99.0%-100.2%。该方法简单、快速、灵敏,可用于测定辽东楤木药材不同部位中的皂苷类成分的含量。测定结果发现楤木不同部位中上述5种皂苷总量多少的顺序为根皮〉叶〉种子〉芽。

辽东楤木芽中的一个新三萜皂苷

目的对从辽东木芽中提取的总皂苷进行化学成分的研究。方法通过硅胶柱色谱和制备HPLC等手段分离,利用理化性质和光谱方法鉴定。结果得到化合物1,鉴定为3O[βDglu-copyranosyl(1→3)βDglucopyranosyl]caulophyllogenin。结论该化合物为未见文献报道的新化合物,命名为木芽皂苷Ⅰ(congmuyanosideⅠ)。

辽东楤木叶有效部位中楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ及总皂苷质量控制

目的建立HPLC-ELSD法测定辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ量及可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量的方法。方法采用HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ,Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,体积流量0.7 mL/min,柱温35℃,漂移管温度115℃,载气体积流量3.2 L/min。采用可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量,检测波长550 nm。结果楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ、辽东楤木叶总皂苷分别在1.253～8.768μg(r=0.999 7),1.251～8.767μg(r=0.999 7),0.1549～1.549 mg(r=0.999 8)呈良好的线性关系;加样回收率分别为99.67%(RSD为1.30%),99.17%(RSD为0.97%),99.57%(RSD为0.53%)。结论本实验采用的方法简便快速、准确、重复性好,可用于辽东楤木叶有效部位中皂苷类成分的质量控制。